干擾素聯合拉米夫定對肝癌根治術后血管內皮生長因子的協(xié)同抑制作用

鞠金昌，張囡囡，程相凡，單鐵蓮

(1.棗莊礦業(yè)集團總醫(yī)院，山東棗莊277800;2.棗莊礦業(yè)集團滕南醫(yī)院，山東棗莊277606;3.廣德縣人民醫(yī)院，安徽廣德242200)

乙型肝炎相關性肝癌根治手術后復發(fā)率高，是一種嚴重威脅人類健康的惡性腫瘤。血管內皮生長因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)是由星形細胞分泌的一種特異性絲裂原，可選擇性地誘導內皮細胞的增生，在腫瘤組織中過量表達，對肝癌等癌癥的診斷及防治具有重要意義。干擾素(interferon，IFN)具有抗病毒、抗細胞增殖及免疫調節(jié)作用，是腫瘤的治療佐劑之一，有研究報道其對實驗性大鼠肝癌及肝癌根治手術后的腫瘤的轉移復發(fā)具有明顯抑制作用［1～3］;核苷類似物拉米夫定，可通過快速抑制乙肝病毒復制及變異防治肝癌的發(fā)生及發(fā)展。本文通過檢測肝癌根治性切除手術后血漿VEGF－C的表達水平，探討干擾素聯合拉米夫定在防治腫瘤復發(fā)轉移方面的作用。

1 材料與方法

1.1 臨床資料 我院及滕南醫(yī)院肝癌根治手術后乙肝患者62例，隨機分為干擾素組32例(脫落3例)，男22例，女7例，平均年齡(51.62±7.16)歲;干擾素聯合拉米夫定組30例(脫落5例)，男 17例，女8例，平均年齡(49.13 ±10.24)歲。所有病例均經病理學確診，臨床分期為T1N0M0［4］，其乙肝病毒定量陽性(＞5.0×102IU·mL－1)，符合干擾素治療適應證，無心、腦、腎等重要器官功能障礙及糖尿病、免疫系統(tǒng)、精神病等并發(fā)癥?；颊叩囊话闱闆r如性別、年齡、治療前轉氨酶、AFP、HBV DNA定量差異無統(tǒng)計學意義。

術后每3～6個月隨訪腫瘤標志物、超聲、CT、肝功、乙肝酶標、乙肝病毒定量等監(jiān)測有無腫瘤復發(fā)，是否發(fā)生病毒學突破，如發(fā)生肝硬化失代償、肝衰竭、繼發(fā)嚴重感染、死亡等嚴重不良反應，則停藥，改為手術、介入治療或其他方法治療，并視為脫落病例。治療過程中脫落8例，其中肝硬化失代償3例，肝衰竭1例，后期再手術及化療2例，死亡1例，中斷治療1例。

1.2 治療方法 兩組患者均給予重組人干擾素α－2b注射液500萬IU皮下肌注，每周3次，堅持96周;聯合治療組加用拉米夫定0.1 g口服。

1.3 觀測指標及檢測方法 分別觀測治療前、治療后6個月、1年及2年的VEGF－C值，同時觀察其他臨床指標如HBV－DNA陰轉率及腫瘤復發(fā)率等。

所有患者抽取空腹靜脈血2 mL，即時分離血清，－70℃保存待測。采用酶聯免疫吸附法(ELISA)，運用Bio－Rad 550酶標儀檢測，測定時嚴格按照試劑盒(購自德國IBL公司)說明書進行操作，所有血樣和試劑盒內的標準品同一批次檢測。

2 結果

2.1 VEGF－C數值測定 兩組治療前VEGF－C表達量無明顯差異(P＞0.05)，于治療6后個月、1年及2年測定VEGF－C值，其數值與時間及治療方案存在相關性，對照組及治療組差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)(見表1及圖1)。

表1 各時段VEGF－C數值(±s)

表1 各時段VEGF－C數值(±s)

組別 n VEGF－C(ng·L－1)治療前 6個月 1年 2年02.43 ±34.18聯合治療組 25 152.63 ±58.29 122.62 ±45.96 88.3 ±24.58 80.干擾素組 29 148.29 ±49.96 132.64 ±41.87 118.78 ±40.73 1 32 ±27.6

