卡亞茶水提物輔助調(diào)節(jié)血脂功能作用研究

劉 洋，俞彥波，范代超，周才瓊

（西南大學食品科學學院暨重慶市特色食品工程技術研究中心，重慶400716）

卡亞茶水提物輔助調(diào)節(jié)血脂功能作用研究

劉 洋，俞彥波，范代超，周才瓊*

（西南大學食品科學學院暨重慶市特色食品工程技術研究中心，重慶400716）

目的：研究卡亞茶水提物的輔助降血脂作用。方法：將50只小鼠隨機分成空白對照組（普通飼料）、陰性對照組（高脂飼料）和高、中、低劑量組（卡亞茶水提取物+高脂飼料），分籠喂養(yǎng)30d，測定小鼠體重、肝重、肝臟指數(shù)、血清總膽固醇（TC）、血清三酰甘油（TG）、低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）和高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C），并觀察肝臟組織病理學變化。結(jié)果：卡亞茶水提取物可緩解高脂飼料喂養(yǎng)小鼠體重、肝重和肝臟指數(shù)的增加，降低高脂小鼠肝組織中脂肪細胞量，中劑量組小鼠血清TC、TG和LDL-C顯著低于陰性對照組（p<0.05），HDL-C顯著高于陰性對照組（p<0.05）。結(jié)論：適當濃度的卡亞茶水提取物有輔助降血脂作用。

卡亞茶，水提取物，輔助降血脂

1 材料與方法

1.1 材料與設備

新鮮無病蟲害引種卡亞鮮葉 西南大學農(nóng)業(yè)綜合開發(fā)研究室實驗田，切成約2×4cm2，在25～30℃室溫下萎凋5h，然后取40g萎凋葉在微波功率300W條件下殺青處理3min，迅速取出，攤涼，揉捏成型，100℃下間歇鼓風干燥60min，攤放厚度0.5cm，干燥后水分含量在7%～8%之間；昆明種小鼠 重慶醫(yī)科大學實驗動物中心，動物合格證號：SCXK（渝）2007-0001，雌雄各半，體重18～22g，普通級，飼養(yǎng)室溫度25℃，濕度70%，每天定時通風，每籠5只，定時給食，自由飲水，每周稱量一次體重并記錄進食量；動物飼料 重慶醫(yī)科大學，高脂飼料配方：84%普通飼料，1%膽固醇，15%豬油[5]；伊紅、蘇木精、無水乙醇、硫酸鋁鉀、冰醋酸、氯化鈣、多聚甲醛等 均為分析純；總TC測定試劑盒、血清TG測定試劑盒、血清LDL-C測定試劑盒、血清HDL-C測定試劑盒 上海北海生物技術工程有限公司。

RE-D52旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀 上海亞榮生化儀器廠；OLYMPOSAU400自動生化儀 日本奧林巴斯公司；H20SOR臺式高速冷凍離心機 長沙高新技術開發(fā)區(qū)湘儀離心機儀器有限公司；激光掃描共聚焦顯微鏡等 Confocal，ZEISS，Germany。

1.2 實驗方法

1.2.1 實驗用劑量選擇及處理 卡亞茶粉粹過40目，依據(jù)一般茶飲3g/d，按人體10倍推薦量作為中劑量，計算各劑量組動物的給予量，低、中、高劑量飼喂卡亞茶粉分別為0.25、0.5、1.0g/kg·bw。根據(jù)計算出低、中、高劑量組的卡亞茶粉量，按照1∶50料水比用沸水浸泡兩次，每次7min，收集濾液并濃縮成1～2mL，然后按每只小鼠1mL劑量用蒸餾水稀釋灌胃，連續(xù)灌胃30d。

