連翹提取物對(duì)斷奶仔豬抗氧化能力的影響

史東輝，陳 穎

（遼寧醫(yī)學(xué)院畜牧獸醫(yī)學(xué)院，遼寧 錦州 121001）

在崇尚自然、回歸自然的要求下，以及由于化學(xué)合成的抗氧化劑長(zhǎng)期使用對(duì)機(jī)體有一定的副作用,因此，從天然產(chǎn)物中選擇一種高效、無(wú)毒的抗氧化劑的意義重大。中草藥連翹為木犀科連翹落葉灌木，果實(shí)入藥，是我國(guó)藥典已收載的常用中藥[1]。連翹作為一種抗氧化物質(zhì)，保持了各種成分結(jié)構(gòu)的自然狀態(tài)和生物活性，具有化學(xué)合成的抗氧化劑無(wú)可比擬的天然性。

正常情況下，體內(nèi)產(chǎn)生的自由基即活性氧含量很低，且可被自身非酶性或酶性抗氧化系統(tǒng)清除掉。但在疾病、環(huán)境溫度、注射疫苗等應(yīng)激情況下，動(dòng)物體內(nèi)活性氧代謝系統(tǒng)的平衡被破壞，導(dǎo)致機(jī)體內(nèi)自由基的積累和生物膜通透性失常?？偪寡趸芰Γ═-AOC），超氧化物歧化酶（SOD）和谷胱甘肽過(guò)氧化物酶（GSH-Px）是常用的抗氧化指標(biāo)[2]，丙二醛（MDA）含量是反映生物膜脂質(zhì)過(guò)氧化的水平和對(duì)細(xì)胞膜傷害程度的指標(biāo)[3]。

連翹提取物主要有連翹酯苷和連翹苷2種主要活性成分[4]。一些研究表明，連翹提取物具抗氧化作用，可以降低小鼠因四氧嘧啶所致氧化損傷而引起的肝臟、心臟、股四頭肌、腦組織、紅細(xì)胞中MDA、SOD、過(guò)氧化物酶（POD）以及小鼠血清中谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT）、谷草轉(zhuǎn)氨酶（AST）、堿性磷酸酶（AKP）的異常升高[5]。中央民族大學(xué)生命與環(huán)境科學(xué)學(xué)院研究發(fā)現(xiàn)，連翹提取物對(duì)肉仔雞生長(zhǎng)性能和抗氧化活性也有很大影響。在熱應(yīng)激下，連翹提取物可能是通過(guò)清除自由基途徑，緩解熱應(yīng)激誘導(dǎo)的活性氧對(duì)腸黏膜的損傷，改善營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)消化率和生長(zhǎng)性能，說(shuō)明連翹提取物是良好的抗氧化物質(zhì)[6]。但目前許多中草藥添加劑有效成分不明或有效成分含量過(guò)低、使用劑量過(guò)大等問(wèn)題，而且對(duì)仔豬抗氧化功能的影響國(guó)內(nèi)外還鮮有報(bào)道，而連翹提取物在斷奶仔豬日糧中的應(yīng)用國(guó)內(nèi)外還未見報(bào)道。

本試驗(yàn)測(cè)定了仔豬斷奶后1、7、15 d 的血清總抗氧化能力（T-AOC），超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽過(guò)氧化物酶（GSH-Px）、過(guò)氧化氫酶（CAT）和丙二醛（MDA）含量的變化，探討連翹提取物對(duì)斷奶仔豬抗氧化功能的影響，旨在揭示其可能的作用機(jī)理，為連翹提取物的臨床應(yīng)用提供理論參考。

1 材料和方法

1.1 試驗(yàn)動(dòng)物與日糧

試驗(yàn)選取健康狀況良好、胎次相近、（28±2）d、平均體重8.83 kg的杜×長(zhǎng)×大三元雜交斷奶仔豬48頭，采用單因子隨機(jī)分組試驗(yàn)設(shè)計(jì)，分為3組，其中1組為對(duì)照組，其余2組為試驗(yàn)組，每組設(shè)4個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)4頭仔豬，公母各半。試驗(yàn)期為15 d，斷奶前2 d逐漸過(guò)渡試驗(yàn)期日糧，試驗(yàn)無(wú)預(yù)飼期。

