中藥金櫻子葉的化學(xué)成分研究

吳建林，王 平，高 鵬，曾 娜，劉香芳，王書一，沈 陽(yáng)，徐超斗

(1.山東中醫(yī)藥大學(xué)，山東 濟(jì)南 250355 ；2.北京同仁堂藥材公司，北京 100035；3.上海市兒童醫(yī)院，上海 201203；4.總后勤部衛(wèi)生部藥品儀器檢驗(yàn)所, 北京100071)

中藥金櫻子葉的化學(xué)成分研究

吳建林1，王 平2，高 鵬1，曾 娜3，劉香芳3，王書一3，沈 陽(yáng)3，徐超斗4

(1.山東中醫(yī)藥大學(xué)，山東 濟(jì)南 250355 ；2.北京同仁堂藥材公司，北京 100035；3.上海市兒童醫(yī)院，上海 201203；4.總后勤部衛(wèi)生部藥品儀器檢驗(yàn)所, 北京100071)

目的研究金櫻子RosaLaevigataMichx.嫩葉的化學(xué)成分。方法運(yùn)用硅膠柱色譜、凝膠柱色譜(Sephadex LH-20)以及半制備高效液相色譜等多種現(xiàn)代色譜技術(shù)進(jìn)行分離純化，根據(jù)理化性質(zhì)和波譜分析鑒定化合物結(jié)構(gòu)。結(jié)果從金櫻子葉的70%乙醇提取物乙酸乙酯部位分離鑒定得到12個(gè)化合物，分別為兒茶素(1)、槲皮素(2)、柚皮素(3)、山柰酚(4)、沒食子酸乙酯(5)、對(duì)羥基肉桂酸乙酯(6)、ω-hydroxypropioquaiacone (7)、3，4-二羥基苯乙醇(8)、鄰羥基苯甲酸(9)、莨菪亭(10)、乙基-α-D-呋喃阿拉伯糖苷(11)、甲基-O-β-D-葡萄糖苷(12)。結(jié)論化合物11為首次從薔薇屬植物中分離得到，化合物3、5～9為首次從金櫻子葉中分離得到。

金櫻子葉；化學(xué)成分；提取分離；結(jié)構(gòu)鑒定

金櫻子葉為薔薇科薔薇屬植物金櫻子RosalaevigataMichx.的嫩葉，性平味辛，主治癰腫、潰瘍、金瘡、湯火傷等?！堕}東本草》中記載“治湯火傷：金櫻葉焙干為末，調(diào)麻油涂患處，欲愈時(shí)加入鱉甲末?！泵耖g常用此法治療燒燙傷。文獻(xiàn)報(bào)道金櫻子葉70%乙醇提取物能明顯促進(jìn)SD大鼠深Ⅱ度燙傷創(chuàng)面愈合，并從中分離出一系列三萜類化合物[1]。為進(jìn)一步探索金櫻子葉治療燒燙傷的活性成分，本研究對(duì)采自安徽黃山的金櫻子葉進(jìn)行了系統(tǒng)的化學(xué)成分分析，從中分離鑒定得到12個(gè)化合物，分別為兒茶素(1)、槲皮素(2)、柚皮素(3)、山柰酚(4)、沒食子酸乙酯(5)、對(duì)羥基肉桂酸乙酯(6)、ω-hydroxypropioquaiacone(7)、3，4-二羥基苯乙醇(8)、鄰羥基苯甲酸(9)、莨菪亭(10)、乙基-α-D-呋喃阿拉伯糖苷(11)、甲基-O-β-D-葡萄糖苷(12)?；衔?1為首次從薔薇屬植物中分離得到，化合物3、5～9為首次從金櫻子葉中分離得到。

