鄧?yán)瞎谛哪z囊對(duì)動(dòng)脈粥樣硬化斑塊影響的實(shí)驗(yàn)研究

李新梅，毛 煒，吳煥林，陳秋雄

隨著社會(huì)發(fā)展及生活方式的改變，動(dòng)脈粥樣硬化性心臟病已嚴(yán)重威脅人類健康。早期的動(dòng)脈粥樣硬化(Atherosclerosis，AS)為脂質(zhì)條紋，逐漸發(fā)展形成成熟的粥樣斑塊。粥樣斑塊的潰瘍、破裂是臨床心血管病事件發(fā)生的關(guān)鍵病理生理學(xué)基礎(chǔ)。急性心血管病事件主要取決于AS斑塊的不穩(wěn)定性，即易損性，而斑塊中的薄纖維帽與易損性緊密相關(guān)。因此，有關(guān)斑塊穩(wěn)定性的研究已成為近年來AS領(lǐng)域中的研究熱點(diǎn)。ApoE基因敲除小鼠 (Apolipoprotein E knockout mice，ApoE-/-mice)所致的高脂血癥和動(dòng)脈粥樣硬化(AS)模型是緣于遺傳因素?fù)p傷，其病變特點(diǎn)更接近人類［l-2］。

本研究擬從形態(tài)學(xué)角度及對(duì)血脂的影響，探討鄧?yán)瞎谛哪z囊對(duì)ApoE小鼠動(dòng)脈粥樣硬化斑塊及血脂的影響，以期為臨床應(yīng)用中藥防治高脂血癥和動(dòng)脈粥樣硬化提供科學(xué)依據(jù)，為進(jìn)一步探討其作用機(jī)制奠定基礎(chǔ)。

1 資料與方法

1.1 研究對(duì)象及分組 5周齡雄性ApoE小鼠30只(購(gòu)于北京大學(xué)醫(yī)學(xué)部動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心)，飼以含脂肪21%(wt/wt)膽固醇0.15%的飼料，喂養(yǎng)13周后，將小鼠隨機(jī)分為2組:實(shí)驗(yàn)組及對(duì)照組各15只。給以同樣高脂飼料喂養(yǎng)的同時(shí)，實(shí)驗(yàn)組給以0.25 g冠心膠囊(拌于飼料，主要組成為黨參、田七、茯苓、法半夏、五爪龍、丹參、枳殼、陳皮等，廣東省中醫(yī)院院內(nèi)制劑，每粒含生藥4.5 g)，每日1次，連續(xù)喂13周。眼球取血后處死，無菌條件下取出心臟及主動(dòng)脈。取主動(dòng)脈根部，甲醛固定，常規(guī)石蠟包埋。

1.2 檢測(cè)項(xiàng)目及觀察指標(biāo) (1)病理形態(tài)學(xué)觀察:組織常規(guī)脫水，石蠟包埋、石蠟連續(xù)切片，染色。普通光鏡觀察并進(jìn)行圖像分析，計(jì)算斑塊占管腔比例，觀察薄纖維帽的形成情況。切片用CIMAX病理分析軟件進(jìn)行形態(tài)測(cè)量分析。測(cè)量粥樣斑塊面積(PA)與管腔面積(LA)的比例(PA/LA)。(2)血脂水平變化:ApoE小鼠處死前，眼球取血，將血靜置。離心制備血清，-20℃冰箱保存。稀釋血清，氧化酶法測(cè)定血清TC、TG、HDL-C和LDL-C水平。

2 結(jié)果

兩組ApoE小鼠在實(shí)驗(yàn)過程中均有死亡，開始給藥時(shí)給以灌胃治療，死亡小鼠較多，后拌于飼料中，無小鼠死亡。最后實(shí)驗(yàn)組處死8只小鼠，分別行病理及血脂檢查，對(duì)照組處死14只小鼠，全部行血脂檢查，其中1例病理取材不理想，故成功提取病理標(biāo)本13例。

