扁咽口服液生產(chǎn)過程中黃芩苷轉移率的研究

李 翔，劉皈陽，馬建麗，王曉青，高 磊，張清哲

(解放軍總醫(yī)院第一附屬醫(yī)院藥劑藥理科，北京 100037)

·藥物分析·

扁咽口服液生產(chǎn)過程中黃芩苷轉移率的研究

李 翔，劉皈陽，馬建麗，王曉青，高 磊，張清哲

(解放軍總醫(yī)院第一附屬醫(yī)院藥劑藥理科，北京 100037)

目的建立高效液相色譜法測定扁咽口服液中黃芩苷的含量，對其在生產(chǎn)過程中的轉移率進行評價。方法色譜柱：Agilent Zorbax Eclipse XDB-C18(4.6 mm × 150 mm，5 μm)；流動相：甲醇-0.5%冰醋酸溶液(45:55)；流速：1.0 ml/min；檢測波長：277 nm；柱溫：30 ℃；進樣量：10 μl。結果黃芩苷濃度在1.064～106.4 μg/ml范圍內與其峰面積線性關系良好(r=0.999 9)，平均回收率(n=6)為101.26%，RSD為1.92%。黃芩苷由藥材到中間品及由中間品到成品的轉移率分別為17.2%～19.0%和78.7%～79.4%。結論該方法快速、簡便、準確，可用于扁咽口服液的質量控制和生產(chǎn)工藝評價。

扁咽口服液；黃芩苷；含量；轉移率；高效液相色譜法

扁咽口服液是由黃芩、山豆根、連翹、穿心連、黃連、桔梗等多味中藥采用現(xiàn)代制劑工藝制成，具有清熱解毒，利咽生津，軟堅散結的功效，主要用于急慢性咽炎、扁桃體炎的治療。扁咽口服液作為本單位的醫(yī)院制劑，長期的臨床應用證明其具有良好的治療作用。黃芩作為該制劑的主要組分之一，具有清熱燥濕，瀉火解毒的功能[1]。黃芩中的主要成分黃芩苷被證明具有抗菌、抗病毒等的多種作用，是扁咽口服液的重要指標性成分之一[2]。含量測定成分的轉移率是中藥、天然藥物制備工藝研究中一項重要的指標。轉移率的穩(wěn)定程度是用于評價工藝的合理性，分析工藝可行性的重要內容。本研究以黃芩苷的含量為指標，對其在多批次扁咽口服液中的轉移率進行評價，方法快速簡便，結果準確可靠，可為扁咽口服液質量控制和生產(chǎn)工藝評價提供科學依據(jù)。

1 儀器與試藥

Agilent 1200型高效液相色譜儀(包括四元泵、VWD檢測器、自動進樣器、ChemStation化學工作站)，Mettler AE200電子天平；黃芩苷對照品(中國藥品生物制品檢定所，批號715- 200111)；藥材均由北京市鶴延齡中藥飲片有限公司提供；扁咽口服液(解放軍總醫(yī)院第一附屬醫(yī)院，批號：110919，110926，111010)；甲醇為色譜純，其它試劑均為分析純，水為重蒸水。

2 方法與結果

2.1溶液的制備

2.1.1對照品儲備液 精密稱取在60 ℃減壓干燥4 h的黃芩苷對照品10.64 mg，置于100 ml量瓶中，用甲醇定容，搖勻，即得106.4 μg/ml的對照品儲備液，置4 ℃冰箱保存。

2.1.2黃芩藥材供試品溶液 按照中國藥典2010年版一部黃芩項下的方法制備。

2.1.3扁咽口服液中間品和成品供試品溶液 按扁咽口服液處方組成與比例，分別稱取黃芩40 g及其它藥材，按生產(chǎn)工藝制成總體積為1 000 ml，得中間品(含黃芩0.04 μg/ml)。再加入適量殼聚糖，攪拌，靜置，過濾，濾液加水至總體積為1 000 ml，得成品(含黃芩0.04 μg/ml)。精密量取中間品或成品1 ml，置于10 ml容量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻。再精密量取1 ml，置10 ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，0.45 μm濾膜濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.1.4陰性對照溶液 按處方比例及生產(chǎn)工藝制備缺黃芩的陰性對照樣品，按“2.1.3”項下方法制成陰性對照溶液。

2.2色譜條件 色譜柱為Agilent Zorbax Eclipse XDB-C18(4.6 mm × 150 mm，5 μm)；流動相為甲醇-0.5%冰醋酸溶液(45:55)；流速為1.0 ml/min；檢測波長為277 nm；柱溫為30 ℃；進樣量為10 μl。在此條件下，黃芩苷與樣品中其他色譜峰分離良好，保留時間約為7 min，理論塔板數(shù)按黃芩苷峰計算不低于4 000。

2.3專屬性試驗 取對照品溶液、供試品溶液及陰性對照溶液，按“2.2” 項下色譜條件測定，記錄色譜圖。結果顯示，陰性對照對黃芩苷的測定無干擾。見圖1。

圖1 對照品及樣品HPLC色譜圖

2.4線性關系考察 精密吸取黃芩苷對照品溶液0.1、0.2、0.5、1.0、2.0 ml，置于10 ml容量瓶中，加甲醇定容，搖勻，即得系列對照品溶液。將系列對照品溶液與儲備液依次進樣10 μl，記錄黃芩苷峰面積。以黃芩苷濃度(μg/ml)為橫坐標(X)，峰面積為縱坐標(Y)，繪制標準曲線，得回歸方程為Y=31.09X+0.123 1(r=0.999 9，n=6)。結果表明，黃芩苷在1.064～106.4 μg/ml范圍內與峰面積呈良好的線性關系。

