薄層掃描法測(cè)定咽速康氣霧劑中膽酸的含量

黃榮增，蘇 超，張麗君 (湖北中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，湖北 武漢 430065)

孟軍華 (武漢市第三醫(yī)院藥劑科，湖北 武漢 430060)

蘇明武 (湖北中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，湖北 武漢 430065)

薄層掃描法測(cè)定咽速康氣霧劑中膽酸的含量

黃榮增，蘇 超，張麗君 (湖北中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，湖北 武漢 430065)

孟軍華 (武漢市第三醫(yī)院藥劑科，湖北 武漢 430060)

蘇明武 (湖北中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，湖北 武漢 430065)

目的：建立咽速康氣霧劑中膽酸的含量測(cè)定方法。方法：采用雙波長(zhǎng)反射法鋸齒形薄層掃描法(λs=385nm)測(cè)定膽酸的含量。結(jié)果：膽酸在1.16～5.80μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好(r=0.9993)，膽酸的平均加樣回收率為98.67%(RSD=1.5%)。結(jié)論：該方法準(zhǔn)確可靠，重現(xiàn)性好，為咽速康氣霧劑的質(zhì)量控制和評(píng)價(jià)提供了依據(jù)。

咽速康氣霧劑；薄層掃描；膽酸；質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)

六神丸是我國(guó)傳統(tǒng)的咽喉良藥，由于中藥傳統(tǒng)丸劑具有服用量較大、生產(chǎn)流程長(zhǎng)、易受微生物污染、質(zhì)量難以控制等諸多缺點(diǎn)，因此我們?cè)诹裢璧幕A(chǔ)上將其改進(jìn)成定位、速效、更安全的新型氣霧劑。我們參照文獻(xiàn)[1-4]，采用雙波長(zhǎng)反射法鋸齒形薄層掃描法測(cè)定制劑中膽酸的含量，為控制該制劑質(zhì)量提供可靠的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 儀器與試藥

CS-9000雙波長(zhǎng)飛點(diǎn)掃描儀(日本島津);硅膠G(青島海洋化工廠)；膽酸(供含量測(cè)定用，中國(guó)藥品生物檢定所，批號(hào)10078-0013)；咽速康氣霧劑(自制制劑)；其它試劑均為分析純。

2 實(shí)驗(yàn)方法與結(jié)果

2.1薄層與掃描條件

硅膠G板(規(guī)格200mm×200mm，厚度為0.3mm)，展開(kāi)劑為氯仿-乙酸乙酯-甲醇-冰乙酸(11∶5∶2∶2)，顯色劑為30%硫酸乙醇溶液。于105℃烘至斑點(diǎn)清晰，干燥冷卻，上蓋玻璃板密封。掃描波長(zhǎng)λs=385nm，λR=700nm，反射法鋸齒掃描，SX=3。

2.2對(duì)照品、供試品、陰性對(duì)照溶液的制備

2.2.1對(duì)照品溶液的制備 取經(jīng)五氧化二磷減壓干燥至恒重的膽酸對(duì)照品約1mg，精密稱定，置2ml容量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得(每1ml中含膽酸0.58mg)。

2.2.2供試品溶液的制備 取本品，除去帽蓋，冷卻至5℃，在鋁蓋上鉆一小孔，插入連有干燥橡皮管的注射針頭(勿與藥液面接觸)，橡皮管另一端放入水中，待拋射劑緩緩排出后，除去鋁蓋，精密量取藥液10ml，置圓底燒瓶?jī)?nèi)，揮干乙醇，加20%氫氧化鈉溶液40ml，加熱回流2h，放冷，加鹽酸20ml，搖勻，放冷，轉(zhuǎn)移至分液漏斗中，加乙酸乙酯振搖提取4次，每次30ml，合并乙酸乙酯液，蒸干，殘?jiān)蛹状?0ml使溶解，作為供試品溶液。

2.2.3陰性對(duì)照溶液的制備 按處方比例和工藝，制成不含人工牛黃的陰性樣品溶液，按供試品溶液的制備方法制備陰性對(duì)照溶液。

2.3線性關(guān)系考察

吸取膽酸對(duì)照品溶液2、4、6、8、10、12μl點(diǎn)樣，展開(kāi)，顯色，測(cè)定各斑點(diǎn)峰面積，以各點(diǎn)樣量斑點(diǎn)峰面積積分值對(duì)點(diǎn)樣量進(jìn)行線性回歸，得回歸方程y=0.0001x-0.0291，r=0.9993，表明膽酸在1.16～5.80μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。鑒于標(biāo)準(zhǔn)曲線不過(guò)原點(diǎn)，采用隨行標(biāo)準(zhǔn)外標(biāo)兩點(diǎn)法進(jìn)行含量測(cè)定。

2.4精密度試驗(yàn)

