雞尿酸鹽沉積模型的研究與機(jī)理探討

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(河南新正好生物工程有限公司，河南鄭州 450011)

雞尿酸鹽沉積癥, 是一種由蛋白質(zhì)及嘌呤核苷酸代謝障礙引起的高尿酸血癥、 腎功能損害性疾病[1]，是家禽的常見病，不同季節(jié)，不同日齡的各種家禽均可發(fā)生。尿酸鹽沉積的原因有：傳染病因素，如腎型傳染性支氣管炎、傳染性法氏囊病、包涵體肝炎等；營(yíng)養(yǎng)因素，如蛋白或鈣含量過高、鈣磷比例失衡、維生素缺乏等；管理因素，如溫度高飲水不足、雞舍通風(fēng)不良、空氣中氨氣含量過高等[2]。尿酸鹽沉積癥可引起雞只飲水量、采食量下降，血液中尿酸含量升高，關(guān)節(jié)腫大，行動(dòng)遲緩，嚴(yán)重者腎臟呈花斑狀，臟器、關(guān)節(jié)表面及間質(zhì)組織有大量白色尿酸鹽結(jié)晶?；茧u不僅生長(zhǎng)緩慢，生產(chǎn)性能降低，而且死亡率高達(dá)30%[3]。本試驗(yàn)通過人工試驗(yàn)雞尿酸鹽沉積模型，觀察腎臟臨床病理變化，旨在探究雞尿酸鹽沉積的機(jī)制，為開發(fā)治療尿酸鹽沉積病的新藥提供指導(dǎo)，為其預(yù)防提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1試驗(yàn)動(dòng)物 8日齡AA雞60羽，隨機(jī)分為健康對(duì)照組(15羽)、44.0%高蛋白組(15羽)，高鈣組(15羽，0.5%鈣飲水)、44.0%高蛋白高鈣組(15羽，0.5%鈣飲水)4組。

1.2飼料配制 魚粉(蛋白含量60%，秘魯產(chǎn)),飼料(鄭州市某飼料有限責(zé)任公司生產(chǎn))，健康組飼喂普通肉雞飼料，高蛋白組飼喂總蛋白為44.0%的含魚粉飼料，高鈣組0.5%鈣飲水，高蛋白高鈣組飼喂總蛋白為44.0%的魚粉飼料和0.5%鈣飲水。

1.3試劑 鎢酸鈉(成都市某化工試劑廠生產(chǎn)，批號(hào)：20081121),碳酸鋰(天津市某化學(xué)試劑科技有限公司生產(chǎn)，批號(hào)：20090511)，檸檬酸鈉(天津市某化學(xué)試劑開發(fā)中心生產(chǎn)，批號(hào)：20090310)，濃磷酸(天津市某化學(xué)試劑有限公司生產(chǎn)，批號(hào)：20090612)，濃硫酸(天津市某化學(xué)試劑有限公司生產(chǎn)，批號(hào)：20070516)，乙二醇(天津市某化學(xué)試劑有限公司生產(chǎn)，批號(hào)：20081106)，碳酸鈣(天津市某化學(xué)試劑開發(fā)中心生產(chǎn)，批號(hào)：20090925)，碳酸鈉(天津市某化學(xué)試劑開發(fā)中心生產(chǎn)，批號(hào)：20090416)，氯化鈣(天津市某化學(xué)試劑開發(fā)中心生產(chǎn)，批號(hào)：20090628)。

1.4藥物 尿酸對(duì)照品(北京某科技有限公司生產(chǎn))。

1.5體重測(cè)定 隨機(jī)測(cè)定20羽試雞的個(gè)體體重，取平均值，觀察體重變化情況。

1.6飼料消耗 自由飲水和采食，記錄24 h總飲水量和采食量，計(jì)算每羽試雞每d平均飲水量和采食量。

1.7死亡率統(tǒng)計(jì) 記錄供試雞在造模試驗(yàn)中，每d死亡數(shù)，觀察死亡高峰期。

1.8血液中尿酸鹽含量測(cè)定 每組試雞采血1 mL，放入含3.8%草酸鈉溶液1 mL的容器中，混合均勻，12 h內(nèi)按臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程測(cè)定血液中尿酸鹽含量[4]。