1.2.2 實驗分組 實驗設空白對照組（普通飼料）、陰性對照組（高脂飼料+1mL蒸餾水）、低劑量組（高脂飼料+0.25g/kg·bw卡亞茶粉水提物）、中劑量組（高脂飼料+0.5g/kg·bw卡亞茶粉水提物）和高劑量組（高脂飼料+1g/kg·bw卡亞茶粉水提物）。

1.2.3 高脂動物模型的建立及處理 昆明種小鼠50只，雌雄各半，經(jīng)3～5d適應性飼養(yǎng)，剔除不合格小鼠后，稱重編號，按隨機數(shù)字法分組，空白對照組給予普通飼料，其余給予高脂飼料喂養(yǎng)，15d后取血測定總膽固醇（TC）水平，觀察結(jié)果。將給予高脂飼料的小鼠根據(jù)TC水平隨機分組，每組10只，分為3個劑量組和1個陰性對照組。

按1.2.2分組及要求飼喂小鼠。每天下午2點給予劑量組不同濃度受試物。給予空白對照組普通飼料，陰性對照組和高、中、低劑量組高脂飼料。并記錄實驗開始和實驗結(jié)束時小鼠體重。

1.2.4 指標測定及動脈硬化指數(shù)計算 30d飼喂實驗結(jié)束后禁食12h，斷頭取血，按試劑盒要求測定小鼠血清TC、TG、HDL-C、LDL-C。動脈粥樣硬化指數(shù)（arteriosclerosis index；AI）計算公式如下：

AI1=（TC-HDL-C）/HDL-C；AI2=LDL-C/HDL-C[6]。

1.2.5 肝臟指數(shù)及肝臟組織病理學觀察[7-8]

肝臟指數(shù)（%）=肝臟濕重（g）/體重（g）×100%

實驗結(jié)束時，斷頭取血之后，立即解剖實驗小鼠摘取肝臟，用冰生理鹽水清洗組織上的血液、黏物等后，用解剖刀切取一塊厚約為5mm，長寬不超過12× 15mm2的組織，立即轉(zhuǎn)入事先配制好的固定物（4%的多聚甲醛）固定，然后做常規(guī)石蠟包埋，切片，蘇木素伊紅（Hematoxylin and eosin staining，HE）染色；激光共聚焦觀察肝組織病理學變化。

2 結(jié)果與分析

2.1 卡亞茶水提物對小鼠體重的影響

實驗前后小鼠體重見表1，陰性對照組體重增幅最大，依次為高劑量組、低劑量組、空白對照組和中劑量組。中劑量組和空白對照組小鼠增重顯著低于陰性對照組（P＜0.05），各劑量組之間無顯著差異（P＞0.05），表明卡亞茶水提物可降低高脂飼料喂養(yǎng)小鼠的體重增加。

卡亞茶水提物對不同性別小鼠體重影響見圖1。雌性小鼠增重最快的是陰性對照組，其次是高劑量組、空白對照組、低劑量組和中劑量組，顯著性分析顯示陰性對照組和空白對照組差異顯著（P＜0.05），陰性對照組和三劑量組間差異不顯著（P＞0.05）。雄性小鼠增重最快的是陰性對照組，其次是低、高、中劑量組和空白對照組，顯著性分析顯示陰性對照組和空白對照組及中、低劑量組間差異顯著（P＜0.05），和高劑量組差異不顯著（P＞0.05），三個劑量組間差異顯著（P＜0.05）。表明適當濃度卡亞茶水提物可有效控制因高脂飼料喂養(yǎng)導致的雄性小鼠體重的增加。

圖1 卡亞茶水提物對雌雄小鼠體重的影響Fig.1 The influence of water extracts of chaya tea on the weight in female and male mice

2.2 卡亞茶水提物對小鼠肝臟的影響

表2 卡亞茶水提物對小鼠肝重的影響（±s）Table 2 Effect of water extracts of chaya tea on the liver weight of mice（±s）

表2 卡亞茶水提物對小鼠肝重的影響（±s）Table 2 Effect of water extracts of chaya tea on the liver weight of mice（±s）

