• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    清肺化痰通絡(luò)方對肺纖維化大鼠基質(zhì)金屬蛋白酶-2、基質(zhì)金屬蛋白酶-9表達的影響

    2012-10-15 04:29:50趙敏陳忻怡陳振發(fā)
    中國醫(yī)藥導(dǎo)報 2012年15期
    關(guān)鍵詞:清肺肺纖維化陽性細(xì)胞

    趙敏 陳忻怡 陳振發(fā)

    [摘要] 目的 探討清肺化痰通絡(luò)方對博萊霉素A5(BLMA5)所致肺纖維化大鼠的干預(yù)作用及可能機制。 方法 將Wistar大鼠隨機分為對照組、模型組、干預(yù)組。模型組和干預(yù)組通過氣管插管灌注BLMA5復(fù)制大鼠肺纖維化模型,對照組給予等量生理鹽水氣管灌注;對照組和模型組給予生理鹽水灌胃,干預(yù)組給予清肺化痰通絡(luò)方藥物灌胃。灌胃后3、7、14、28 d分別處死大鼠,采用HE和Masson染色觀察肺組織病理變化,免疫組化染色檢測基質(zhì)金屬蛋白酶-2(MMP-2)、 MMP-9在肺組織的表達水平。 結(jié)果 清肺化痰通絡(luò)方能顯著改善大鼠的一般身體狀況,減輕肺泡炎及肺纖維化的程度。干預(yù)組和模型組肺內(nèi)MMP-2表達在第14天達到高峰,MMP-9的表達在第7天達到高峰,且兩組同時期MMP-2、MMP-9的表達均高于對照組(P < 0.05);干預(yù)組MMP-2、MMP-9表達低于同時期模型組 (P<0.01)。 結(jié)論 清肺化痰通絡(luò)方可能通過抑制MMP-2、MMP-9在肺內(nèi)的表達,對BLMA5致肺組織纖維化起到一定的防治作用。

    [關(guān)鍵詞] 肺纖維化;基質(zhì)金屬蛋白酶-2;基質(zhì)金屬蛋白酶-9

    [中圖分類號] R285.5 [文獻標(biāo)識碼] A [文章編號] 1673-7210(2012)05(c)-0014-03

    肺纖維化是多種慢性肺疾病的共同結(jié)局,表現(xiàn)為肺間質(zhì)細(xì)胞大量增殖、細(xì)胞外基質(zhì)(ECM) 異常增生及肺組織結(jié)構(gòu)的重構(gòu),疾病早期表現(xiàn)為彌漫性肺泡炎,肺泡結(jié)構(gòu)破壞,肺泡上皮細(xì)胞和基底膜的損傷是肺間質(zhì)纖維化病理過程的特征性改變,MMP-2和MMP-9可以降解肺泡壁基底膜的重要成分Ⅳ型膠原,因此,MMP-2和MMP-9在肺纖維化的發(fā)生過程中起著重要的作用。清肺化痰通絡(luò)方是全國名老中醫(yī)邱幸凡教授的臨床經(jīng)驗方,在臨床應(yīng)用中取得了較好療效。本實驗借鑒博萊霉素A5(BLMA5)誘發(fā)的大鼠肺纖維化模型,利用免疫組化法檢測肺內(nèi)MMP-2和MMP-9的表達,以探討清肺化痰通絡(luò)方防治肺纖維化的作用及可能機制。

    1 材料與方法

    1.1 實驗動物

    雌性Wistar大鼠72只,SPF級,體重(200±20)g,購于武漢大學(xué)試驗動物中心。

    1.2 試驗藥物

    清肺化痰通絡(luò)方由黃芩、瓜蔞、桃仁、地龍、黃芪、當(dāng)歸、魚腥草(購于湖北省中醫(yī)院)組成;常規(guī)水煎后,水浴濃縮藥液至每1 mL含生藥2 g,4℃保存。將BLMA5(8 mg/支,天津太和制藥有限公司,批號:030705)制成5 mg/mL的生理鹽水溶液。MMP-2單克隆抗體(產(chǎn)品編號:ZM-0330)、MMP-9單克隆抗體(產(chǎn)品編號:ZM-0335)及Sp試劑盒(產(chǎn)品編號:SP-9000)由北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司提供。

    1.3 肺纖維化模型制作

    參照文獻[1],將大鼠麻醉,趁動物吸氣瞬間,在額鏡的直視下迅速將焊錫制成圓頭的12號腰穿針頭,通過聲帶插入氣管約3~4 cm,緩慢注入BLMA5生理鹽水溶液1 mL/kg。立即將大鼠直立旋轉(zhuǎn)。