1.9試雞生理、病理變化測(cè)定 解剖試驗(yàn)雞，觀察消化系統(tǒng)、泌尿系統(tǒng)(特別是腎臟變化)生理、病理變化。

2 結(jié)果與分析

2.1體重變化 詳見表1。

表1 各組雞試驗(yàn)前后體重變化

由表1可知，試雞平均始重(8日齡)為81.1 g～81.5 g,最大相差0.4 g；飼養(yǎng)5 d后(13日齡)，試雞體重為134.6 g～204.9 g，最大相差70.3 g，差異明顯，高蛋白組每羽平均增重68.0 g，高鈣組每羽平均增重58.8 g，高蛋白高鈣組每羽平均增重53.5 g，健康對(duì)照組每羽平均增重123.7 g。試驗(yàn)表明，高蛋白和高鈣可明顯影響雞的正常生長(zhǎng)發(fā)育，0.5%的鈣比44.0%的高蛋白對(duì)雞的生產(chǎn)性能影響更大。從增重效果看，高蛋白高鈣組增重率最低，其生產(chǎn)性能明顯受到了抑制。

2.2飲水和采食量變化 詳見表2和表3。

表2 試驗(yàn)雞日均飲水量變化

表3 試驗(yàn)雞日均采食量變化

由表2可知，給水第1 d，各組試雞平均飲水量變化不大(56.4 g～68.3 g之間)，至試驗(yàn)第5 d時(shí)，飲水量最少的高鈣組僅為30.2 g，最大的高蛋白組為116.8 g，高蛋白組的飲水量為高鈣組的3.9倍，為高蛋白高鈣組的2.7倍，差異顯著。

由表3可知，喂料第1 d，各組試雞的平均采食量為32.5 g～34.3 g,相差不超過2.0 g，至試驗(yàn)第5 d時(shí)，高蛋白組每雞的平均采食量為53.1 g，健康對(duì)照組為46.9 g，高鈣組則僅為17.3 g，高蛋白高鈣組僅為16.9 g，高蛋白組每雞的平均采食量為高蛋白高鈣組的3.1倍以上，是高鈣組的3.1倍。各組試驗(yàn)雞的平均采食量和飲水量呈同一趨勢(shì)，即高蛋白組和健康對(duì)照組的采食量每天逐漸增加，高鈣組則逐漸減少，高蛋白高鈣組則為先增加后減少。

2.3死亡率統(tǒng)計(jì) 詳見表4。

由表4可知，模型試驗(yàn)中，每組供試雞15羽，在5 d試驗(yàn)中，健康對(duì)照組及高蛋白組未見死雞，高鈣組在第4 d、第5 d各死1羽，高蛋白高鈣組在第3 d、第4 d各死1羽，第5 d死2羽。即高鈣組的死亡率為13.33%，高蛋白高鈣組的死亡率為26.67%，該結(jié)果與相關(guān)報(bào)道基本相符[5，6]。

2.4血清中尿酸鹽含量的測(cè)定 采用磷鎢酸還原法測(cè)定血清尿酸含量，各組試雞采集雞血1 mL于含有1 mL草酸鈉試管中，按臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程，采用紫外分光光度計(jì)在660 nm處測(cè)定吸光度，并計(jì)算血清中尿酸鹽含量如表5所示。

由表5可知，高蛋白組試驗(yàn)雞血清中的尿酸鹽含量為297.90 μmol/L，比健康對(duì)照組268.53 μmol/L高29.37 μmol/L。試驗(yàn)雞中，以高蛋白高鈣組血清尿酸含量最高達(dá)423.78 μmol/L，為健康對(duì)照組血清尿酸含量的1.6倍。測(cè)定結(jié)果與黎曉敏等(1998)[7]報(bào)道基本相符，但與李榮譽(yù)等(2001)[8]報(bào)道測(cè)定結(jié)果相比則偏低。

表5 尿酸含量計(jì)算

2.5病理變化比較 試驗(yàn)結(jié)束后，比較各組試驗(yàn)雞的精神狀態(tài)，剖檢健康組雞的腎臟變化，發(fā)現(xiàn)腎臟表面光滑，有光澤，顏色鮮潤(rùn)，塊狀結(jié)構(gòu)分布明顯，血液顏色鮮紅；剖檢高蛋白高鈣組雞的腎臟變化，則發(fā)現(xiàn)腎臟表面缺少光澤、發(fā)干，顏色暗淡，腎臟腫大，塊狀結(jié)構(gòu)分布不明顯，腎臟內(nèi)部結(jié)構(gòu)呈不規(guī)則的花斑狀，血液顏色變深。