1 儀器與材料

1.1儀器與試劑 SGW X-4 顯微熔點(diǎn)儀(溫度計(jì)未校正，上海精密科學(xué)儀器有限公司)； MAT-212 質(zhì)譜儀(ES-MS)；Q-Tof-micro 質(zhì)譜儀(ESI-MS)； Bruker AC-400，AC-500 型核磁共振儀；JY6001 電子天平(上海恒平科學(xué)儀器有限公司)；BSZ-100 部分收集器(上海青浦滬西儀器廠)；WFH-201B紫外投射反射儀(上海精科實(shí)業(yè)有限公司)；柱色譜硅膠(200～300目和300～400目)、HSGF254硅膠薄層層析硅膠板(20 cm×20 cm)，均為煙臺(tái)市芝罘黃務(wù)硅膠開發(fā)試驗(yàn)設(shè)計(jì)廠；Sephadex LH-20(安發(fā)瑪西亞生物技術(shù)(上海)有限公司，Merck 公司)；HPLC：儀器 Waters 1525 泵，PDA 2996 檢測(cè)器(Waters 公司)；反相柱(SunFire Prep C18250×10 mm，5μm)。

1.2材料 藥材經(jīng)第二軍醫(yī)大學(xué)藥學(xué)院生藥教研室李紅方老師鑒定為金櫻子Rosa Laevigata Michx.的嫩葉。

圖1 化合物1～12的結(jié)構(gòu)

1.3提取與分離 取金櫻子干燥嫩葉(10 kg)，用70%乙醇水溶液滲濾提取10 d，減壓濃縮乙醇提取液得到水溶液2 kg。用水混懸后依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇等體積萃取，萃取液濃縮分別得到A(35 g)，B(100 g)，C(65 g)三部分。B部分經(jīng)硅膠柱色譜，以二氯甲烷-甲醇梯度洗脫，得到6個(gè)組分(Fr. 1～Fr. 6)。Fr. 2再經(jīng)凝膠柱色譜、硅膠柱色譜和半制備高效液相等色譜技術(shù)反復(fù)分離，得到化合物2(20 mg)，3(20 mg)，4(80 mg)，5(20 mg)，6(20 mg)，7(20 mg)，9(20 mg)，10(10 mg)，11(15 mg)。Fr. 4再經(jīng)凝膠柱色譜、硅膠柱色譜、薄層制備和重結(jié)晶等技術(shù)反復(fù)分離，得到化合物1(200 mg)，8(40 mg)，12(15 mg)。

2 結(jié)構(gòu)鑒定

2.1化合物1 白色無(wú)定型粉末(甲醇)，mp：94 ～ 95 ℃。12%硫酸香草醛顯色為鮮艷的紅色。ESI-MS給出準(zhǔn)分子離子峰m/z：313 [M + Na]+。1H-NMR(400 MHz, CD3OD)：δppm：6.83(1H, d,J=1.8 Hz, H-2′)，6.76(1H, d,J=8.1 Hz, H-5′)，6.72(1H, d,J=8.1, 1.8 Hz, H-6′)，5.92(1H, d,J=2.28 Hz, H-6)，5.85(1H, d,J=2.27 Hz, H-8)，4.56(1H, d,J=7.49 Hz, H-2)，3.98(1H, m, H-3)，2.77(1H, dd,J=5.44, 16.1 Hz, H-4a)，2.50(1H, dd,J=8.13, 16.1 Hz, H-4b)。13C-NMR(100 MHz, CD3OD)：δppm：83.1(C-2)，69.1(C-3)，28.8(C-4)，158.1(C-5)，96.6(C-6)，157.8(C-7)，95.8(C-8)，157.2(C-9)，101.1(C-10)，132.5(C-1′)，116.4(C-2′)，146.5(C-3′, 4′)，115.5(C-5′)，120.3(C-6′)。以上光譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道[2]兒茶素的數(shù)據(jù)基本一致，故鑒定化合物1為兒茶素。

2.2化合物2 黃色無(wú)定型粉末(甲醇)，mp：298 ～ 299 ℃。ESI-MS給出準(zhǔn)分子離子峰m/z：301 [M- H]+。1H-NMR(500 MHz, pyridine-d5)：δppm：13.40(1H, br.s, 5-OH)，12.13(3H, br.s, 7, 3, 3′, 4′-OH)，8.69(1H, s, H-2′)，8.19(1H, d,J=7 Hz, H-6′)，7.46(1H, d,J=8.5 Hz, H-5′)，6.83(1H, s, H-8)，6.79(1H, s, H-6)。13C-NMR(125 MHz, pyridine-d5)：δppm：147.8(C-2)，138.0(C-3)，177.4(C-4)，157.5(C-5)，99.3(C-6)，165.6(C-7)，94.4(C-8)，162.5(C-9)，104.6(C-10)，121.1(C-1′, 6′)，147.2(C-3′)，116.8(C-2′, 5′)。以上光譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道[3]槲皮素的數(shù)據(jù)基本一致，故鑒定化合物2為槲皮素。

