速效心痛氣霧劑中牡丹皮的提取工藝研究

周長征

（山東中醫(yī)藥大學，山東 濟南250355）

牡丹皮為毛茛科植物牡丹 （PaeoniasuffuticosaAndr.）的干燥根皮.味苦、辛、微寒.歸心、肝、腎經(jīng)，具有清熱涼血，活血化瘀的作用.根皮主要含芍藥苷（Paeoniflorin）、羥基芍藥苷、丹皮酚等.芍藥苷是牡丹皮中主要活性成分之一，穩(wěn)定性好，醇溶性優(yōu)于水溶性［1］.芍藥苷具有多種生物活性，對免疫、心血管、中樞神經(jīng)系統(tǒng)以及平滑肌等方面均有肯定的藥理作用［2］.

速效心痛氣霧劑由牡丹皮、川芎和冰片組成，具有清熱涼血，活血止痛的作用.牡丹皮的提取方法是用90%乙醇冷浸提取2次，芍藥苷為牡丹皮的重要成分之一，并對藥材及其制劑的質(zhì)量控制有著決定性的作用.因此，如何通過提取工藝的優(yōu)化來提高牡丹皮中有效成分的提取率是提高藥效的關鍵因素.為此，本研究探討了牡丹皮的提取工藝，為牡丹皮的工業(yè)生產(chǎn)提供可行的方法.

1 實驗材料

1.1 儀器 CS－930型薄層掃描儀（島津）；BS110十萬分之一電子分析天平（北京賽多利斯天平公司）；電熱恒溫水浴鍋（北京長源試驗設備廠）；電動攪拌器（廣州紙行第三五金工場制造）；微量進樣器（上海高頜工貿(mào)有限公司）.

1.2 材料與試劑 牡丹皮購于濟南藥材站，經(jīng)山東中醫(yī)藥大學中藥鑒定教研室周鳳琴教授鑒定為毛茛科植物牡丹（PaeoniasuffuticosaAndr.）的干燥根皮其質(zhì)量均符合《中國藥典》2005年版（一部）［3］牡丹皮項下的有關規(guī)定.

芍藥苷對照品（中國藥品生物制品檢定所，批號：110736－200320）；硅膠G（青島海洋化工廠）；試劑均為分析純.

2 牡丹皮提取工藝研究

牡丹皮中主要成分為丹皮酚與芍藥苷.因為丹皮酚揮發(fā)性很強不能準確測其含量［4］.故選用芍藥苷作為確定牡丹皮提取工藝的優(yōu)選指標.本實驗對滲漉法與冷浸法提取牡丹皮作了優(yōu)選.考慮到提取效率以及適于工業(yè)化大生產(chǎn)，故對此兩種提取方法進行了系統(tǒng)比較.

2.1 冷浸法

2.1.1 提取方法 取牡丹皮120g，粉碎成粗粉，用90%乙醇冷浸提取兩次，第1次加90%乙醇2 600mL，攪拌6h，靜置12h；第2次加90%乙醇2 000mL，攪拌4h，靜置12h，吸取上清液，濾過，回收乙醇至體積約250mL，溶液恒溫水浴上加熱濃縮，然后真空干燥.取干浸膏2g，粉碎成細粉，精密稱重，加95%乙醇80mL置量瓶中超聲處理30min，放置，冷卻，再用95%乙醇定容至100mL，搖勻，濾過，即得供試液.

2.1.2 對照品溶液的制備 精密稱取芍藥苷標準品10mg，置10mL容量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度，即得濃度為1mg·mL－1的芍藥苷對照液.

2.1.3 薄層板的制備 硅膠G用0.5%CMC－Na溶液作黏合劑，板厚0.3mm，使用前105℃活化30min.

2.1.4 展開與顯色 展開劑：三氯甲烷－乙酸乙酯－甲醇－甲酸（20∶2.5∶10∶0.1），預飽和15min，上行展開至13cm，取出，晾干，噴以5%香草醛硫酸溶液顯色，105℃烘至斑點清晰.