按照NRC（1998）豬的營(yíng)養(yǎng)需要結(jié)合中國(guó)豬飼養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)（2004）配制“玉米-豆粕”基礎(chǔ)日糧，基礎(chǔ)日糧配方為：玉米 63%，膨化大豆 22%，乳清粉 5%，魚粉 5%，豆油 1%，預(yù)混料 4%。日糧主要營(yíng)養(yǎng)指標(biāo)：消化能 14.14 MJ/kg，粗蛋白 18.26%，鈣 0.93%，有效磷 0.47%，總賴氨酸 1.21%，總蛋氨酸＋胱氨酸 0.75%。基礎(chǔ)日糧中添加抗生素為對(duì)照組，添加連翹提取物為試驗(yàn)組。試驗(yàn)Ⅰ組添加250 g/t連翹提取物替代50%抗生素，試驗(yàn)Ⅱ組添加500 g/t連翹提取物替代全部抗生素。

1.2 飼養(yǎng)管理

試驗(yàn)豬各組環(huán)境條件一致，高床飼養(yǎng)。均為顆粒料，自由采食，斷奶前2 d逐漸過(guò)渡，自由飲水。日常管理與免疫程序按豬場(chǎng)常規(guī)進(jìn)行。豬舍溫度控制在22～26 ℃。

1.3 樣品采集

試驗(yàn)開始和結(jié)束的早晨8：00空腹個(gè)體稱重，試驗(yàn)期間每天記錄飼料消耗量；試驗(yàn)期間每組隨機(jī)選取4頭空腹仔豬分別于仔豬斷奶后1、7、15 d 早晨8：30—9：30的時(shí)候，腔靜脈采血10 mL（全程采血的豬只一致），3 000 r/min離心20 min，制備血清，并分裝成小包裝，4 ℃保存，2 d 內(nèi)完成酶的指標(biāo)測(cè)定。

1.4 檢測(cè)指標(biāo)與方法

血清總抗氧化能力（T-AOC），超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽過(guò)氧化物酶（GSH-Px）、過(guò)氧化氫酶（CAT）及丙二醛（MDA）含量采用試劑盒測(cè)定，具體操作方法對(duì)照南京建成生物工程研究所的試劑盒說(shuō)明書。

1.5 數(shù)據(jù)處理與統(tǒng)計(jì)分析

試驗(yàn)數(shù)據(jù)采用Excel處理，應(yīng)用SPSS13.0軟件One-way ANOVA方法進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，并采用Duncan法多重比較，結(jié)果以平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤表示。

2 結(jié)果與分析

2.1 連翹提取物對(duì)斷奶仔豬血清T-AOC的影響

表1表明，試驗(yàn)各組仔豬血清T-AOC在斷奶后均有所下降，尤以對(duì)照組下降最為明顯，這是因?yàn)槭軘嗄虘?yīng)激影響的結(jié)果，但試驗(yàn)各組間差異均不顯著（P>0.05）。斷奶后1 d 各組仔豬的T-AOC值之間差異不明顯；但斷奶后7 d，試驗(yàn)I組仔豬血清T-AOC比對(duì)照組提高8.44%，試驗(yàn)Ⅱ組仔豬血清T-AOC比對(duì)照組提高8.66%，試驗(yàn)Ⅱ組仔豬血清T-AOC比試驗(yàn)I組提高0.20%；斷奶后15 d，試驗(yàn)I、Ⅱ組仔豬血清T-AOC分別比對(duì)照組提高8.80%和11.30%，試驗(yàn)Ⅱ組比試驗(yàn)I組的仔豬血清T-AOC提高了2.30%。