2.3化合物3 白色無(wú)定型粉末(甲醇)，mp：246 ～ 249℃。ESI-MS給出準(zhǔn)分子離子峰m/z：271[M -H]+。1H-NMR(500 MHz, pyridine-d5)：δppm：7.61(2H, d,J=8.5 Hz, H-2′, 6′)，7.29(2H, d,J=9 Hz, H-3′, 5′)，6.56(1H, d,J=2 Hz, H-8)，6.47(1H, d,J=2 Hz, H-6)，5.56(1H, dd,J=3, 13 Hz, H-2)，3.35(1H, dd,J=13, 17 Hz, H-3b), 2.95(1H, dd,J=3, 17 Hz, H-3a)。13C-NMR(125 MHz, pyridine-d5)：δppm：79.8(C-2)，43.5(C-3)，196.5(C-4)，165.3(C-5)，97.4(C-6)，169.0(C-7)，96.4(C-8)，164.2(C-9)，102.9(C-10)，129.9(C-1′)，128.9(C-2′, 6′)，159.7(C-4′)，116.6(C-3′, 5′)。以上光譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道[4]柚皮素的數(shù)據(jù)基本一致，故鑒定化合物3為柚皮素。

2.4化合物4 黃色無(wú)定型粉末(甲醇)，mp：294 ～ 296 ℃。1H-NMR(400 MHz, pyridine-d5)：δppm：13.4(1H, br.s, 5-OH)，12.5(2H, br.s, 7, 4′-OH)，8.63(2H, d,J=8.74 Hz, H-2′, 6′)，7.38(2H, d,J=8.74 Hz, H-3′, 5′)，6.92(1H, d,J=1.7 Hz, H-8)，6.83(1H, d,J=1.7 Hz, H-6)。13C-NMR(100 MHz, pyridine-d5)：δppm：147.6(C-2)，137.9(C-3)，177.5(C-4)，162.6(C-5)，99.4(C-6)，165.7(C-7)，94.5(C-8)，160.8(C-9)，104.6(C-10)，123.1(C-1′)，157.6(C-4′)，130.6(C-2′, 6′)，116.5(C-3′, 5′)。以上光譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道[5]山柰酚的數(shù)據(jù)基本一致，故鑒定化合物4為山柰酚。

2.5化合物5 無(wú)色針晶(甲醇)，mp：153 ～ 155 ℃。ESI-MS給出準(zhǔn)分子離子峰m/z：221 [M + Na]+。1H-NMR(500 MHz, pyridine-d5)：δppm：7.92(2H, s, H-2, 6)，4.34(2H, q,J=7 Hz, H-2′)，1.25(3H, t,J=7 Hz, H-3′)。13C-NMR(125 MHz, pyridine-d5)：δppm：121.6(C-1)，110.3(C-2, 6)，141.2(C-4)，147.8(C-3, 5)，167.4(C-1′, C=O)，60.5(C-2′)，14.5(C-3′)。以上光譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道[6]沒食子酸乙酯的數(shù)據(jù)基本一致，故鑒定化合物5為沒食子酸乙酯。

2.6化合物6 無(wú)色針晶(甲醇)。ESI-MS給出準(zhǔn)分子離子峰m/z：215 [M + Na]+。1H-NMR(500 MHz, pyridine-d5)：δppm：8.02(1H, d,J=16 Hz, H-7)，7.68(2H, d,J=8.5 Hz, H-2, 6)，7.24(2H, d,J=8.5 Hz, H-3, 5)，6.67(1H, d,J=16 Hz, H-8)，4.34(2H, q,J=7 Hz, H-1′)，1.29(3H, t,J=7 Hz, H-2′)。13C-NMR(125 MHz, pyridine-d5)：δppm：126.2(C-1)，130.8(C-2, 6)，117.0(C-3, 5)，161.6(C-4)，145.2(C-7)，115.4(C-8)，167.5(C-9)，60.3(C-1′)，14.6(C-2′)。以上光譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道[7]對(duì)羥基肉桂酸乙酯的數(shù)據(jù)基本一致，故鑒定化合物6為對(duì)羥基肉桂酸乙酯。

