正交試驗(yàn)結(jié)合血乳酸測(cè)定優(yōu)選淫羊藿苷抗大鼠運(yùn)動(dòng)性疲勞方案

尚茂林 縱艷芳 童錦 焦賢春 項(xiàng)賢林

1 蚌埠醫(yī)學(xué)院第二附屬醫(yī)院（安徽蚌埠233040）

2 安徽財(cái)經(jīng)大學(xué) 3 安徽電子信息職業(yè)技術(shù)學(xué)院 4上海體育學(xué)院

淫羊藿苷 （Icariin，ICA）為小檗科植物淫羊藿（Epimedium grandiflorum）莖葉中提取出來(lái)的一種8-異戊烯基黃酮醇苷類化合物［1］，具有補(bǔ)肝腎、強(qiáng)筋骨、祛風(fēng)濕、抗衰老和提高免疫力等作用?？v艷芳等［2］報(bào)道，ICA有抗大鼠運(yùn)動(dòng)性疲勞的作用，但關(guān)于該藥的用法用量和訓(xùn)練方法與運(yùn)動(dòng)能力的關(guān)系鮮有報(bào)道。為優(yōu)選出ICA抗運(yùn)動(dòng)性疲勞的最佳方案，本實(shí)驗(yàn)從劑量、給藥時(shí)刻及訓(xùn)練方法3個(gè)因素進(jìn)行考察，結(jié)合血乳酸測(cè)定進(jìn)行綜合評(píng)價(jià)。

1 材料與方法

1.1 動(dòng)物與試劑

健康Sprague Dawley大鼠54只，雌雄各半，體重160～180 g，由蚌埠醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，動(dòng)物生產(chǎn)許可證號(hào)：SCXK（滬）2007-0005。

藥用級(jí)ICA，黃棕色粉末，純度20%，購(gòu)自陜西森弗生物技術(shù)有限公司（批號(hào)：SF20101012）。血乳酸試劑盒購(gòu)自上海榮盛生物技術(shù)有限公司。主要實(shí)驗(yàn)設(shè)備：全自動(dòng)生化分析儀（Hitachi 7170A）、游泳箱、電子天平、秒表。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 動(dòng)物分組

按正交試驗(yàn)L9（34）表要求，大鼠隨機(jī)分9組，每組6只，雌雄各3只。以ICA劑量、給藥時(shí)刻及訓(xùn)練方法（負(fù)重指尾部負(fù)鉛絲）3個(gè)因素進(jìn)行考察，每個(gè)因素取3個(gè)水平。具體見表1。

表1 正交試驗(yàn)的因素及水平

1.2.2 訓(xùn)練方法

大鼠購(gòu)進(jìn)后，先適應(yīng)性飼養(yǎng)3天，第4天起，每天上午8∶20開始游泳訓(xùn)練。各組分別按既定劑量、時(shí)刻喂藥（灌胃），負(fù)重下水游泳10 min，以后逐日延長(zhǎng)游泳時(shí)間。第1周周末游泳至40 min，第二周周末游泳至60 min，第三周起，每天游泳80 min。大鼠每日游泳1次，每周第6日休息，第7日繼續(xù)游泳，共練3周。

第3周最后一天8∶20，全部大鼠進(jìn)行無(wú)負(fù)重力竭游泳測(cè)試，記錄游泳時(shí)間。游泳水深40 cm，水溫（28±1）℃。將大鼠放入缸內(nèi)游泳，計(jì)時(shí)并注意觀察其狀態(tài)。當(dāng)大鼠沉入水中超過(guò)10 s不能浮出水面者視為力竭，從大鼠進(jìn)入缸中至力竭的時(shí)間為力竭游泳時(shí)間。

力竭后立即采用戊巴比妥麻醉，抽取腹動(dòng)脈血測(cè)試血乳酸。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

2 結(jié)果

按L9（34）表進(jìn)行正交試驗(yàn)，結(jié)果見表2。 表2中D列用于方差分析，以確定各因素對(duì)結(jié)果的影響力，結(jié)果見表3。表2結(jié)果顯示，ⅠA<ⅡA<ⅢA，ⅠB>ⅡB>ⅢB，ⅠC<ⅡC< ⅢC，說(shuō)明因素A取水平3好，因素B取水平1好，因素C取水平3好。

表2 正交試驗(yàn)結(jié)果

表3顯示，F(xiàn)B>19，說(shuō)明因素B對(duì)游泳結(jié)果影響顯著；9

表3 方差分析結(jié)果

表4顯示，第3組血乳酸水平最高，與1、4、6、7、8、9組相比，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），與2、5組相比，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。

表4 各組血乳酸水平

3 討論

淫羊藿、人參等是中藥緩解運(yùn)動(dòng)性疲勞，提高運(yùn)動(dòng)能力的研究熱點(diǎn)［3，4］。ICA具有調(diào)節(jié)機(jī)體免疫功能，擴(kuò)張血管，增加冠脈流量，耐缺氧、保護(hù)心肌缺血和促進(jìn)造血系統(tǒng)功能等功效［5］。

