睪丸或附睪精子ICSI治療無精子癥

王 麗， 陳家仙， 胡雪梅， 楊智敏

(遵義醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院 生殖中心， 貴州 遵義 563000)

睪丸或附睪精子ICSI治療無精子癥

王 麗， 陳家仙， 胡雪梅， 楊智敏

(遵義醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院 生殖中心， 貴州 遵義 563000)

目的比較睪丸和附睪精子ICSI治療無精子癥的臨床效果。方法分別用睪丸或附睪來源的精子進(jìn)行ICSI， 對其受精率、優(yōu)質(zhì)胚胎率、胚胎種植率和臨床妊娠率等指標(biāo)進(jìn)行評價。結(jié)果睪丸精子的受精率明顯低于附睪精子的受精率(P<0.001)，兩者的優(yōu)質(zhì)胚胎率、胚胎種植率和臨床妊娠率差異無顯著性(P>0.05)。結(jié)論附睪精子較睪丸精子有更強(qiáng)的受精能力，但不影響治療結(jié)局。

無精子癥;精子;卵胞漿內(nèi)單精子注射;手術(shù)取精

無精子癥是指育齡男性三次射出的精液經(jīng)離心沉淀后鏡檢均未發(fā)現(xiàn)精子。在男性不育群體中，無精子癥的發(fā)病率為10%～15%，是男性不育最嚴(yán)重的病因[1]。1992年，卵胞漿內(nèi)單精子注射(intracytoplasmic sperm injection，ICSI)技術(shù)的誕生,為無精子癥患者的治療提供了新的方法，并在臨床應(yīng)用取得成功，從而徹底終結(jié)了無精子癥患者不能擁有親子后代的歷史[2]。本文就我院生殖中心采用睪丸和附睪精子進(jìn)行 ICSI治療無精子癥的臨床結(jié)果報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1 研究對象 2008年1月至2010年12月到我院生殖中心行ICSI治療的無精子癥患者45例(45個周期)。入選病例均滿足以下條件：男方三次射出的精液經(jīng)離心沉淀后鏡檢均未發(fā)現(xiàn)精子；夫妻雙方均無染色體異常；女方無不孕因素；首次接受ICSI助孕。按照精子來源不同分為2組，A組為經(jīng)皮附睪穿刺取精(percutaneous epididymal sperm aspiration，PESA)的梗阻性無精子癥患者，B組為附睪穿刺取精失敗而行睪丸穿刺取精(testicular sperm extraction，TESE)的梗阻性無精子癥患者。

1.2 方法 ① 超促排卵及卵子獲取。超促排卵均采用我中心常規(guī)方案[3]；當(dāng)卵泡發(fā)育成熟肌注人絨毛膜促性腺激素(HCG)5000IU或10000IU，36h后行超聲引導(dǎo)下穿刺取卵術(shù)；②精子獲取與處理。采用經(jīng)皮附睪穿刺精子抽吸術(shù)(PESA)、睪丸穿刺精子獲取術(shù)(TESE)和開放性睪丸取精。

1.3 ICSI、胚胎培養(yǎng)、胚胎移植及妊娠結(jié)局評價。選取MⅡ期卵子行ICSI，ICSI后第1天觀察卵子受精情況，以雙原核(2PN)卵子作為正常受精卵。胚胎培養(yǎng)、胚胎質(zhì)量評價、胚胎移植及妊娠結(jié)局評價參見本中心常規(guī)[4]。

2 結(jié)果

2.1 兩組患者基本資料的比較。兩組患者平均年齡，平均不孕年限比較差異無顯著性(P>0.05)，(見表1)。

組 別n男方年齡女方年齡不孕年限PESA組3131.74±5.3127.57±4.424.54±3.41TESE組1431.36±5.2628.07±4.744.32±3.27

兩組卵子受精與胚胎發(fā)育情況的比較。PESA組的正常受精率明顯高于TESE組，差異具有顯著性(P<0.001)，兩組的優(yōu)質(zhì)胚胎率無明顯差異(P>0.05),(見表2)。

