高效液相色譜法測(cè)定白酒中羅漢果V的含量

曹玉發(fā)，徐 燕，李 建，姜 雪

（江蘇省宿遷市產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)所，江蘇宿遷223800）

高效液相色譜法測(cè)定白酒中羅漢果V的含量

曹玉發(fā)，徐 燕，李 建，姜 雪

（江蘇省宿遷市產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)所，江蘇宿遷223800）

采用高效液相色譜法測(cè)定白酒中羅漢果甜苷V的含量，從而達(dá)到檢測(cè)白酒中添加羅漢果浸泡液的目的。檢測(cè)條件為：Welch Materials Column-XB-C18（4.6×250mm，5μm）色譜柱，以乙腈－水（77∶23）為流動(dòng)相，流速為1mL/min，檢測(cè)波長(zhǎng)為203nm，柱溫25℃。羅漢果甜苷V進(jìn)樣量在0.4~20μg之間線性關(guān)系良好（R2=0.9983），回收率范圍在97.5%~105.5%，RSD為2.56%（n=6）。該方法操作簡(jiǎn)便、測(cè)定快速、結(jié)果準(zhǔn)確，同時(shí)具有良好的精密度、重復(fù)性和穩(wěn)定性，可作為白酒中添加羅漢果浸泡液的檢測(cè)方法。

羅漢果，羅漢果甜苷V，白酒，高效液相色譜法，檢測(cè)

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

白酒樣品 自配，無水乙醇溶液與水按50∶50（V/V）配制而成；羅漢果干燥果實(shí) 溫嶺市哲翰保健食品有限公司，20110412；羅漢果甜苷V標(biāo)準(zhǔn)品（mogroside V） ≥98%，深圳時(shí)得佳科技有限公司；乙腈、甲醇 均為進(jìn)口色譜純?cè)噭?/p>

電子分析天平 梅特勒－托利多儀器（上海）有限公司；SCQ-2201超聲波清洗器 上海聲彥超聲波儀器有限公司；Waters 510高效液相色譜儀 美國(guó)Waters公司。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制

1.2.1.1 1000μg/mL羅漢果甜苷V標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液 精確稱取50.0mg羅漢果甜苷V，用白酒溶解后定容至50mL，配制成濃度為1000μg/mL的羅漢果甜苷V標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液。

1.2.1.2 系列濃度羅漢果甜苷V標(biāo)準(zhǔn)溶液 從1000μg/mL的羅漢果甜苷V標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液中準(zhǔn)確吸取2、5、10mL溶液，分別用白酒定容至100mL，配制成20、50、100μg/mL的羅漢果甜苷V標(biāo)準(zhǔn)溶液；從1000μg/mL的羅漢果甜苷V標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液中準(zhǔn)確吸取2、5mL溶液，分別用白酒定容至10mL，配制成200、500μg/mL的羅漢果甜苷V標(biāo)準(zhǔn)溶液。

1.2.2 陽性樣品溶液的制備 羅漢果干燥果實(shí)1個(gè)，稱重，粉碎后置于1L錐形瓶中，加入300mL水，超聲提取20min，冷卻30min后繼續(xù)超聲提取20min，冷卻，過濾，將濾液4000r/min離心10min，取上清液2mL，用白酒定容至1000mL，充分混勻，制成含有羅漢果浸泡液的白酒陽性樣品溶液。

1.2.3 樣品處理方法 用100mL單標(biāo)移液管準(zhǔn)確量取樣品溶液100mL至150mL燒杯中，50℃水浴蒸干，用1mL甲醇定容；經(jīng)微孔過濾膜（0.45μm）過濾后供高效液相色譜測(cè)定用。

1.2.4 白酒中羅漢果甜苷V檢測(cè)的液相色譜法 采用高效液相色譜儀檢測(cè)白酒中的羅漢果甜苷V。具體操作條件為：Welch Materials Column-XB-C18（4.6× 250mm，5μm）色譜柱；流動(dòng)相：V乙腈∶V水=77∶23；流速：1.0mL/min；紫外檢測(cè)器；柱溫：25℃；檢測(cè)波長(zhǎng)：203nm；進(jìn)樣量：20μL。