    1.4 動物分組及處理方法

    將72只大鼠隨機分為三組:① 模型組(24只):造模2 h后,生理鹽水灌胃,15 mL/(kg·d);② 干預(yù)組(24只):造模2 h后,清肺化痰通絡(luò)方水煎劑灌胃,15 mL/(kg·d);③對照組(24只):不造模,生理鹽水灌胃,15mL/(kg·d),灌胃前禁食4 h,不禁水。以上各組動物分別在實驗第3、7、14、28天各處死6只。

    1.5 標(biāo)本采集及處理

    經(jīng)0.5%戊巴比妥鈉溶液腹腔內(nèi)注射麻醉后,稱重;頸動脈放血處死,10%甲醛溶液固定右肺上葉,制作石蠟切片,用于HE染色和Masson染色及肺組織MMP-2和MMP-9表達檢測。

    1.6 指標(biāo)檢測

    1.6.1 病理染色分析依據(jù)Szapiel等[2]方法,確定肺泡炎及肺纖維化程度。①肺泡炎分級,0分:無明顯病變;1分:輕度肺泡炎,病變占全肺20%以下;2分:中度肺泡炎,病變局限在全肺20%~50%;3分:彌漫性肺泡炎,病變范圍超過50%。②肺間質(zhì)纖維化分級,0分:無肺間質(zhì)纖維化;1分:輕度肺間質(zhì)纖維化,病變范圍局限在全肺20%以下;2分:中度肺間質(zhì)纖維化,病變范圍占全肺20%~50%;3分:重度肺間質(zhì)纖維化,病變范圍超過50%,肺泡結(jié)構(gòu)消失,肺組織結(jié)構(gòu)紊亂。

    1.6.2 免疫組織化學(xué)分析Sp法測定肺組織的MMP-2和MMP-9表達,采用HUMIAS-2000醫(yī)學(xué)圖文分析系統(tǒng),對免疫組織化學(xué)結(jié)果定量分析。每張切片在高倍視野(×400)下隨機選擇不相重疊的5個視野,細(xì)胞核為藍(lán)色,MMP-2和MMP-9陽性細(xì)胞為棕黃色,陰性對照片以PBS替代MMP-2和MMP-9。測定陽性細(xì)胞的積分光密度,觀察MMP-2和MMP-9免疫陽性細(xì)胞的分布,以反映各組肺組織中MMP-2和MMP-9表達的變化。

    1.7 統(tǒng)計學(xué)方法

    采用SPSS 12.0統(tǒng)計學(xué)軟件進行數(shù)據(jù)分析,計量資料數(shù)據(jù)用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)表示,三組間比較采用單因素方差分析,用q檢驗進行不同組間的兩兩比較,以P < 0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

    2 結(jié)果

    2.1 清肺化痰通絡(luò)方對肺纖維化大鼠肺組織的影響

    2.1.1 肉眼觀察對照組可見大鼠肺呈粉紅色,表面光滑,彈性良好。模型組第3、7天可見大鼠雙肺呈鮮紅色,有數(shù)個的散在出血點,體積增大,第14天雙肺可見暗紅色陳舊出血,第28天時雙肺蒼白、表面凸凹不平、體積縮小、彈性較差,硬度增加。干預(yù)組與模型組病變基本一致,但程度稍輕,肺體積略增大,彈性稍差。

    2.1.2 鏡下觀察對照組大鼠肺組織結(jié)構(gòu)清晰,肺泡壁完整,肺泡上皮細(xì)胞形態(tài)正常,均未見明顯病變。模型組第3天時肺內(nèi)出現(xiàn)肺泡間隔增寬、炎性細(xì)胞浸潤等急性肺泡炎改變;第7天時炎癥表現(xiàn)更明顯,鏡下見大片炎性細(xì)胞浸潤,成纖維細(xì)胞開始增殖;第14天時肺泡炎持續(xù)加重,纖維組織開始增生;第28天肺泡炎較前有所減輕,部分肺泡腔消失,被大量成纖維細(xì)胞、增生的膠原纖維所取代,已基本呈現(xiàn)肺纖維化改變。干預(yù)組大鼠肺部病理表現(xiàn)的變化規(guī)律與模型組基本一致。三組間同時段的肺泡炎程度,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P < 0.05);干預(yù)組和模型組同時段肺泡炎程度差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P < 0.05),特別是第7天和第14天干預(yù)組肺泡炎程度較模型組輕,兩組間差異有高度統(tǒng)計學(xué)意義(P < 0.01)。干預(yù)組和模型組在第3天肺纖維化程度差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P > 0.05),三組在第7、14、28天的肺纖維化程度,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P < 0.05);第28天干預(yù)組肺纖維化程度較模型組輕,差異有高度統(tǒng)計學(xué)意義(P < 0.01)。見表1。