2.7化合物7 無(wú)色粘稠狀物質(zhì)(甲醇)。ESI-MS給出準(zhǔn)分子離子峰m/z：219 [M + Na]+。1H-NMR(500 MHz, CD3OD)：δppm：7.55(1H, dd,J=2, 10 Hz, H-6′)，7.52(1H, s, H-2′)，6.85(1H, d,J=10 Hz, H-5′)，3.93(2H, t,J=5 Hz, H-3)，3.14(2H, t,J=5 Hz, H-2)，3.88(3H, s, OMe)。在NOESY譜中，可觀察到δH3.88(OMe)與7.52(1H, s, H-2′)有相關(guān)，6.85(1H, d,J=10 Hz, H-5′)與7.55(1H, dd,J=5, 10 Hz, H-6′)有相關(guān)，推斷甲氧基是在3′位上取代。13C-NMR(125 MHz, CD3OD)：δppm：200.0(C-1)，41.9(C-2)，59.2(C-3)，130.9(C-1′)，112.1(C-2′)，153.6(C-3′)，149.3(C-4′)，116.1(C-5′)，125.0(C-6′)，56.7(OMe)。以上光譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道[8]ω-Hydroxypropioquaiacone的數(shù)據(jù)基本一致，故鑒定化合物7為ω-hydroxypropioquaiacone。

2.8化合物8 白色無(wú)定型粉末(甲醇)。1H-NMR(400 MHz, CD3OD)：δppm：6.67(1H, d,J=8 Hz, H-5)，6.64(1H, d,J=1.9 Hz, H-2)，6.52(1H, dd,J=8, 2 Hz, H-6)，3.67(2H, t,J=7 Hz, H-8)，2.66(2H, t,J=7 Hz, H-7)。13C-NMR(100 MHz, CD3OD)：δppm：132.1(C-1)，116.6(C-2)，146.4(C-3)，144.9(C-4)，117.4(C-5)，121.5(C-6)，39.9(C-7)，64.8(C-8)。以上光譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道[9]3，4-二羥基苯乙醇的數(shù)據(jù)基本一致，故鑒定化合物8為3，4-二羥基苯乙醇。

2.9化合物9 黃色針晶(甲醇)，mp：161 ～ 162 ℃。ESI-MS給出準(zhǔn)分子離子峰m/z：137.0[M - H]+。1H-NMR(400 MHz, CDCl3)：δppm：10.3(1H, br.s)，7.95(1H, dd,J=1.4, 7.9 Hz, H-6)，7.53(1H, m, H-4)，7.03(1H, dd,J=0.49, 8.4 Hz, H-5)，6.94(1H, m, H-3)。13C-NMR(100 MHz, CDCl3)：δppm：111.3(C-1)，162.2(C-2)，117.8(C-3)，137.0(C-4)，119.6(C-5)，130.9(C-6)，174.9(C=O)。以上光譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道[10]鄰羥基苯甲酸的數(shù)據(jù)基本一致，故鑒定化合物9為鄰羥基苯甲酸。

2.10化合物10 黃色晶體(甲醇)，mp：203 ～ 204 ℃。紫外燈下顯強(qiáng)烈藍(lán)色熒光。ESI-MS給出準(zhǔn)分子離子峰m/z：191 [M-H]+。1H-NMR(500 MHz, pyridine-d5)：δppm：6.38(1H, d,J=10 Hz, H-3)，7.77(1H, d,J=10 Hz, H-4)，7.13(1H, s, H-5)，7.20(1H, s, H-8)，3.85(OMe)。在NOESY譜中，可觀察到δH3.85(OMe)與7.13(1H, s, H-5)有相關(guān)，7.13(1H, s, H-5)與7.77(1H, d,J=10 Hz, H-4)有相關(guān)，推斷甲氧基取代在6位上。13C-NMR(100 MHz, pyridine-d5)：δppm：161.6(C-2)，112.5(C-3)，144.2(C-4)，109.7(C-5)，151.2(C-6)，146.4(C-7)，104.2(C-8)，153.1(C-9)，111.3(C-10)。以上光譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道[11]莨菪亭的數(shù)據(jù)基本一致，故鑒定化合物10為莨菪亭。