表2兩組卵子正常受精率與優(yōu)質(zhì)胚胎率的比較(%)

組 別受精率優(yōu)質(zhì)胚胎率PESA組90.29(251/278)69.89(130/186)TESE組75.51(111/147)*70.27(52/74)

注：*PESA組與TESE組比較，(P<0.001)。

2.2 兩組妊娠結(jié)局的比較。兩組胚胎種植率、臨床妊娠率和流產(chǎn)率比較，差異無顯著性(P>0.05),(見表3)。

表3兩組妊娠結(jié)局的比較(%)

組 別胚胎種植率臨床妊娠率流產(chǎn)率PESA組37.50(24/64)54.84(17/31)11.76(2/17)TESE組19.35(6/31)46.15(6/13)16.67(1/6)

3 討論

由于無精子癥患者射出的精液中不含有精子，因此ICSI技術(shù)所需的精子必需從附睪或睪丸獲得，由此相繼出現(xiàn)了多種從附睪及睪丸獲取精子的方法，包括顯微外科附睪精子抽吸術(shù)(MESA)、經(jīng)皮附睪穿刺精子抽吸術(shù)(PESA)和睪丸穿刺精子獲取術(shù)(TESE)，其中PESA/TESE技術(shù)簡單易行，創(chuàng)傷小，并發(fā)癥少，可重復(fù)操作，易被患者接受。本研究共行PESA/TESE取精45個周期，無1例發(fā)生術(shù)后感染，陰囊血腫及性功能障礙等術(shù)后并發(fā)癥，提示 PESA /TESE技術(shù)是安全有效的取精方式。

隨著ICSI技術(shù)不斷應(yīng)用于無精子癥的治療，不同來源精子ICSI的受精率是否存在差異越來越引起人們的關(guān)注。已有的研究表明，采用不同來源的精子進(jìn)行ICSI 治療可獲得相似的受精率[5-7]。本研究結(jié)果顯示睪丸精子的受精率明顯低于附睪精子的受精率，我們推測睪丸精子ICSI操作的困難程度較附睪精子高可能是導(dǎo)致受精率差異的原因之一，是否還與睪丸精子的成熟度較低有關(guān)尚不清楚，值得進(jìn)一步研究。

關(guān)于睪丸和附睪來源的精子對胚胎發(fā)育和妊娠結(jié)局的影響仍有爭議。一種觀點(diǎn)認(rèn)為，睪丸精子DNA(包括線粒體DNA和核DNA)的突變率明顯低于附睪精子DNA(包括線粒體DNA和核DNA)，睪丸精子ICSI所形成胚胎較附睪精子ICSI所形成胚胎具有更好的發(fā)育潛能，其妊娠率較高[8，9]，因此推薦在臨床中應(yīng)優(yōu)先選擇睪丸精子行 ICSI受精。另一種觀點(diǎn)認(rèn)為，大多數(shù)精子只有到達(dá)附睪遠(yuǎn)端后，在附睪及輸精管分泌的特定物質(zhì)的作用下才得以成熟并獲得受精的能力[10]，因此推薦在臨床中應(yīng)優(yōu)先選擇附睪精子行 ICSI受精。本研究結(jié)果顯示，采用睪丸精子和附睪精子行ICSI，其優(yōu)質(zhì)胚胎率，胚胎種植率和臨床妊娠率沒有差異，與多數(shù)文獻(xiàn)報(bào)道結(jié)果一致[5-7]。

ICSI技術(shù)不僅解決了男性不育的問題，同時也改變了受精的自然選擇過程。

ICSI是否會將有遺傳缺陷(包括染色體異常、基因突變或缺失)的精子注入卵子，并遺傳給下一代，是人們普遍關(guān)注并必須予以回答的問題。已有研究報(bào)告指出，ICSI可引起后代染色體非整倍體和結(jié)構(gòu)異常的幾率增加[11]，但大多數(shù)研究報(bào)告認(rèn)為，ICSI并不會提高后代畸形率的發(fā)生[12]。由于目前的大多數(shù)研究尚處于短期的跟蹤觀察階段，因此有必要對ICSI后出生的子代進(jìn)行持續(xù)隨訪以了解其遠(yuǎn)期預(yù)后。

[1] Jarow JP，Espeland MA，Lipshultz LI. Evaluation of theazoospermic patients[J]. J Urol，1989，142(1)：62-65.