    2.2 三組MMP-2和MMP-9蛋白表達比較

    對照組肺組織中可見MMP-2少量陽性表達,主要分布在肺泡巨噬細(xì)胞、肺泡上皮細(xì)胞、成纖維細(xì)胞和氣道上皮細(xì)胞胞漿內(nèi)。模型組、干預(yù)組第3天時,肺內(nèi)MMP-2陽性表達細(xì)胞均多于對照組,肺泡間隔內(nèi)可見少量成纖維細(xì)胞呈陽性反應(yīng),血管、支氣管周圍及肺泡腔鏡下內(nèi)可見大量單核巨噬細(xì)胞呈強陽性反應(yīng),三組間比較,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P <0.05);第7天模型組和干預(yù)組MMP-2表達明顯增強,可見大量肺泡巨噬細(xì)胞和間質(zhì)內(nèi)的成纖維細(xì)胞呈陽性表達; 第14天模型組和干預(yù)組肺內(nèi)陽性細(xì)胞表達最強,與第3、7、28天比較,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P < 0.05);第28天時,模型組和干預(yù)組陽性細(xì)胞較同組第14天時明顯減少,但仍高于對照組。見表2。

    對照組肺內(nèi)可見MMP-9少量弱陽性表達,表達主要分布于肺胞巨噬細(xì)胞和支氣管上皮細(xì)胞。第3天時模型組、干預(yù)組大鼠肺內(nèi)血管、支氣管周圍及肺泡腔內(nèi)的單核巨噬細(xì)胞呈強陽性反應(yīng),與對照組比較,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P < 0.05);第7天模型組和干預(yù)組肺內(nèi)MMP-9表達增強,除支氣管上皮細(xì)胞、肺泡上皮細(xì)胞外,還見大量間質(zhì)內(nèi)的成纖維細(xì)胞和肺泡巨噬細(xì)胞呈陽性表達,與同組第3、14、28天比較,差異有高度統(tǒng)計學(xué)意義(P < 0.01);第14天模型組和干預(yù)組肺內(nèi)陽性細(xì)胞略有減少;第28天模型組和干預(yù)組MMP-9表達較第7天時明顯減弱,但仍高于對照組(P < 0.05)。干預(yù)組陽性細(xì)胞明顯少于同時段模型組,兩組間差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P < 0.05)。見表2。

    3 討論

    現(xiàn)代醫(yī)家根據(jù)肺纖維化臨床表現(xiàn)及病機變化將其歸為咳嗽、肺脹、喘證、氣短、肺痿、肺痹、痰飲等范疇,正氣虧虛為本,血瘀內(nèi)阻為標(biāo),正虛邪實為其基本病機,其中,痰阻肺絡(luò)、肺陰不足、瘀血阻滯、內(nèi)閉喘脫為臨床多見的病變類型。消腫化痰通絡(luò)方中黃芩、瓜蔞為君藥,黃芩味苦寒主入肺經(jīng),可瀉火解毒,治肺熱所致咳吐黃痰;瓜蔞藥味甘、微苦,性寒,歸肺、胃、大腸經(jīng),清熱化痰,寬胸散結(jié)、痛瘡腫毒,兩者相伍則肺之熱清痰化而氣機調(diào)暢;魚腥草味辛,性微寒,歸肺經(jīng)具有清熱解毒、消癰排膿功效,肺萎之人久咳入絡(luò),必兼氣虛血瘀,故以地龍、桃仁活血化瘀、通絡(luò),且地龍性寒味咸,善下行可平抑上逆之肺氣而止咳平喘;佐以黃芪、當(dāng)歸養(yǎng)血補氣,與君藥相配,苦寒、甘溫并用,使肺熱得清而不傷肺津,共奏清熱化痰、止咳平喘、活血益氣之功。

    實驗結(jié)果顯示,造模大鼠均有不同程度的聳毛、活動減少、嗜睡,少吃等癥狀。造模初期可見大鼠體重明顯下降,約3 d后逐漸緩解,其中,干預(yù)組體重恢復(fù)較快,第28天時體重已與空白對照組相近,而模型組體重恢復(fù)較慢,第28天時仍明顯低于對照組。通過HE光鏡觀察模型組早期即出現(xiàn)肺泡炎,14 d后以肺纖維化病變?yōu)橹鳎?8 d出現(xiàn)典型的肺纖維化改變,符合肺纖維化的病理改變過程[3],提示造模成功。干預(yù)組肺泡炎程度明顯的輕于模型組,提示清肺化痰通絡(luò)方可以減輕早期肺泡炎的改變,第14、28天干預(yù)組肺纖維化程度輕于同時段的模型組。提示清肺化痰通絡(luò)方可以減輕模型動物的癥狀,并在肺組織結(jié)構(gòu)上減輕和延緩纖維化的發(fā)生。