圖1 治療組與干擾素組VEGF－C值變化

2.2 HBV－DNA定量陰轉率及腫瘤復發(fā)率 聯合治療組于治療6個月、1年及2年的HBV－DNA陰轉率分別為96%，92%，84%，較干擾素組差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05);治療1年時腫瘤復發(fā)率為8%，較干擾素組差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)，2年為12%，主要為肝內復發(fā)，較干擾素組差異有統(tǒng)計學意義(P ＜0.05)。

表2 HBV－DNA陰轉率及腫瘤復發(fā)率

3 討論

肝細胞癌是嚴重威脅人類健康的惡性腫瘤之一，死亡率高，其發(fā)病機制與HBV整合、X蛋白變異及原癌基因激活及抑癌基因突變相關。手術切除是肝癌首選的治療方法，但術后復發(fā)率高，因此及時清除及抑制病毒復制與變異是延緩肝癌進程防治腫瘤復發(fā)的重要環(huán)節(jié)。

血管內皮生長因子(VEGF)是監(jiān)測腫瘤發(fā)生、發(fā)展、轉移的重要指標之一，它可選擇性地誘導內皮細胞的增生，其轉染的肝細胞可形成大量的克隆并構成有意義的血管網，促進肝組織生長，在癌組織中過度表達［5，6］。VEGF－C是 VEGF家族成員之一，是比較特異的淋巴管生成因子，通過激活淋巴管內皮細胞上的VEGFR－3受體，使受體自身磷酸化，繼而通過一系列細胞內信號傳導，激活MAP激酶，刺激淋巴管內皮增生，最終引起淋巴內皮細胞增殖、生長，促進淋巴管的新生，同時還可以降低淋巴管內皮細胞間的粘附，提高淋巴管的通透性，使癌細胞可能更易浸潤至淋巴管內，導致腫瘤的淋巴道轉移甚至遠處轉移［7，8］。

干擾素具有調節(jié)和控制細胞復制、增生及機體免疫系統(tǒng)功能等作用，在肝癌治療中得到越來越多重視。研究發(fā)現干擾素可以抑制MMP－2、MMP－9、VEGF等促血管生成因子的表達，同時促進IP－10和MIG等抗血管生成因子的表達，從而抑制腫瘤生長［9，10］。另有研究證明干擾素可通過調節(jié)Fas/FasL途徑及肝癌細胞胸苷磷酸化酶(TP)的表達、抑制增殖細胞核抗原(PCNA)等作用促進細胞凋亡［11～13］。拉米夫定作為核苷類抗病毒藥物，主要抑制HBV－DNA聚合酶活性，從而阻止病毒復制，降低體內HBV載量，減少HBVDNA在肝細胞核內的整合機會，進而減輕肝臟組織炎癥，降低HBsAg陽性原發(fā)性肝癌的發(fā)生率。病毒復制是乙肝相關性肝細胞癌重要的啟動因素，及時抑制病毒復制是治療及防治腫瘤復發(fā)的關鍵。干擾素具有增強清除病毒的免疫功能和直接抑制病毒的作用，聯合核苷類藥物可有效抑制病毒復制，實現病毒學、生化學及血清學應答［14］。

本研究主要探討如何有效降低乙肝相關性肝細胞癌根治術后腫瘤復發(fā)率等相關問題。實驗結果顯示:干擾素及聯合組均可降低VEGF－C表達水平，其聯合拉米夫定治療可更有效的抑制VEGF－C的表達，兩組差異有統(tǒng)計學意義，表明干擾素聯合拉米夫定可有效抑制肝癌根治術后血清VEGF－C的表達，降低腫瘤復發(fā)率，其機制可能與抑制乙肝病毒復制有關。

理論上腫瘤復發(fā)率及HBV－DNA陰轉率與VEGF表達水平呈正相關，然而本研究結果顯示(見圖1)6個月、1年、2年VEGF表達水平呈遞減趨勢，聯合治療組第2年較第1年下降幅度略減小，一方面可能與病毒學、生化學及血清學持續(xù)應答的時間相關性相關，一方面不排除納入病例在復發(fā)及轉移方式的差異。因此在進一步的研究中可適當擴展納入條件、增加樣本量、延長隨訪時間，觀測乙肝病毒表面抗原定量、e抗原定量及生存率等指標，早期預測持續(xù)應答與復發(fā)及轉移的相關性。

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