1.2.5 空白白酒及羅漢果甜苷V標(biāo)準(zhǔn)溶液中羅漢果甜苷V含量測(cè)定的高效液相色譜圖 空白白酒樣品按實(shí)驗(yàn)方法1.2.3和1.2.4進(jìn)行處理和測(cè)定，得高效液相色譜圖。對(duì)100μg/mL羅漢果甜苷V標(biāo)準(zhǔn)溶液按實(shí)驗(yàn)方法1.2.4進(jìn)行測(cè)定，得高效液相色譜圖。

1.2.6 羅漢果甜苷V標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制 將1000、500、200、100、50、20μg/mL的羅漢果甜苷V標(biāo)準(zhǔn)溶液，均按實(shí)驗(yàn)方法1.2.4進(jìn)行測(cè)定，得相應(yīng)譜圖。以羅漢果甜苷V濃度為橫坐標(biāo)，對(duì)應(yīng)峰面積為縱坐標(biāo)作圖，即得羅漢果甜苷V標(biāo)準(zhǔn)曲線。

1.2.7 羅漢果甜苷V回收率計(jì)算與精密度實(shí)驗(yàn) 對(duì)800、400、200、80、40、20μg/mL不同濃度的羅漢果甜苷V酒樣按實(shí)驗(yàn)方法1.2.3和1.2.4進(jìn)行處理和測(cè)定，對(duì)照羅漢果甜苷V標(biāo)準(zhǔn)曲線得各實(shí)測(cè)值，與加標(biāo)值進(jìn)行比較，即可進(jìn)行回收率計(jì)算。

將100μg/mL羅漢果甜苷V酒樣按實(shí)驗(yàn)方法1.2.3和1.2.4進(jìn)行處理和測(cè)定，重復(fù)測(cè)定六次，求精密度。

1.2.8 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn) 準(zhǔn)確量取白酒樣品溶液100mL，按1.2.3步驟處理樣品，于0、4、8、12、24、48h分別按1.2.4條件進(jìn)樣測(cè)定，外標(biāo)法計(jì)算羅漢果甜苷V的含量，觀察其穩(wěn)定性。

1.2.9 白酒中及羅漢果中甜苷V含量的測(cè)定 從同一瓶白酒樣品溶液中準(zhǔn)確量取5份樣品，每份100mL，按1.2.3和1.2.4進(jìn)行樣品處理和HPLC分析。外標(biāo)法計(jì)算白酒樣品溶液中羅漢果甜苷V的含量。

2 結(jié)果與討論

2.1 空白白酒及羅漢果甜苷V標(biāo)準(zhǔn)溶液中羅漢果甜苷V含量測(cè)定的HPLC圖

圖1 空白白酒的高效液相色譜圖Fig.1 HPLC chromatogram map of blank liquor

圖2 羅漢果甜苷V標(biāo)準(zhǔn)溶液的高效液相色譜圖Fig.2 HPLC chromatogram map of mogroside V standard solution

圖1為空白白酒的高效液相色譜圖，圖2為羅漢果甜苷V標(biāo)準(zhǔn)溶液的高效液相色譜圖，對(duì)比可以看出：圖1空白白酒（未添加羅漢果甜苷V）的高效液相色譜圖，除了在5min處有溶劑峰以外，其它時(shí)間圖線基本在基線附近，圖像平穩(wěn)清晰，無其他峰的出現(xiàn)；圖2羅漢果甜苷V標(biāo)準(zhǔn)溶液的高效液相色譜圖，羅漢果甜苷V的保留時(shí)間為11~12min，所以空白酒樣不含羅漢果甜苷V。