注：表中“a-c”表示各組之間的差異性（P＜0.05）。

組別 動物數(shù)（n）劑量（g/kg·bw） 肝重（g） 肝臟指數(shù)（%）空白對照組 10 … 1.03±0.08c3.95±0.65b陰性對照組 9 … 1.53±0.17a5.04±0.62a低劑量組 8 0.25 1.40±0.10a4.95±0.49a中劑量組 9 0.50 1.27±0.05b4.45±0.37a高劑量組 8 1.00 1.46±0.11a4.68±0.36a

表1 卡亞茶水提物對小鼠體重的影響（±s）Table 1 The influence with mice weight by water extracts of chaya tea（±s）

表1 卡亞茶水提物對小鼠體重的影響（±s）Table 1 The influence with mice weight by water extracts of chaya tea（±s）

注：表中“a-b”表示各組之間的差異性（P＜0.05）。

組別 動物數(shù)（n） 劑量（g/kg·bw） 實驗前體重（g） 實驗結(jié)束體重（g） 增重（g）空白對照組 10 … 22.72±1.09 26.55±3.73 5.13±1.89b陰性對照組 9 … 21.93±1.79 30.78±1.73 8.19±1.82a低劑量組 8 0.25 22.71±1.89 28.11±2.09 6.13±2.42ab中劑量組 9 0.50 22.77±1.55 28.08±1.07 4.92±1.13b高劑量組 8 1.00 22.54±1.68 29.01±0.89 6.16±1.82a

小鼠肝重及肝臟指數(shù)見表2，陰性對照組小鼠肝重和肝臟指數(shù)最高，其次是各劑量組和空白對照組。陰性對照組小鼠肝重和肝臟指數(shù)明顯高于空白對照組（P＜0.05），表明高脂飼料喂養(yǎng)小鼠可導致小鼠肝重和肝臟指數(shù)增加，卡亞茶水提物可降低高脂飼料喂養(yǎng)小鼠肝重和肝臟指數(shù)的增加。

不同性別小鼠肝重及肝臟指數(shù)見圖2。雌雄小鼠肝重和肝臟指數(shù)以陰性對照組最高，其次是各劑量組和空白性對照組；空白對照組、低劑量組雌雄小鼠肝重顯著低于陰性對照組（P＜0.05）；各劑量組、空白對照組和陰性對照組肝臟指數(shù)無顯著差異（P＞0.05）。經(jīng)比較分析，高脂飼料喂養(yǎng)雄性小鼠肝重和肝臟指數(shù)均高于雌性小鼠，卡亞茶水提物可緩解高脂飼料喂養(yǎng)小鼠肝重和肝臟指數(shù)增加。

圖2 卡亞茶水提物對雌雄小鼠肝臟重量肝臟指數(shù)的影響Fig.2 Effect of water extracts of chaya tea on liver and liver index in female and male mice

2.3 卡亞茶水提物對脂代謝紊亂小鼠血脂的影響

卡亞茶水提物對脂代謝紊亂小鼠血脂影響結(jié)果見表3，陰性對照組小鼠TG、TC、LDL-C、HDL-C水平與空白對照組差異顯著（P＜0.05），說明造模成功。

小鼠TC、TG分析顯示，空白對照組和各劑量組血清TC、TG均顯著低于陰性對照組（P＜0.05），各劑量組略高于空白對照組，并以中劑量處理效果最好，說明適當濃度卡亞茶水提物可抑制脂代謝紊亂小鼠血清TC和TG升高。LDL-C分析顯示，空白對照組和中劑量組小鼠血清LDL-C顯著低于陰性對照組、低劑量組和高劑量組（P＜0.05）。表明卡亞茶水提物可顯著降低高脂飼料導致的小鼠LDL-C升高的作用，并以中劑量組效果最好。HDL-C分析顯示，空白對照組顯著高于陰性對照組和各劑量組，中劑量組顯著高于低劑量組和陰性對照組（P＜0.05），表明卡亞茶水提物可明顯緩解高脂飼料導致的小鼠HDL-C下降的作用。