2.1 病理形態(tài)學(xué)觀察 染色顯示，對(duì)照組小鼠主動(dòng)脈斑塊內(nèi)膽固醇酯及膽固醇結(jié)晶增多，纖維帽菲薄，表面有大量的泡沫細(xì)胞覆蓋，呈現(xiàn)易損斑塊特征。而實(shí)驗(yàn)組亦可見到動(dòng)脈粥樣硬化斑塊，但纖維帽較厚。同時(shí)，實(shí)驗(yàn)組小鼠粥樣斑塊面積(PA)與管腔面積(LA)的比例明顯低于對(duì)照組(P＜0.05)，見表1。

表1 兩組ApoE小鼠粥樣斑塊面積(PA)與管腔面積(LA)的比例

2.2 血脂水平變化 對(duì)兩組ApoE小鼠眼球取血，檢驗(yàn)血脂各項(xiàng)指標(biāo)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，兩者差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。實(shí)驗(yàn)組ApoE小鼠血脂水平與對(duì)照組小鼠比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P ＞0.05)。見表2。

表2 兩組小鼠血脂水平情況(mmol/L)

3 討論

鄧?yán)瞎谛哪z囊由我國(guó)名中醫(yī)鄧鐵濤教授經(jīng)驗(yàn)方—冠心方制成。鄧?yán)险J(rèn)為，冠心病為本虛標(biāo)實(shí)之證，其病機(jī)關(guān)鍵點(diǎn)為氣虛痰瘀。鄧?yán)线x用具有益氣除痰、行瘀通絡(luò)的藥物組成冠心方(黨參、田七、茯苓、法夏等)，在臨床運(yùn)用已30余年，具有很好的臨床療效，能顯著改善心絞痛癥狀，改善心電圖及血液流變學(xué)指標(biāo)［3］。近年來，筆者應(yīng)用由冠心方制成的鄧氏冠心膠囊治療心絞痛(廣東省中醫(yī)藥管理局課題)，發(fā)現(xiàn)其能改善心肌缺血，減少心絞痛的發(fā)作頻率及時(shí)間［4］，并能提高患者的生活質(zhì)量［5］。

吳衛(wèi)平等證明，丹參具有抗氧化功能，減少氧化低密度脂蛋白形成［6］。穿心蓮等有保護(hù)內(nèi)皮功能［7］。還有研究表明，活血化瘀的中藥可改善血液理化性質(zhì)，調(diào)整凝血系統(tǒng)功能，抑制血小板聚集，防治心肌缺血［8］。制首烏、桑寄生對(duì)血管平滑肌細(xì)胞增生有抑制作用［9］。文川等［10］研究發(fā)現(xiàn)，具有活血化瘀作用的芎芍膠囊可抑制平滑肌細(xì)胞增殖和表型轉(zhuǎn)變(影響平滑肌細(xì)胞增殖相關(guān)基因蛋白表達(dá)和細(xì)胞跨膜信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo))?，F(xiàn)代藥理研究表明，黃芪［11］、黨參能增強(qiáng)心肌收縮力，改善左心功能，增加心排血量，丹參［12-13］、三七等具有抑制血小板聚集、降低血液粘稠度以及擴(kuò)張冠狀動(dòng)脈、減輕微血管阻力的作用。

目前，可制作動(dòng)脈粥樣硬化動(dòng)物模型的動(dòng)物有豬、兔、鼠等，比較公認(rèn)的較穩(wěn)定的模型當(dāng)屬ApoE基因敲除小鼠模型。本項(xiàng)目采用嚴(yán)謹(jǐn)?shù)膶?shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)，采用科學(xué)的動(dòng)物模型，觀察對(duì)ApoE基因敲除小鼠動(dòng)脈粥樣斑塊的影響，從而分析中醫(yī)藥穩(wěn)定斑塊的作用，具有先進(jìn)性及科學(xué)性。

本研究結(jié)果初步表明，鄧?yán)瞎谛哪z囊在減少動(dòng)脈粥樣硬化斑塊形成、穩(wěn)定動(dòng)脈粥樣硬化斑塊方面有一定療效，為中醫(yī)藥在防治冠心病中的作用機(jī)制進(jìn)行了初步、有益的探討。其具體機(jī)理尚待進(jìn)一步探討和研究。

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