表1 連翹提取物對(duì)斷奶仔豬血清T-AOC的影響

2.2 連翹提取物對(duì)斷奶仔豬血清SOD活性的影響

如表2所示，斷奶后各組仔豬血清SOD活性均呈下降的趨勢(shì)，但試驗(yàn)組始終高于對(duì)照組，但試驗(yàn)各組間差異均不顯著（P>0.05）。斷奶后l d，對(duì)照組、試驗(yàn)I組和試驗(yàn)Ⅱ組血清SOD活性相差較小，對(duì)照組分別比試驗(yàn)I組和試驗(yàn)Ⅱ組低2.35% 和1.46%；斷奶后7 d，試驗(yàn)I、Ⅱ組SOD活性分別比對(duì)照組提高4.17%和5.07%，試驗(yàn)Ⅱ組血清SOD活性比試驗(yàn)I組提高0.86%；斷奶后15 d，試驗(yàn)I、Ⅱ組SOD活性分別比對(duì)照組提高5.16%和5.31%，試驗(yàn)Ⅱ組血清SOD活性比試驗(yàn)I組提高0.14%。

表2 連翹提取物對(duì)斷奶仔豬血清SOD的影響

2.3 連翹提取物對(duì)斷奶仔豬血清GSH-Px活性的影響

由表3可知，斷奶后隨著時(shí)間的增加，各試驗(yàn)組仔豬血清GSH-Px活性有較大幅度升高，爾后有所下降，但下降幅度不大，試驗(yàn)各組間差異依然不顯著（P>0.05）。斷奶后1 d，試驗(yàn)各組仔豬血清GSH-Px活性差異不明顯。斷奶后7 d，試驗(yàn)I組、試驗(yàn)Ⅱ組GSH-Px活性比對(duì)照組分別提高3.32%和3.98%，而試驗(yàn)Ⅱ組比試驗(yàn)I組GSH-Px活性僅僅提高0.64%；斷奶后15 d，試驗(yàn)I組GSH-Px活性比對(duì)照組提高了4.54%，試驗(yàn)Ⅱ組GSH-Px活性比對(duì)照組提高了5.76%，同時(shí)試驗(yàn)Ⅱ組比試驗(yàn)I組GSH-Px活性提高1.16%。

表3 連翹提取物對(duì)斷奶仔豬血清GSH-Px的影響

2.4 連翹提取物對(duì)斷奶仔豬血清CAT活性的影響

從表4可以看出，試驗(yàn)期間斷奶后各組仔豬血清CAT活性呈下降的趨勢(shì)。試驗(yàn)組血清CAT活性較對(duì)照組高。斷奶后1 d，試驗(yàn)各組仔豬血清CAT活性差異不顯著。斷奶后7 d，試驗(yàn)I組仔豬血清CAT活性比對(duì)照組提高14.55%，試驗(yàn)Ⅱ組仔豬血清CAT活性比對(duì)照組提高17.51%。斷奶15 d后，試驗(yàn)I組、Ⅱ組仔豬血清CAT活性分別比對(duì)照組提高1.32%和6.58%，試驗(yàn)Ⅱ組仔豬血清CAT活性比試驗(yàn)I組提高5.20%。但整個(gè)試驗(yàn)期內(nèi)，試驗(yàn)各組間差異依然不顯著（P>0.05）。

2.5 連翹提取物對(duì)斷奶仔豬血清MDA含量的影響

由表5可以看出，各試驗(yàn)組仔豬血清MDA含量隨著仔豬斷奶后時(shí)間的增加均有所下降，但試驗(yàn)組血清MDA含量始終較對(duì)照組低，各組間差異均不顯著（P>0.05）。斷奶后1 d，各試驗(yàn)組仔豬血清MDA含量差異不顯著；斷奶后7 d，試驗(yàn)I組血清MDA含量比對(duì)照組降低7.06%，試驗(yàn)Ⅱ組比對(duì)照組血清MDA含量降低5.58%，試驗(yàn)Ⅱ組仔豬血清MDA含量比試驗(yàn)I組略有上升（1.60%）；斷奶后15 d，試驗(yàn)I組、試驗(yàn)Ⅱ組血清MDA含量分別比對(duì)照組降低3.50%和8.95%，試驗(yàn)Ⅱ組仔豬血清MDA含量比試驗(yàn)I組下降5.65%。