[2]Palermo G，Joris K，Devroey P，et al.Pregnancies after intracytoplasmic injection of single spermatozoon into an oocyte[J]. Lancet，1992，340(1)：17-18.

[3]譚曉珊，譚兵兵，葉貴丹，等.體外受精-胚胎移植156個治療周期分析[J].貴州醫(yī)藥，2006，30(5)：402-404.

[4]譚兵兵，楊智敏，刁英.早期卵裂與胚胎形態(tài)學(xué)和生長速率聯(lián)合評分預(yù)測胚胎發(fā)育潛能[J].中國婦幼保健，2007,22(19)：2670-2672.

[5]王俊霞，孫海翔，胡婭莉，等.附睪及睪丸精子行ICSI治療無精子癥妊娠結(jié)局[J].中華男科學(xué)雜志，2004，10(10)：751-754.

[6]Buffat C，Patrat C，Merlet F，et al.ICSI outcomes in obstructive azoospermia：influence of the origin of surgically retrieved spermatozoa and the cause of obstruction[J].Hum Reprod，2006， 21(4)：1018-1024.

[7]歐蕾，郭藝紅，孫瑩璞，等.不同來源精子行卵胞質(zhì)內(nèi)單精子注射臨床妊娠結(jié)局分析[J].中華男科學(xué)雜志，2010，16(7)：656-659.

[8]徐志鵬，孫海翔，張寧媛.精子DNA損傷與輔助生殖技術(shù)[J].中華男科學(xué)雜志，2008，14(3)：259-263.

[9]Dozortsev D，Neme R，Diamond MP，et a l . Embryos generated using testicular spermatozoa have higher develomental potential than those obtained using epididymal spermatozoa in men with obstructive azoosperm ia[J]. Fertil Steril，2006, 86(3)：606-611.

[10]Borges E Jr， Rossi-Ferragut LM，Pasqualotto FF，et al . Testicular sperm results in elevatedm is carriage rates compared to epididymal sperm in azoospermic patients[J]. Sao Paulo Med J，2002，120(4)：122-126 .

[11] Bonduelle M，Van Assche E， Joris H，et al.Prenatal testing in ICSI pregnancies：incidence of chromosomal anomalies in 1586 karyotypes and relation to sperm parameters[J].Hum Reprod，2002，17(10)：2600-2614.

[12]Woldringh GH，Besselink1 DE，Tillema AHJ，et al.Karyotyping, congenital anomalies and follow-up of children after intracytoplasmic sperm injection with non-ejaculated sperm：a systematic review[J].Hum Reprod Update，2010，16(1)：12-19.

Intracytoplasmicsperminjectionforazoospermiabyusingepididymalortesticularsperm

Wangli，Chenjiaxian，Huxuemei，Yangzhimin

(Centre of Reproductive Medicine，The Affiliated Hospital of Zunyi Medical College，Guizhou Zunyi，563000，China)

ObjectiveTo compare the clinical results of intracytoplasmic sperm injection (ICSI) for azoospermia by using epididymal or testicular sperm.MethodsThe ICSI was performed using the sperm from epididymis or testis, respectively. The fertilization rate，the high quality embryo rate，the embryo implantation rate and the clinical pregnancy rate were evaluated.ResultsThe fertilization rate from testicular sperm was obviously lower than that from epididymal sperm (P<0.001). However, there was no significant difference for the high quality embryo rate, the embryo implantation rate and the clinical pregnancy rate between the use of epididymal and testicular sperm (P>0.05).ConclusionThe fertilization ability of epididymal sperm is better than that of testicular sperm，which couldn't change the treatment outcome.

azoospermia; sperm; intracytoplasmic sperm injection; surgical sperm retrieval

R698+2

B

1000-2715(2012)01-0066-02

[收稿2011-10-12;修回2011-11-15]

(編輯：王福軍)