2.2 羅漢果甜苷V標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

圖3 羅漢果甜苷V標(biāo)準(zhǔn)曲線圖Fig.3 Standard curve of mogroside V of HPLC detection

圖3為羅漢果甜苷V標(biāo)準(zhǔn)曲線圖。根據(jù)羅漢果甜苷V濃度和峰面積的線性關(guān)系，可以建立標(biāo)準(zhǔn)曲線，并求出回歸方程為：y=4804.2x-21419，R2=0.9983。結(jié)果表明羅漢果甜苷V進(jìn)樣量在0.4~20μg范圍內(nèi)與峰面積具有良好的線性關(guān)系。

2.3 羅漢果甜苷V的回收率與精密度

表1 回收率實(shí)驗(yàn)考察結(jié)果Table 1 Recovery rate of mogroside V at different spiked amounts

表2 100μg/mL羅漢果甜苷V酒樣精密度實(shí)驗(yàn)考察結(jié)果Table 2 Six repetitive data of mogroside V using HPLC method in for liquor

通過計(jì)算，得到回收率范圍在97.5%~105.5%（見表1）。經(jīng)重復(fù)測(cè)定，得到RSD為2.56%（n=6），表明該方法具有良好的精密度（見表2）。

2.4 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)

表3 白酒中羅漢果甜苷V測(cè)定穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)考察結(jié)果Table 3 Stability test of mogroside V in liquor

經(jīng)測(cè)定，白酒樣品溶液中羅漢果甜苷V平均峰面積積分值為110264.12，RSD為1.58%（n=6），表明白酒樣品溶液中羅漢果甜苷V在48h內(nèi)穩(wěn)定（見表3）。

2.5 白酒中及羅漢果中甜苷V含量的測(cè)定

由圖4可見，白酒中羅漢果甜苷V的保留時(shí)間為11.382min，譜圖中除溶劑峰外，其它時(shí)間圖線基本在基線附近，圖像平穩(wěn)清晰，無其他峰的出現(xiàn)。

從實(shí)驗(yàn)方法1.2.2和1.2.3可得，羅漢果甜苷V在果中含量的計(jì)算公式為：

圖4 白酒中羅漢果甜苷V含量測(cè)定色譜圖Fig.4 HPLC chromatogram map of content of mogroside V in liquor

表4 白酒中及羅漢果中甜苷V含量的測(cè)定Table 4 Repeatability test and content of mogroside V in liquor

經(jīng)測(cè)定，白酒樣品溶液中羅漢果甜苷V的平均含量為27.72μg/mL，在果中平均含量為0.8048%，RSD為1.78%（n=5）。結(jié)果表明，該方法具有良好的重復(fù)性。

3 結(jié)論

3.1 通過實(shí)驗(yàn)得到該方法白酒中羅漢果甜苷V標(biāo)準(zhǔn)曲線方程為：y=4804.2x-21419，R2=0.9983。結(jié)果表明羅漢果甜苷V進(jìn)樣量在0.4~20μg范圍內(nèi)與峰面積具有良好的線性關(guān)系。通過計(jì)算，得到回收率范圍在97.5%~105.5%，RSD為2.56%，表明該方法具有良好的精密度。

3.2 通過實(shí)驗(yàn)證實(shí)，白酒樣品溶液中羅漢果甜苷V在48h內(nèi)穩(wěn)定。

3.3 通過實(shí)驗(yàn)測(cè)得，白酒樣品溶液中羅漢果甜苷V的平均含量為27.72μg/mL，在果中平均含量為0.8048%（這一結(jié)果與文獻(xiàn)報(bào)道的結(jié)果較為一致[5，9]，說明本實(shí)驗(yàn)采購(gòu)的羅漢果質(zhì)量?jī)?yōu)良，符合實(shí)驗(yàn)要求），結(jié)果RSD為1.78%（n=5），實(shí)驗(yàn)表明該方法具有良好的重復(fù)性。3.4 該方法操作簡(jiǎn)便、測(cè)定快速、結(jié)果準(zhǔn)確，同時(shí)具有良好的精密度、重復(fù)性和穩(wěn)定性，可作為白酒中添加羅漢果浸泡液的檢測(cè)方法。