卡亞茶水提物對不同性別小鼠血脂水平的影響見圖3、圖4。TC分析顯示，雌雄小鼠空白對照組血清TC均顯著低于陰性對照組和低、高劑量組（P＜0.05），與中劑量組無顯著差異（P>0.05）；TG分析顯示雌雄小鼠空白對照組TG均顯著低于陰性對照組（P＜0.05），與各劑量組間差異不顯著（P>0.05）。經(jīng)比較分析，空白對照組、陰性對照組和各劑量組雄性小鼠血清TC和TG均高于雌性小鼠，表明雄性小鼠更易發(fā)生TC和TG升高風險。

圖3 卡亞茶水提物對雌雄小鼠血清TC雌雄小鼠TG的影響Fig.3 Effect of water extracts of chaya tea on TC，TG in female and male mice

LDL-C分析顯示，雌雄小鼠空白對照組血清LDLC顯著低于陰性對照組和各劑量組（P＜0.05），雄性小鼠中、低劑量組顯著低于陰性對照組（P＜0.05），雌性小鼠中劑量組顯著低于高、低劑量組和陰性對照組（P＜0.05）；經(jīng)比較分析，空白對照組和中劑量組雄性小鼠LDL-C略高于雌性小鼠，高、低劑量組和陰性對照組則相反，表明高脂喂養(yǎng)更易引起雌性小鼠血清LDL-C升高，適當濃度卡亞茶水提物對高脂飼養(yǎng)小鼠血清LDL-C升高有一定抑制作用。

表3 卡亞茶水提物對小鼠血脂的影響（±s）Table 3 The influence of water extracts of chaya tea on the serum lipoprotein levels of mice（±s）

表3 卡亞茶水提物對小鼠血脂的影響（±s）Table 3 The influence of water extracts of chaya tea on the serum lipoprotein levels of mice（±s）

注：表中“a-d”表示各組之間的差異性（P＜0.05）。

組別 劑量（g/kg·bw） 動物數(shù)（n） TC（mmol/L） TG（mmol/L） HDL-C（mmol/L） LDL-C（mmol/L）空白對照組 … 10 3.41±0.43a 1.30±0.09a 2.01±0.22c 1.81±0.29a陰性對照組 … 9 7.18±1.07d 2.64±0.42c 1.30±0.30a 3.84±0.34c低劑量組 0.25 8 4.52±0.34bc 1.85±0.14b 1.44±0.29a 2.99±0.24b中劑量組 0.50 9 3.98±0.26b 1.41±0.09a 1.73±0.29b 2.12±0.46a高劑量組 1.00 8 4.83±0.36c 1.69±0.34b 1.51±0.17ab 3.04±0.48b

HDL-C分析顯示，雄性小鼠空白對照組血清HDL-C顯著高于陰性對照組和高劑量組（P＜0.05），中劑量組血清HDL-C顯著高于高劑量組和陰性對照組（P＜0.05）；雌性小鼠空白對照組血清HDL-C顯著高于陰性對照組和各劑量組（P＜0.05）。經(jīng)比較分析，所有處理雄性小鼠血清HDL-C均高于雌性小鼠，卡亞茶水提物有利于緩解高脂飼料導致的雄性小鼠血清HDL-C的降低。

圖4 卡亞茶水提物對雌雄小鼠血清HLD-C（a）雌雄小鼠LDL-C（b）的影響Fig.4 Effect of water extracts of chaya tea on HDL-C（a），LDL-C（b）in female and male mice

2.4 卡亞茶水提物對脂代謝紊亂小鼠AI的影響

圖5 卡亞茶水提物對雌雄小鼠動脈硬化指數(shù)的影響Fig.5 The influence of chaya tea on the atherogenic index of female and male mice

