熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)檢測尿中乙肝病毒DNA的意義

王彥華，金淑華

（赤峰市傳染病防治醫(yī)院 檢驗(yàn)科，內(nèi)蒙古 赤峰 024000）

熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)檢測尿中乙肝病毒DNA的意義

王彥華，金淑華

（赤峰市傳染病防治醫(yī)院 檢驗(yàn)科，內(nèi)蒙古 赤峰 024000）

目的：研究乙肝攜帶者尿液HBVDNA含量及傳染性.方法：用熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)（FQ-PCR）檢測50例患者血清乙肝病毒DNA含量大于104拷貝/ml患者尿液中乙肝病毒DNA含量比較.結(jié)果：尿中HBV-DNA含量與血清中HBV-DNA含量存在正相關(guān)關(guān)系（r=0.797,p<0.01）.結(jié)論：血清中HBV-DNA含量拷貝數(shù)越大，尿液中HBV-DNA含量拷貝數(shù)也越大，HBV-DNA拷貝數(shù)高的患者注意尿液的傳染性.

HBV-DNA；尿液；熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)

乙型病毒性肝炎是我國最常見的傳染性疾病，已經(jīng)成為嚴(yán)重的國際社會衛(wèi)生問題，HBV-DNA位于HBV核心部位，是HBV感染最直接、最特異、最靈敏的指標(biāo)，它的存在表示病毒復(fù)制活躍，傳染性強(qiáng).臨床醫(yī)生常用血清中HBV-DNA拷貝數(shù)高低反應(yīng)病毒的復(fù)制情況和傳染性.但進(jìn)行檢測尿中HBVDNA含量及傳染性研究卻很少.

1 對象與方法

1.1 對象

50例尿液標(biāo)本來自2011年3月至2011年4月在我院住院的患者，其血清乙肝病毒DNA含量大于104拷貝/ml，取中段晨尿3-5mL，標(biāo)本不加防腐劑，及時(shí)送檢.

1.2 儀器與試劑

熒光定量PCR儀（Line-Gene熒光PCR檢測儀）,試劑購自深圳凱杰生物工程有限公司.

1.3 方法

取待側(cè)尿液100uL加入100uLDNA提取液1，震蕩混勻，13000rpm離心10分鐘，吸取上清液，再加入25uLDNA提取液2，震蕩混勻至沉淀完全溶解，100℃干浴10分鐘，13000rpm離心10分鐘，上清液待用.陰性、陽性、臨界對照同標(biāo)本處理.標(biāo)準(zhǔn)品濃度采用 5×104、5×105、5×106、5×107拷貝/mL.取上述標(biāo)準(zhǔn)品及上清液2uL加入到PCR反應(yīng)管中，按以下條件進(jìn)行擴(kuò)增，37℃5min,94℃1min后，95℃5sec,60℃30sec,40個(gè)循環(huán)，反應(yīng)體系為40uL，熒光信號收集設(shè)在60℃.

2 結(jié)果

將血清與尿液HBV-DNA;進(jìn)行對數(shù)處理，計(jì)算平均值和標(biāo)準(zhǔn)差（見表1）

表1 血清與尿液HBV-DNA計(jì)算平均值和標(biāo)準(zhǔn)差

3 討論

尿液屬人體排泄物，對外環(huán)境污染較為廣泛.近年，國內(nèi)外學(xué)者相繼報(bào)道在血清乙肝表面抗原陽性患者的尿液中檢查到乙肝表面抗原陽性[1-2]，提示通過乙型肝炎表面抗原陽性尿液可污染環(huán)境，要證實(shí)尿液傳染性并評價(jià)其流行病學(xué)意義，尚需直接從尿液中查到乙肝病毒復(fù)制所依賴的HBV-DNA.

HBV-DNA作為乙型肝炎病毒感染的分子生物學(xué)標(biāo)志，可以直接反映體內(nèi)病毒的復(fù)制狀況，是HBV存在的最可靠的證據(jù).近年來發(fā)展FQ-PCR,是目前可用于臨床定量檢測HBV-DNA最理想的方法[3].從我們的結(jié)果可以看出，尿中HBV-DNA含量與血清中HBV-DNA含量存在正相關(guān)關(guān)系且血清標(biāo)本中乙肝病毒含量越高其尿液中乙肝病毒含量也越高，尤其血清中HBV-DNA含量拷貝數(shù)超過105時(shí).

尿液的形成是血液經(jīng)腎小球?yàn)V過，腎小管集合管重吸收及其分泌和排泄而產(chǎn)生，血液中某些成分如小分子物質(zhì)可以通過腎小管進(jìn)入尿液，而乙肝病毒正是小分子物質(zhì)，可隨尿液排泄[4].所以，通過對尿液中HBV-DNA的定量檢測，可以了解到乙肝病毒不僅存在血液中，還可以存在尿液中.早期研究認(rèn)為，乙型肝炎主要經(jīng)輸血、注射、針刺和母嬰途徑傳播.但近年來通過流行病學(xué)調(diào)查及實(shí)驗(yàn)研究表明，有大量的人群并無輸血、注射、針刺和母嬰途徑感染的歷史，仍然可以感染上乙型肝炎.今天我們對乙型肝炎病毒傳播途徑的認(rèn)識，應(yīng)該發(fā)生改變.特別是尿液HBV-DNA陽性的患者，無疑具有環(huán)境污染的感染性和廣闊范圍的傳染性.所以應(yīng)該對尿液傳播引起足夠重視.

以上研究表明:HBV-DNA陽性的尿液具有傳染性，是構(gòu)成對社會人群潛在的危險(xiǎn)因素，在病毒性乙型肝炎接觸傳播中具有十分重要的流行病學(xué)意義.尿液的傳播可能是目前乙型肝炎繼血液、母嬰傳播之外又一重要的傳播途徑.

〔1〕蔡來舟.98份尿中HBsAg檢測情況的報(bào)告.中華流行病學(xué)雜志，1986，（7）4:208.

〔2〕彭有源.尿中HBsAg檢出及流行病學(xué)意義的初步研究.中國公共衛(wèi)生，1987，6（2）:90.

〔3〕鄭輝.熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)測定乙型肝炎患者血清HBV-DNA血清標(biāo)志物及其意義[J].廣東醫(yī)學(xué)，2000,21（2）：1512-1521.

〔4〕高雅敏.乙肝病毒攜帶者78例尿5項(xiàng)指標(biāo)檢測結(jié)果分析[J].職業(yè)與健康，2005,21（4）：525.

R512.6+2

A

1673-260X（2012）01-0061-01