表4 連翹提取物對(duì)斷奶仔豬血清CAT的影響

表5 連翹提取物對(duì)斷奶仔豬血清MDA含量的影響

3 討論

研究表明，仔豬因斷奶產(chǎn)生的應(yīng)激反應(yīng)使動(dòng)物機(jī)體內(nèi)自由基過(guò)量生成，引起脂質(zhì)、蛋白質(zhì)和DNA的氧化損傷，易誘導(dǎo)各種疾病的發(fā)生，使動(dòng)物生長(zhǎng)發(fā)育減緩，免疫力減弱，生產(chǎn)性能下降，產(chǎn)品質(zhì)量降低，飼料轉(zhuǎn)化率降低等[9]。與此同時(shí)仔豬體內(nèi)存在著一套自由基清除體系，包括酶類和非酶類體系。其中酶類抗氧化劑又稱為內(nèi)源性抗氧化劑，主要包括SOD、GSH-Px、CAT等。SOD、GSH-Px和CAT清除過(guò)氧化物的能力主要取決于其酶的活性。

仔豬斷奶應(yīng)激可損害仔豬機(jī)體抗自由基系統(tǒng)及加速體內(nèi)過(guò)氧化反應(yīng)。本試驗(yàn)仔豬受斷奶應(yīng)激的影響，各組血清T-AOC均有所下降，尤以對(duì)照組下降最為明顯。但斷奶后7 d，試驗(yàn)I組仔豬血清T-AOC比對(duì)照組提高8.44%，試驗(yàn)Ⅱ組仔豬血清T-AOC比對(duì)照組提高8.66%，試驗(yàn)Ⅱ組仔豬血清T-AOC比試驗(yàn)Ⅰ組提高0.20%，說(shuō)明日糧中添加連翹提取物提高了仔豬體內(nèi)血清的總抗氧化能力。有學(xué)者報(bào)道，連翹提取物其主要成分連翹酯苷和連翹苷有很強(qiáng)的抗氧化性質(zhì)，而其他次要成分在抗氧化方面發(fā)揮著重要的協(xié)同作用[10]。

斷奶后各組仔豬血清SOD活性、CAT活性均呈下降趨勢(shì)，但添加連翹提取物組始終高于對(duì)照組。仔豬斷奶后隨著時(shí)間的增加，各試驗(yàn)組仔豬血清GSH-Px活性有較大幅度升高，維持在一個(gè)較高水平后有所下降，但下降幅度不大。試驗(yàn)I組、試驗(yàn)Ⅱ組GSH-Px活性比對(duì)照組有所提高，但差異均不顯著。

自由基作用于脂質(zhì)發(fā)生過(guò)氧化反應(yīng)，對(duì)生物膜具有強(qiáng)烈的破壞作用，氧化終產(chǎn)物為丙二醛（MDA），MDA能引起突變及有致癌的危險(xiǎn)。MDA含量反映氧自由基介導(dǎo)的脂質(zhì)過(guò)氧化程度。

本試驗(yàn)隨仔豬斷奶后時(shí)間的延長(zhǎng)，各試驗(yàn)組仔豬血清MDA含量均有所下降。但試驗(yàn)組血清MDA含量始終較對(duì)照組低。斷奶后15 d，試驗(yàn)I組、試驗(yàn)Ⅱ組血清MDA含量分別比對(duì)照組降低3.50%和8.95%。這可能是連翹提取物中的活性成分連翹酯苷和連翹苷進(jìn)入循環(huán)系統(tǒng)、分布和存留在組織中表現(xiàn)出了抗氧化活性。這說(shuō)明連翹提取物可以增強(qiáng)機(jī)體清除自由基的能力，減弱脂質(zhì)過(guò)氧化的程度，改善動(dòng)物的抗氧化能力，能夠一定程度上緩解仔豬斷奶帶來(lái)的應(yīng)激反應(yīng)[11]。

以上各項(xiàng)指標(biāo)，試驗(yàn)Ⅱ組優(yōu)于試驗(yàn)I組，但差異并不顯著（P>0.05），其原因有待于進(jìn)一步研究。本試驗(yàn)時(shí)間只有15 d，因此長(zhǎng)期添加連翹提取物是否可以提高仔豬的抗氧化能力有待于進(jìn)一步的試驗(yàn)研究。

4 結(jié)論

本試驗(yàn)表明，日糧中添加連翹提取物替代50%抗生素和替代全部抗生素均有提高斷奶仔豬抗氧化能力的趨勢(shì)。

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