卡亞茶水提物對脂代謝紊亂小鼠AI的影響見表4。AI1和AI2均以陰性對照組最高，空白對照組最低，各劑量組以中劑量組最低，陰性對照組的AI1和AI2值均顯著高于空白對照組（P＜0.05）。表明高脂飲食導致小鼠AI值升高，卡亞茶水提物可有效降低高脂喂養(yǎng)小鼠AI。

雌雄小鼠AI1和AI2見圖5。雌、雄小鼠空白對照組AI1和AI2顯著低于陰性對照組和高、低劑量組（P＜0.05），各劑量組顯著低于陰性對照組（P＜0.05）。經(jīng)比較分析，空白對照組、陰性對照組和中、高劑量組雄性小鼠AI1高于雌性小鼠，中、低劑量組雄性小鼠AI2略高于雌性小鼠。

2.5 卡亞茶對脂代謝紊亂小鼠肝臟病理學觀察

肉眼觀察肝臟組織發(fā)現(xiàn)，空白對照肝臟組織增大基本正常，陰性對照組肝臟有所增大，包膜緊張，表面變黃，手指觸摸有油膩感，呈典型的脂肪肝。各劑量組肝臟表面顏色微黃，部分肝臟與陰性對照組相似，也有部分肝臟與空白對照組相似。

激光共聚焦顯微鏡掃描觀察見圖6，空白對照組小鼠肝細胞排列整齊，細胞核明顯且居中，細胞質(zhì)豐富，細胞膜清晰；但陰性對照組細胞明顯變大，細胞核被擠到細胞膜一側(cè)，但未見肝細胞纖維化。各劑量組肝細胞脂肪滴數(shù)量和大小有所減少，中劑量組小鼠肝細胞組織可觀察到細胞中央的細胞核，而高、低劑量組肝細胞中細胞核在細胞膜的一側(cè)。

圖6 肝臟組織激光共聚焦顯微鏡掃描觀察Fig.6 Liver tissue laser scanning confocal microscopy observation

3 結(jié)論與討論

卡亞茶水提物可降低高脂飼料喂養(yǎng)小鼠的體重、肝重和肝臟指數(shù)的增加。高脂喂養(yǎng)可增加雌性小鼠體重，增加雄性小鼠肝重和肝臟指數(shù)，表明雌雄小鼠在高脂飼料暴露中所受影響不同。

表4 卡亞茶對小鼠動脈硬化指數(shù)的影響（±s）Table 4 The influence of chaya tea on the atherogenic index of mice（±s）

表4 卡亞茶對小鼠動脈硬化指數(shù)的影響（±s）Table 4 The influence of chaya tea on the atherogenic index of mice（±s）

AI 空白對照組 陰性對照組 低劑量組 中劑量組 高劑量組AI1 0.70±0.45c 4.52±1.52a 2.14±0.87b 1.30±0.50c 2.20±0.34b AI2 0.90±0.22c 2.95±1.19a 2.08±0.52b 1.23±0.21c 2.01±0.43b

卡亞茶水提物可抑制脂代謝紊亂小鼠血清TC、TG和LDL-C的升高，可緩解高脂飼料導致的小鼠HDL-C下降的作用，并以中劑量組最好。經(jīng)比較分析，各處理雄性小鼠血清TC、TG和HDL-C均高于雌性小鼠，空白對照組和中劑量組雄性小鼠LDL-C略高于雌性小鼠，高、低劑量組和陰性對照組雄性小鼠血清LDL-C低于雌性小鼠，表明雄性小鼠更易發(fā)生TC和TG升高風險，雌性小鼠更易發(fā)生LDL-C升高風險；適當濃度卡亞茶水提物有利于控制脂代謝紊亂小鼠LDL-C升高，并有利于緩解高脂飼料導致的雄性小鼠血清HDL-C的降低?？▉啿杷嵛锟捎行Ы档透咧桂B(yǎng)小鼠AI值。