吸取膽酸對(duì)照品溶液5μl，在同一塊硅膠G薄層板上，點(diǎn)5個(gè)斑點(diǎn)，按上述薄層色譜和掃描條件，測(cè)定膽酸峰面積積分值，結(jié)果RSD為2.7%。

2.5重復(fù)性試驗(yàn)

取本品(批號(hào)100401)，除去帽蓋，冷卻至5℃，在鋁蓋上鉆一小孔，插入連有干燥橡皮管的注射針頭(勿與藥液面接觸)，橡皮管另一端放入水中，待拋射劑緩緩排出后，除去鋁蓋，精密量取藥液10ml，5份，照上述供試品制備方法制備供試品溶液，精密吸取供試品溶液3μl、對(duì)照品溶液3、6μl點(diǎn)在同一塊硅膠G薄層板上，按上述薄層色譜和掃描條件測(cè)定，計(jì)算樣品中膽酸含量平均值為 0.7289mg/ml。試驗(yàn)結(jié)果表明，測(cè)定結(jié)果的重復(fù)性良好，RSD為2.8%。

2.6穩(wěn)定性試驗(yàn)

取供試品溶液3μl點(diǎn)于薄層板上，按上述薄層色譜和掃描條件，間隔30min測(cè)定一次，共4次，結(jié)果表明，120min內(nèi)色譜斑點(diǎn)峰面積積分值基本不變，RSD為1.5%。

2.7加樣回收率試驗(yàn)

取本品(批號(hào)100401)，除去帽蓋，冷卻至5℃，在鋁蓋上鉆一小孔，插入連有干燥橡皮管的注射針頭(勿與藥液面接觸)，橡皮管另一端放入水中，待拋射劑緩緩排出后，除去鋁蓋，精密量取藥液(含量為0.7289mg/ml)5ml，5份，置圓底燒瓶?jī)?nèi)，分別精密加入一定量的膽酸對(duì)照品，照供試品溶液制備方法制備, 按上述薄層色譜和掃描條件測(cè)定。結(jié)果(見(jiàn)表1)表明本法回收率為98.67%，RSD為1.5%。

表1 加樣回收試驗(yàn)結(jié)果

2.8含量測(cè)定

表2 5批咽速康氣霧劑膽酸含量測(cè)定結(jié)果

取本品(批號(hào)為100401、100402、100403、100501、100502)，照上述供試品溶液制備方法分別制備供試品溶液，按上述薄層色譜和掃描條件測(cè)定，測(cè)得峰面積積分值，計(jì)算含量，結(jié)果見(jiàn)表2。

3 討 論

膽酸是方中人工牛黃所含的主要有效成分，我們以膽酸為指標(biāo)，進(jìn)行了薄層掃描測(cè)定方法的研究。參考有關(guān)文獻(xiàn)，對(duì)多種薄層色譜和掃描條件進(jìn)行了考察，經(jīng)試驗(yàn)研究選擇氯仿-乙酸乙酯-甲醇-冰乙酸(11∶5∶2∶2)作為展開(kāi)劑，30%硫酸乙醇溶液作為顯色劑。于105℃烘至斑點(diǎn)清晰，干燥冷卻，上蓋玻璃板密封。掃描波長(zhǎng)λs=385nm，λR=700nm，反射法鋸齒掃描，SX=3。該方法簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確、選擇性好、陰性無(wú)干擾，可作為該制劑的含量測(cè)定方法。

膽酸對(duì)照品易吸水,使用前應(yīng)減壓干燥至恒重；膽酸多以其鹽存在于人工牛黃及其制劑中,故在供試品溶液制備時(shí),加入20%氫氧化鈉溶液加熱回流,目的是促使其水解完全,加鹽酸酸化使萃取完全。

[1]衛(wèi)生部.中國(guó)藥典(一部)[S].2005.

[2] 傅軍，周漩，高曉霞，等.薄層掃描法測(cè)定珍黃液中膽酸的含量[J]. 中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志， 2006，12(3)：25-26.

[3]楊洪武，王崢，辛敏通，等.薄層掃描法測(cè)定人工牛黃及其制劑中膽酸的含量[J]. 中成藥，2003，25(4)：290-293.

[4]葉蓓蓓，潘莉，王棟，等.薄層掃描法同時(shí)測(cè)定人工牛黃中膽酸及豬去氧膽酸的含量[J]. 藥物分析雜志，2010，30(4)：706-709.

[編輯] 一 凡

10.3969/j.issn.1673-1409(R).2012.01.032

R917

A

1673-1409(2012)01-R057-02

2011 12 08

黃榮增(1972)，男，湖北黃梅人，講師，博士，主要從事中藥復(fù)方物質(zhì)基礎(chǔ)及作用機(jī)理研究；通訊作者：蘇明武，EmAil：sumingwu@126.Com。