2.5精密度試驗 取濃度為10.64 μg/ml的對照品溶液，連續(xù)進樣6次測定。結果黃芩苷峰面積RSD為0.16%(n=6)，表明儀器的精密度良好。

2.6穩(wěn)定性試驗 取同一批號(批號：110919)扁咽口服液成品供試品溶液，在0、2、4、8、12、24 h分別進樣測定。結果黃芩苷峰面積RSD為1.06%(n=6)，表明供試品溶液在24 h內穩(wěn)定性良好

2.7重復性試驗 取同一批號(批號：110919)扁咽口服液成品樣品6份，按“2.1.3”項下方法制備供試品溶液，分別進樣測定。結果黃芩苷的平均含量為674.9 μg/ml，RSD為1.36%(n=6)，表明方法的重現(xiàn)性良好。

2.8回收率試驗 精密量取已知含量(674.9 g/ml)的同一批號(批號：110919)扁咽口服液樣品6份，精密加入適量黃芩苷對照品溶液，按“2.1.3”項下方法制備供試品溶液，分別進樣測定，計算回收率。結果平均回收率為101.26%，RSD為1.92%(n=6)，表明方法的回收率良好。

2.9樣品含量測定 按“2.1.3”項下方法，制備3批扁咽口服液供試品溶液，每批制備3份，分別進樣測定，計算各批次中間品和成品中黃芩苷占黃芩藥材(相當于口服液0.04 g/ml)的質量比含量(mg/g)和轉移率(%)，結果見表1。

表1 樣品含量測定結果及轉移率(n=3)

轉移率(%)=黃芩苷實測含量/溶液理論含量×100%

3 討論

3.1采用HPLC法測定黃芩苷含量的報道較多，以甲醇-水-磷酸的流動相體系較為多見[3～5]。經(jīng)本研究比較發(fā)現(xiàn)，采用甲醇-水-冰醋酸作為流動相體系，可以降低磷酸引起的基線波動，較好完成黃芩藥材、扁咽口服液中間品和成品中黃芩苷的檢測。另外，通過比較2%、1%和0.5%等不同濃度冰醋酸對分離的影響，發(fā)現(xiàn)0.5%冰醋酸即能取得滿意的分離效果。

3.2中藥制劑在生產(chǎn)中按照既定的工藝進行制備，藥材中成分的轉移率一般較為固定。從測定結果可以看出，黃芩苷在黃芩藥材制成中間品的過程中轉移率為17.2%～19.0%，從中間品到成品過程中，由于添加了殼聚糖進行澄清處理，造成黃芩苷的進一步損失，但其轉移率也能夠達到78.7%～79.4%。由此可以判定，盡管黃芩苷的轉移率較低，但其波動范圍不大，說明扁咽口服液的生產(chǎn)工藝是穩(wěn)定適用的。

3.3盡管黃芩苷在扁咽口服液的生產(chǎn)過程中轉移率較為穩(wěn)定，但從藥效成分的角度評價則相對偏低。因此，根據(jù)黃芩苷的化學性質，可以采用其他適宜的提取溶劑，提高黃芩苷的轉移率和含量，可以考慮將扁咽口服液開發(fā)成藥效更好、用量更小、使用更方便的顆粒劑的新劑型。

[1] 中國藥典2010年版. 一部[S]. 2010: 283.

[2] 雷 芳. 黃芩苷藥理作用研究進展[J]. 中國藥業(yè), 2010, 19(15): 87.

[3] 李玲玲, 趙蘭芬. 清開靈不同制劑中黃芩苷的含量測定[J]. 藥物分析雜志, 2011, 31(5): 950.

[4] 宋宗華, 王 鵬, 陳曉輝, 等. 中藥黃芩和一清顆粒中黃芩苷 HPLC定量分析方法學驗證參數(shù)限度考察[J]. 藥物分析雜志, 2010, 30(6): 1140.

[5] 張 捷, 譚生建, 王 歡, 等. 高效液相色譜法測定小兒潤肺止咳口服液中橙皮苷和黃芩苷的含量[J]. 藥物分析雜志, 2010, 30(8): 1451.

ResearchonthetransferrateofbaicalininpreparationofBianyanoralsolution

LI Xiang, LIU Gui-yang, AM Jian-li, WANG Xiao-qing, GAO Lei, ZHANG Qin-zhe

(Department of Pharmacy, First Affiliated Hospital, General Hospital of PLA, Beijing 100037, China)

ObjectiveTo establish the HPLC method for determination of baicalin in Bianyan oral solution, and evaluate the transfer rate in process of production.MethodsThe Agilent Zorbax Eclipse XDB-C18(4.6 mm × 150 mm, 5 μm) was used, the mobile phase consisted of methanol-0.5% acetic acid (45:55) , the flow rate was 1.0 ml/min, the detection wavelength was at 277 nm, the column temperature was at 30 ℃, the inject volume was 10 μl.ResultsA good linear correlation of baicalin was observed within the range of 1.064 ～ 106.4 μg/ml (r=0.999 9). The average recovery was 101.26% with RSD 1.92% (n=6). The transfer rates from Radix Scutellariae to intermediate sample and to Bianyan oral solution were 17.2%～19.0% and 78.7%～79.4%.ConclusionsThe method was rapid, simple and accurate, which could be used for the quality control and processing technique evaluation of Bianyan oral solution.

Bianyan oral solution; baicalin; contents; transfer rate; HPLC

李 翔(1976-)，男，主管藥師.Tel: (010)66867401，E-mail:lxbj@hotmail.com.

劉皈陽.Tel: (010)66867081，E-mail:liuguiy@gmail.com.

R917

A

1006-0111(2012)04-0289-03

10.3969/j.issn.1006-0111.2012.04.012

2012-01-03

2012-04-05