2.1.5 波長的選擇 取對照品溶液和供試品溶液，在400～800nm波長范圍內(nèi)進行掃描，由掃描圖可知，在600nm處對照品溶液和供試品溶液均有最大吸收，在700nm處均有最小吸收.

2.1.6 儀器條件與掃描方式 雙波長反射式鋸齒掃描，測定波長600nm，參比波長700nm，直線參數(shù)為3，靈敏度為1，狹縫：1.2mm×1.2mm.

2.1.7 標準曲線的繪制及線性關系的考察 分別精密吸取2.1.2項下的對照液2、4、6、8、10μL點于同一硅膠 G薄層板上，展開，顯色，掃描，得回歸方程Y＝4 705.3X＋2 483.7，r＝0.999 0，表明點樣量在2～10μg之間有較好的線性關系.

2.1.8 穩(wěn)定性考察 取樣品溶液和對照品溶液各2μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以上述條件展開，掃描，每1h掃描1次，結果在0～6h內(nèi)穩(wěn)定，結果見表1.

表1 不同時間測的峰面積值（n＝3）

2.1.9 樣品的測定 分別吸取2.2.1項下的供試液10μL、10μL與2.1.2項下的對照品溶液5μL、10μL交叉點于同一硅膠G薄層板上，按2.1.4項下的展開劑展開，取出，晾干，顯色，再按2.1.6項下的條件進行掃描，記錄峰面積積分值，采用外標兩點法計算.

2.2 滲漉法

2.2.1 提取方法 取牡丹皮480g，粉碎成粗粉，照流浸膏劑與浸膏劑項下的滲漉法（《中國藥典》2005年版一部附錄I O）用90%的乙醇作溶劑，浸漬24h，以1mL·min－1速度進行滲漉，收集滲濾液約為2 200mL，回收乙醇，真空干燥.稱取2g，粉碎成細粉，精密稱定，加95%乙醇80mL置量瓶中超聲處理30min，放置，冷卻，再用95%乙醇定容至100mL，搖勻，濾過，即得供試液.

2.2.2 樣品的測定 分別吸取2.1.1項下的供試液20μL、20μL與2.1.2項下的對照液5μL、10μL交叉點于同一硅膠G薄層板上，按2.1.4項下的展開劑展開，取出，晾干，顯色，再按照2.1.6項下的條件進行掃描，記錄峰面積積分值，運用外標兩點法計算.

表2 兩種提取方法的比較（n＝3）

由表2可知，牡丹皮中芍藥苷的提取率冷浸法和滲漉法分別為0.25g／100g和0.10g／100g，可以看出，冷浸法較滲漉法顯著，更有利于有效成分芍藥苷的溶出，這與速效心痛氣霧劑質(zhì)量標準的制法一致［5］，并且，冷浸法較滲漉法方便，可大量提取，更適于工業(yè)大生產(chǎn).

3 討論

雙波長薄層掃描法測定芍藥苷的提取率，要求展開劑配制要準確，否則對斑點形狀變化有影響.

芍藥苷含量測定方法較多，本實驗采用了醇提，并用三氯甲烷－乙酸乙酯－甲醇－甲酸（20∶2.5∶10∶0.1）展開，獲得分離較好的芍藥苷斑點，展開劑中甲酸可以防止斑點拖尾.

［1］季宇彬.中藥有效成分藥理與應用［M］.哈爾濱：黑龍江科學技術出版社，1994：78－79.

［2］胡南，許惠玉，陳志偉，等.芍藥苷的藥理學研究進展［J］.齊齊哈爾醫(yī)學院學報，2007，28（9）：1093－1095.

［3］國家藥典委員會.中華人民共和國藥典2005年版（一部）［S］.北京：化學工業(yè)出版社，2005：160.

［4］楊云，張晶，陳玉婷.天然藥物化學成分提取分離手冊［M］.北京：中國中醫(yī)藥出版社，2003：73－74.

［5］中華人民共和國衛(wèi)生部藥典委員會.衛(wèi)生部藥品標準中藥成方制劑第十一冊［S］.北京：中華人民共和國衛(wèi)生部，1996：150.