高效液相色譜法測定丹參中丹參酮IIA的含量

何玲玲

（佛山市中醫(yī)院，廣東 佛山 528000）

丹參（Salvia Miltiorrhiza Bunge）為唇形科（Labiatae）鼠尾草屬多年生草本植物，傳統(tǒng)以根入藥。丹參味苦，性微寒，具活血化瘀、涼血消癰、清心除煩之功效。活性成分主要包括脂溶性成分和水溶性成分，丹參酮IIA是其脂溶性代表成分之一，相對含量較高，有擴張冠脈，抗心肌缺血等作用[1]。目前，高效液相色譜法（HPLC）已經(jīng)成為控制中藥質(zhì)量的最為有效的手段，而且很多資料中記錄了對丹參高效液相色譜的研究[2,3]，但對丹參的根、莖、葉中

丹參酮IIA的含量測定鮮有報道，本文通過對丹參各部位中丹參酮IIA含量的測定，以為今后中藥丹參的采集、部位選擇及加工提供一定的理論參考，現(xiàn)將研究結(jié)果報道如下。

1 實驗材料

1.1 實驗儀器

Waters 700高效液相色譜儀 （美國 Waters公司 ）；Waters 700紫外檢測器；色譜柱Hypersil ODSC18柱（ 4.6mm×250mm，5μm ）；BS110S電子天平（北京賽多利斯天平有限公司）；干燥箱（浙江省金壇市正基儀器有限公司，型號CS-202），電熱恒溫水浴鍋（北京長安科學(xué)儀器廠，型號：HH S11-2），超聲儀（ AUTOSC I ENCE，型號：AS5150A ）。

1.2 實驗藥品

丹參實驗材料來自于丹參酮IIA標準品（中國藥品生物制品檢定所提供，批號：20101213），甲醇（北京化工科技有限公司，色譜純），水為超純水，購于廣州致信飲片廠的唇形科植物丹參的干燥根、根莖及葉）。

2 方法和結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱Hypersil ODSC18柱（ 4.6mm×250mm，5μm）；流動相：甲醇∶水=75∶25；流速為1.2mL/min；柱溫為30℃；檢測波長為268～270nm。進樣量：10μL，色譜圖結(jié)果見圖1。

圖1 對照品丹參酮IIA高效液相色譜圖

2.2 對照品溶液的制備

精密稱取標準品丹參酮IIA 5.5mg，置25mL的棕色量瓶中，加甲醇溶液溶解并稀釋至刻度，搖勻后定溶，后精密量取2.5mL，置10mL棕色量瓶中，繼續(xù)采用甲醇稀釋至刻度，搖勻后定溶，放置于4攝氏度的冰箱中儲存，備用。

2.3 供試品溶液的制備

精密稱量丹參根、莖、葉粉末約6.0mg，放置于25mL 燒瓶中，準確加入甲醇5mL后，稱重，同時進行超聲提取30min，冷卻至室溫，再稱重，用甲醇補足減失的質(zhì)量，搖勻，取適量用0.22 μm微孔濾膜濾過，將藥液溶解于25mL容量瓶中，甲醇定溶至刻度，即得供試品溶液。放置于4攝氏度的冰箱中貯存?zhèn)溆谩?/p>

2.4 標準曲線的測定

精密吸取上述對照品溶液0. 25mL、0. 50mL、1.00mL、1.25mL、1.50mL 分別置于20mL的棕色量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，按照2.1色譜條件，分別進樣3次，每次10μL，記錄色譜圖（見圖1），以峰面積為縱坐標，相應(yīng)濃度為橫坐標，繪制回歸方程Y=7.4071×103X +0.0628×103（r =0. 9997），結(jié)果丹參酮IIA 在1.25～21.45μg/mL濃度范圍之間線性良好。

2.5 精密度測定

精密吸取丹參（6個月根）供試品溶液10.0μL，按照高蕭液相色譜測定方法，重復(fù)進樣6次，進行含量的測定，結(jié)果顯示丹參酮IIA峰面積的RSD為1.6%。

2.6 穩(wěn)定性實驗

對丹參（6個月根）供試品溶液，分別在第1、2、3、4、5、6h時分別進樣，每樣重復(fù)3次，結(jié)果進行考察，丹參酮IIA峰面積的RSD為2.01 %（n=6）。

2.7 重復(fù)性實驗

精密稱量丹參（6個月根）粉末約100mg，共計稱定6份，按“2.3”項操作制備供試品溶液，進行測定，丹參酮IIA含量的RSD為2.07%。

2.8 加樣回收率測定

精密稱量丹參（6個月根）粉末約6.0mg，共6份，按“2.3”項操作制備供試品溶液后，取1.0mL供試品，每份分別準確加入丹參酮IIA對照品儲備液1.0mL，進行測定。丹參酮IIA的平均加樣回收率為99.83%；RSD為2.04%（n=6），結(jié)果見表1。

表1 丹參酮IIA的加樣回收率測定結(jié)果

2.9 樣品的測定

按“2.3”項下操作制備供試品溶液，進樣10.0 μL進行檢測，測定結(jié)果顯示丹參的葉和根莖中并未檢出丹參酮IIA的含量；4～12月份根中丹參酮IIA含量分別1.87、2.04、2.96、3.01、2.27、1.97、1.41、1.11、1.22 μg/mL。

3 結(jié) 論

資料中的方法顯示，目前對于丹參及其制劑中有效成分的測定主要有薄層掃描法[4]、分光光度法[5]、毛細管電泳法[6]以及高效液相法。對于丹參中不同部位的成分的測定報道較少。本文通過采用反相高效液相色譜法對中藥丹參中不同部位的丹參酮IIA成分進行分析，結(jié)果顯示，本方法測定中藥丹參不同部位中丹參酮IIA，操作方法簡單，結(jié)果快速準確，重現(xiàn)性較好，乙醇∶水=75∶25；流速為1.2mL/min，進行測定，樣品中丹參酮IIA色譜峰與雜質(zhì)峰可以完全的進行分離，出峰的時間較短，峰形較好。因此，通過實驗過程篩選合適的色譜條件，可以作為測定丹參中有效成分丹參酮IIA的含量，從而為中藥丹參的選材、鑒定提供有效的理論參考。

[1]宋振玉.中草藥現(xiàn)代研究與應(yīng)用[M].北京:北京醫(yī)科大學(xué)中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué)聯(lián)合出版社,1996:481-491.

[2]李嫻,金傳山,吳德玲,等.HPLC同時測定丹參中丹參酮IIA與丹酚酸B的含量[J].安徽中醫(yī)學(xué)院學(xué)報,2007,26(3):47-49.

[3]李向平,楊雙杰,滿書文.高效液相色譜法測定寧神補心片中丹參酮IIA含量[J].中國醫(yī)院藥學(xué)雜志,2007,25(5):448-450.

[4]盧平,萬民,陳洪燕.四產(chǎn)地丹參主要成分的含量測定與分析[J].中國藥業(yè),2007,14(10):33.

[5]唐曉清,王康才,陳暄,等.丹參四個栽培類型的脂溶性成分的聚類分析[J].天然產(chǎn)物研究與開發(fā),2007,19(5):748.

[6]李翔,趙亮,張國慶,等.毛細血管電泳法測定丹參中丹酚酸B的含量[J].藥物分析雜志,2006,24(4):439.