2.11化合物11 無(wú)色油狀物(甲醇)，Molish反應(yīng)呈陽(yáng)性。ESI-MS (m/z)：201 [M + Na]+。1H-NMR(500 MHz, CD3OD)：δppm：4.86(1H, s, H-1)，1.20(3H, t,J=5 Hz, H-7)。13C-NMR(125 MHz, CD3OD)：δppm：109.5(C-1)，85.5(C-2)，83.8(C-3)，78.9(C-4)，64.5(C-5)，63.3(C-6)，15.7(C-7)。以上光譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道[12]乙基α-D-呋喃阿拉伯糖苷的數(shù)據(jù)基本一致，故鑒定化合物11為乙基α-D-呋喃阿拉伯糖苷。

2.12化合物12 無(wú)色方晶(甲醇)，mp：106 ～ 108 ℃，Molish反應(yīng)呈陽(yáng)性。ESI-MS (m/z)：217[M + Na]+。1H-NMR(500 MHz, DMSO)：δppm：4.02(1H, d,J=7.5 Hz, H-1)，3.37(OMe)。13C-NMR(125 MHz, DMSO)：δppm：103.9(C-1)，73.4(C-2)，76.7(C-3)，70.1(C-4)，76.8(C-5)，61.1(C-6)，56.0(OMe)。以上光譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道13]甲基-O-β-D-葡萄糖苷的數(shù)據(jù)基本一致，故鑒定化合物12為甲基-O-β-D-葡萄糖苷。

3 討論

金櫻子葉作為一種治療燒燙傷的草藥，在民間廣泛應(yīng)用。但迄今為止，對(duì)金櫻子葉的化學(xué)成分研究報(bào)道較少。作者對(duì)金櫻子葉70%乙醇提取物進(jìn)行了化學(xué)成分的系統(tǒng)分離，鑒定了12個(gè)化合物?；衔?1為首次從薔薇屬植物中分離得到，化合物3、5～9為首次從金櫻子葉中分離得到。化合物1～9為多酚類化合物，文獻(xiàn)報(bào)道[14]植物多酚對(duì)多種細(xì)菌、真菌、酵母菌都有明顯的抑制作用，這可能為金櫻子葉治療燒燙傷提供了作用依據(jù)。

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StudiesonthechemicalconstituentsinleavesofRosaLaevigataMichx

WU Jian-lin1，WANG Ping2，GAO Peng1，ZENG Na3，LIU Xiang-fang3，WANG Sui-yi3，SHEN Yang3，XU Chao-dou4

(1.Shandong University of Traditional Chinese Medicine, Jinan 250355, China；2.Beijing Tongrentang Herbal Medicine Company, Beijing 100035, China; 3. Shanghai Children′s Hospital, Shanghai 200040, China; 4. Institute For Drug and Instrument Control of PLA, Beijing 100071 China)

ObjectiveTo investigate the chemical constituents from leaves ofRosaLaevigataMichx.MethodsThe chemical constituents were isolated and purificated by silica gel column chromatography, Sephadex LH-20 and semi-preparative RP-HPLC. Their structures were identified by spectral data together with physicochemical analysis.ResultsTwelve known compounds were isolated and identified as catechin (1)，quercetin (2)，naringenin (3)，kaempferol(4)，ethyl gallate(5)，p-hydroxyl ethyl cinnamate(6)，ω-hydroxypropioquaiacone(7)， hydroxytyrosol(8)，o-hydroxybenzoic acid(9)，scopoletin(10)，ethyl α-D-arabinofuranoside(11)，methyl β-D-glucopyranoside(12).ConclusionCompound 11 was isolated from genus Rosa for the first time, compounds 3, 5～9 were isolated from leaves ofRosaLaevigataMichx for the first time.

Leaves ofRosaLaevigataMichx;chemical constituents; isolation; structure identification

吳建林(1976-)，男，中醫(yī)學(xué)博士.

沈 陽(yáng).E-mail:shenyang@medmail.com.cn；徐超斗.E-mail:leisstar@126.com.

R284.1

A

1006-0111(2012)04-0275-04

10.3969/j.issn.1006-0111.2012.04.008

2012-03-15

2012-06-10