3 小結(jié)與討論

3.1尿酸鹽沉積機(jī)理

一是生物沉積。自身免疫反應(yīng)，體內(nèi)抗原抗體反應(yīng)沉淀物在腎臟蓄積，如當(dāng)病原體( 如細(xì)菌、病毒、寄生蟲等) 侵入雞體后，體內(nèi)的防御系統(tǒng)就會(huì)產(chǎn)生抗體以抵抗這些病原體。在抗體抵抗抗原的過程中，抗體戰(zhàn)勝了入侵病原體，使疾病得以痊愈。然而在抗體抵抗抗原的過程中，也破壞了自身組織，從而引發(fā)疾病?？乖贵w在競(jìng)爭(zhēng)過程中形成抗原抗體復(fù)合物，這些復(fù)合物則可在腎臟內(nèi)沉積[9]。

二是物理沉積。因腎功能損傷(腎炎等)，導(dǎo)致物質(zhì)代謝障礙，大量的鈣鹽就會(huì)從血液中析出，沉積在腎臟，引起腎腫。飼料配合不合理或選擇原料使用不當(dāng)，造成鈣、磷比例增大，就會(huì)促進(jìn)血鈣升高，增加腎臟排泄負(fù)擔(dān)，長(zhǎng)時(shí)間就會(huì)引起鈣鹽沉積于輸尿管內(nèi)而導(dǎo)致腎臟發(fā)生病變，如腎結(jié)石和痛風(fēng)病等[10].

三是化學(xué)沉積。體內(nèi)代謝的CO2、尿酸等物質(zhì)在腎臟內(nèi)與代謝的鈣、鎂等離子發(fā)生化學(xué)反應(yīng)，形成碳酸鹽或尿酸沉淀，如飼喂高蛋白飼料而引起尿酸鹽沉積。家禽攝入蛋白質(zhì)的代謝終產(chǎn)物為尿酸(家畜是尿素)，若血液中尿酸增多，當(dāng)超出腎臟的排泄限度時(shí)，就會(huì)引起尿酸在體內(nèi)的蓄積；同時(shí)，由于尿酸長(zhǎng)期和過度地刺激腎小管上皮細(xì)胞，引起粘膜變性，致使腎臟排泄障礙，則會(huì)加重尿酸鹽在體內(nèi)的沉積[11]。

試驗(yàn)選用高蛋白和高鈣飼料進(jìn)行人工試驗(yàn)得出雞尿酸鹽沉積模型，可有上述理論作為依據(jù)。

3.2尿酸鹽沉積模型 試驗(yàn)采用高蛋白和高鈣飼料，飼喂雛雞，造成尿酸鹽沉積。建立的尿酸鹽沉積模型，主要通過雛雞的增重率、采食及飲水量、死亡率、血清尿酸鹽含量測(cè)定、腎臟病理變化等指標(biāo)進(jìn)行考察。增重率是考察尿酸鹽沉積模型的重要指標(biāo)之一。8日齡雛雞平均體重為81.0 g，以81.0 g±5.0 g選雞分組；采食及飲水量主要考察高蛋白、高鈣對(duì)雞體生產(chǎn)性能的影響；死亡率和臨床病理變化考察，則更接近于臨床發(fā)生的尿酸鹽沉積癥，一方面表現(xiàn)為飲水、采食量下降，精神萎靡，排出糞便尿酸鹽含量增加，腎臟腫大，呈花斑狀等；另一方面發(fā)生尿酸鹽沉積癥則會(huì)引起雛雞死亡率增加，有報(bào)道稱尿酸鹽沉積癥死亡率可達(dá)40%以上[5]。

3.3尿酸鹽沉積模型的建立，對(duì)養(yǎng)禽業(yè)具有較大的指導(dǎo)意義，在雞飼料配制中，必須注意蛋白和鈣的比例，高蛋白易引起尿酸鹽沉積癥，影響雞的生產(chǎn)性能；高鈣不僅能引起尿酸鹽沉積癥，嚴(yán)重者還可引起成批死亡，即使鈣磷比例適當(dāng)，鈣的含量也不能超過1.0%[12]。

尿酸鹽沉積模型的建立，為新藥研究與開發(fā)，提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

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