縱艷芳等［2］報(bào)道，30 mg·kg-1劑量的ICA可延長(zhǎng)大鼠力竭游泳時(shí)間，增強(qiáng)其乳酸脫氫酶活性，加快血乳酸清除，顯示了抗運(yùn)動(dòng)性疲勞的作用。有研究表明［6］，以100 mg·kg-1劑量ICA灌胃吸收情況較好，生物利用度為12.0%。增加灌胃劑量并不能明顯提高血藥濃度，而且吸收情況較差。故本實(shí)驗(yàn)取30 mg·kg-1、60 mg·kg-1和100 mg·kg-1三個(gè)劑量水平。

由表2可知，ⅠA<ⅡA<ⅢA，即因素A（ICA劑量）與游泳時(shí)間呈正相關(guān)，說(shuō)明較大劑量ICA產(chǎn)生的藥理效應(yīng)更大。ICA在體內(nèi)吸收快、消除迅速、分布廣泛，100 mg·kg-1劑量灌胃后最大血藥濃度出現(xiàn)在（31.27±2.86）min［6］。 表3誤差分析表明，因素B（喂藥時(shí)刻）對(duì)游泳時(shí)間影響最明顯。上午8∶00喂藥（游泳開始前20 min）效果最佳，表明此時(shí)較高的血藥濃度可更好地減輕大鼠疲勞，延長(zhǎng)游泳時(shí)間。因素C（訓(xùn)練方法）對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果影響不顯著，高負(fù)重訓(xùn)練組游泳時(shí)間稍長(zhǎng)于低負(fù)重組和無(wú)負(fù)重組，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

本實(shí)驗(yàn)以血乳酸為指標(biāo)輔助分析各方案優(yōu)劣。結(jié)果顯示，第7組大鼠 （A3B1C3方案）力竭游泳時(shí)間（159±10.96 min） 最長(zhǎng)， 其次為第4組A2B1C2方案（152±14.50 min）。 A3B1C3方案組血乳酸水平（21.68±2.31mmol·L-1） 稍高于A2B1C2方 案 組 （21.57±1.90 mmol·L-1），但兩組大鼠游泳時(shí)間及血乳酸水平差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。A3B1C3方案組游泳時(shí)間與第9組相比，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。A3B1C3方案組血乳酸水平在所有9組中為倒數(shù)第3低，血乳酸水平最高的是第3組（A1B3C3方案）和第5組（A2B2C3方案），這兩組均為高負(fù)重訓(xùn)練、較低的ICA劑量和每日運(yùn)動(dòng)后才喂藥。上述因素共同作用，導(dǎo)致血乳酸積累，游泳時(shí)間較短。鄒焰等［7］研究表明，淫羊藿可提高小鼠的耐缺氧和抗疲勞能力。另有報(bào)道［8］認(rèn)為，淫羊藿能升高雄性家兔血睪酮水平，本實(shí)驗(yàn)結(jié)果與上述報(bào)道基本相符。第7組平均游泳時(shí)間最長(zhǎng)，血乳酸水平較低，抗大鼠運(yùn)動(dòng)性疲勞最佳方案為A3B1C3方案。

［1］潘志偉，王秋娟，柳仁民，等.淫羊藿苷預(yù)適應(yīng)對(duì)乳鼠心肌細(xì)胞的保護(hù)作用.中國(guó)藥科大學(xué)學(xué)報(bào)，2007，38 （1）：73-76.

［2］縱艷芳，焦賢春，尚茂林.淫羊藿苷抗大鼠運(yùn)動(dòng)性疲勞的實(shí)驗(yàn)研究.吉林體育學(xué)院學(xué)報(bào)，2010，26（2）：90-92.

［3］許興濤，劉文，楊建宇，等.消除運(yùn)動(dòng)性疲勞常用中藥的研究回顧.光明中醫(yī)，2002，17（102）：35-39.

［4］王瑋，金吉中，郜葉紅，等.抗運(yùn)動(dòng)性疲勞單味中藥研究概述.中藥材，2004，27（2）：138-142.

［5］郭峰，趙納.淫羊藿藥理作用的研究現(xiàn)狀及展望.中國(guó)藥業(yè)，2007，16（24）：70-72.

［6］葉麗卡，陳濟(jì)民，劉四海，等.淫羊藿苷在大鼠體內(nèi)的藥代動(dòng)力學(xué).中國(guó)藥學(xué)雜志，1999，34（1）：33-36.

［7］鄒焰，陳瑋，范學(xué)良.淫羊藿、人參耐缺氧、耐疲勞及抗氧化作用的實(shí)驗(yàn)研究.遵義醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2001，24 （1）：15-16.

［8］呂紅斌，王嘉芙，岳珍.淫羊霍糖漿對(duì)家兔血漿睪酮水平的影響.中國(guó)運(yùn)動(dòng)醫(yī)學(xué)雜志，1998，17（1）：80-81.