卡亞富含蛋白質(zhì)、粗纖維、鈣、鉀、鐵、類胡蘿卜素及維生素C[9]。含黃酮苷類、萜類、強心苷、單寧、生物堿及生氰糖苷（Cyanogenetic glycosides）等功能成分或抗營養(yǎng)因子[2]。本實驗小組對引種新資源卡亞的營養(yǎng)分析也顯示卡亞富含維生素B1、維生素B2、煙酸、維生素B6、維生素C、鉀和鈣，100g新鮮卡亞葉中上述營養(yǎng)素含量分別為0.36、0.57、33.12、0.28、134.7、406.3、131.4mg[10]；100g卡亞鮮葉含單寧0.49g、黃酮類1.29g及酚類2.57g[11]。

大量研究發(fā)現(xiàn)酚類物質(zhì)如茶多酚、沒食子酸、單寧等在動物實驗中具有降血脂作用[12-13]。維生素B和維生素C及它們的復合物在降血脂方面也有良好效果[14-15]。但作用機制和原理尚不清楚，需要進一步的研究和探討。根據(jù)國內(nèi)外的相關報道和上述實驗，可以推測富含多酚類和維生素的卡亞茶具有一定的輔助降血脂作用。

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Study on hypolipidemic effect of water extracts of chaya tea

LIU Yang，YU Yan-bo，F(xiàn)AN Dai-chao，ZHOU Cai-qiong*
（Engineering&Technology Research Centre of Characteristic Food，College of Food Science，Southwest University，Chongqing 400716，China）

Objective：To study the hypolipidemic effect of water extracts of chaya tea.Methods：Fifty kunming mice were divided into blank control group（normal feed），negative control group（high fat feed）as well as high，medium and low dose group（water extract+high fat feed），each group was fed for 30d.The mice weight，liver weight，hepatosomatic index and the level of total cholesterol（TC），triglyceride（TG），low density lipoprotein cholesterol（LDL-C）and high lipoprotein cholesterol（HDL-C）were determined at the end of test，and the changes of liver ware observed by confocal laser.Results：Water extracts of chaya tea can relieve the increase of body weight，liver weight and hepatosomatic index，as well as reduce the fat cells of liver tissue of the mice with high fat feed.The level of TC，TG and LDL-C in medium dose group were significantly lower than that in negative control group（p＜0.05），while the level of HDL-C in medium dose group was significantly higher than in negative control group（p＜0.05）.Conclusion：Proper water extracts of chaya tea had hypolipidemic effect.

chaya tea；water extracts；hypolipidemic

TS201.4

A

1002-0306（2012）07-0383-05

卡亞（Cnidoscolus spp.），為大戟科（Euphorbiaceae）多年生灌木，是中美洲一種傳統(tǒng)的藥食兩用食物，含黃酮苷類、萜類、強心苷、單寧、生物堿及生氰糖苷（Cyanogenetic glycosides）等功能成分或抗營養(yǎng)因子[1-2]。其廣泛的生物活性包括血液循環(huán)、助消化、改進視力、血管痔瘡消炎、降膽固醇、減肥、止咳、骨骼增鈣、預防貧血、增強記憶、健腦、治療關節(jié)炎與糖尿病等[3]。Donkoh C等[4]研究發(fā)現(xiàn)卡亞是潛在的降血膽固醇制劑。本研究采用栽培馴化后的引種新資源卡亞為原料，按照綠茶加工方法加工成卡亞茶，并對卡亞茶水提物輔助調(diào)節(jié)血脂功能作用進行了研究。

2011－07－14 *通訊聯(lián)系人

劉洋（1986-），男，碩士研究生，研究方向：食品化學與營養(yǎng)學。

西南大學博士基金項目（SWUB2008015）。