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Determination of mogroside V in liquor by HPLC

CAO Yu-fa，XU Yan，LI Jian，JIANG Xue
（Product Quality Supervision and Testing Institute of Suqian，Suqian 223800，China）

To establish an optimal HPLC method for determining the contents of mogroside V in liquor，and gain the ends of detection of Momordica grosvenori infusion in liquor.Welch Materials Column-XB-C18（4.6×250mm，5μm）was used with acetonitrile-water（77∶23）as mobile phase，while flow rate was 1mL/min.Detection wavelength was set at 203nm according to the fixed UV detector.Column temperature was 25℃.The liner range of mogroside V was 0.4～20μg（R2=0.9983）while the range recovery of mogroside V was 97.5%～105.5%with 2.56%of RSD. HPLC method was simple，rapid，accurate，while with good precision，repeatability and stability.It can be used in the detection of momordica grosvenori infusion in liquor.

Momordica grosvenori；mogroside V；liquor；HPLC；detection

TS207.3

A

1002-0306（2012）07-0350-04

國(guó)家頒布的GB/T 18356-2007《地理標(biāo)志產(chǎn)品貴州茅臺(tái)酒》中規(guī)定，以茅臺(tái)為代表的醬香型白酒存放時(shí)間需在3年以上。此時(shí)酒體顏色會(huì)呈微黃，這是因?yàn)殚L(zhǎng)時(shí)間存放以后，其中某些微量物質(zhì)會(huì)發(fā)生顏色的變化，而其它白酒必須為無色透明液體。但由于陳放的酒比新釀造的酒味道芳香、甜味甘醇，加上部分企業(yè)大肆宣傳陳年老酒的商業(yè)炒作行為，致使許多消費(fèi)者盲目跟風(fēng)，錯(cuò)誤地認(rèn)為只有酒體呈現(xiàn)微黃才是真的陳酒。為了迎合消費(fèi)者的這種錯(cuò)誤心理，有些生產(chǎn)廠商就在酒中投放添加劑。據(jù)調(diào)查，目前大多數(shù)小型白酒生產(chǎn)廠家通過添加色素，而一些有條件的大企業(yè)可能會(huì)通過向酒中添加羅漢果浸泡液的方式使酒體呈現(xiàn)微黃色。羅漢果是我國(guó)廣西特產(chǎn)中藥，為葫蘆科植物羅漢果[Siraitia grosvenorii（Swingle）C. Jeffery ex lu et Z.Y.Zhang]的果實(shí)[1]，其主要化學(xué)成分為非糖甜味物質(zhì)-甜苷。目前對(duì)羅漢果的研究與開發(fā)主要集中在甜苷上，其中葫蘆素烷型三萜皂苷類羅漢果甜苷V（mogroside V）是甜苷中主要甜味成分，占總甜苷量的30%~40%[2-3]。羅漢果甜苷V因具有甜度高、熱量低、色澤淺、水溶性及穩(wěn)定性好、食用安全等優(yōu)點(diǎn)，我國(guó)已于1996年批準(zhǔn)該產(chǎn)品為食品添加劑，可作為甜味劑部分或全部代替蔗糖，而廣泛用于各種食品[4]。羅漢果甜苷V作為羅漢果中最主要的成分，已有部分學(xué)者對(duì)其進(jìn)行了研究，建立了羅漢果中羅漢果甜苷V含量的測(cè)定方法，以此作為羅漢果藥材的質(zhì)量控制方法[5-10]。然而，酒類中羅漢果甜苷成分的檢測(cè)方法還未見報(bào)道。因此，本研究擬采用高效液相色譜技術(shù)，檢測(cè)白酒中羅漢果甜苷V含量，從而為判定白酒中是否添加羅漢果浸泡液提供一種簡(jiǎn)便、可靠的方法。

2011－06－20

曹玉發(fā)（1979－），男，在讀碩士，工程師，研究方向：食品科學(xué)。

江蘇省質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局資助項(xiàng)目（KJ103736）。