    組織纖維化的發(fā)生是由于ECM代謝失衡,打破了臟器原有的組織結(jié)構(gòu),纖維結(jié)締組織大量增生的結(jié)果[4]。ECM包括纖維性成分、連接蛋白和間質(zhì)成分,主要為糖胺聚糖等,其對細(xì)胞增殖和分化發(fā)揮重要調(diào)控作用,合成和降解這些蛋白質(zhì)的ECM代謝酶可分為基質(zhì)金屬蛋白酶類 (MMPs)和基質(zhì)金屬蛋白酶組織抑制物(TIMP)。MMPs的明膠酶(MMP-2、MMP-9)主要降解Ⅳ膠原纖維、纖維連接蛋白、肺基膜等成分,由于肺基膜及結(jié)構(gòu)支架的損傷與肺纖維化密切相關(guān),因此,MMPs在肺纖維化發(fā)生中的作用日益受到重視[5]。有報道MMP抑制劑巴馬司他等能降低MMP-9活性,抑制TNF-α和TGF-β1釋放,減輕動物模型的肺纖維化[6-7]。Lemjabbar等[8]測定了肺間質(zhì)纖維化患者支氣管肺泡灌洗液中蛋白和MMP-2 mRNA的表達,顯示激素及免疫抑制劑治療可以降低肺內(nèi)MMP-2表達。上述研究均表明損傷肺組織可能通過持續(xù)性高表達MMPs,使基膜不可逆性損傷斷裂,阻礙新生上皮組織重構(gòu)正常肺泡腔,最終導(dǎo)致肺纖維化。

    本實驗研究顯示,第3天開始模型組和干預(yù)組肺內(nèi)MMP-2、MMP-9的表達均開始增加,模型組和干預(yù)組MMP-9在第7天時已經(jīng)達到高峰,然后干預(yù)組快速下降,到第28天時MMP-9水平基本接近正常,模型組在第7天出現(xiàn)MMP-9表達高峰,第14、28天也出現(xiàn)明顯的下降,但是28天時MMP-9的水平仍高于對照組。肺纖維化大鼠在造模的第3~14天以肺泡炎的病理改變?yōu)橹?,提示MMP-9可能與早期上皮基底膜損傷有關(guān),參與了細(xì)胞外基質(zhì)和基底膜的降解。干預(yù)組的MMP-9明顯下降,且在第14天時MMP-9的表達明顯低于模型組,推測清肺化痰通絡(luò)方可能是通過抑制MMP-9表達,從而延緩、減輕早期肺泡炎的發(fā)生。模型組和干預(yù)組MMP-2在第14天時達到高峰,然后緩慢下降,第28天時,模型組和干預(yù)組仍高于對照組。第14、28天時以肺纖維化為主要病變,提示MMP-2則可能在肺泡上皮細(xì)胞的再生與肺組織的異常修復(fù)中起重要作用。第14、28天MMP-2在干預(yù)組的表達低于模型組,且干預(yù)組肺纖維化程度比模型組輕,提示清肺化痰通絡(luò)方通過延緩或者抑制MMP-2表達,達到延緩以及抑制肺纖維化的目的。

    綜上所述,本實驗結(jié)果提示,BLMA5誘導(dǎo)的肺纖維化模型在不同時期MMPs的表達不同,早期病變肺組織以MMP-9的增加為主,晚期則以MMP-2增加為主,與有關(guān)報道一致[9]。清肺化痰通絡(luò)方可能通過抑制MMP-9在肺纖維化大鼠肺內(nèi)的表達,減輕早期的肺泡炎,抑制MMP-2的表達,延緩和抑制后期肺纖維化的發(fā)生。

    [參考文獻]

    [1]陳佰義.博萊霉素致大鼠肺纖維化肺泡巨噬細(xì)胞氧化和抗氧化損傷的動態(tài)研究[J].中國醫(yī)科大學(xué)學(xué)報,1995,24(3):240.

    [2]Szapiel SV,Elson NA,F(xiàn)ulmer JD. Bleomycin induced interstitial pulmonary disease in thende,athymice mouse [J]. Am Rev Respir Dis,1979,120:893.

    [3]柴文戍,李永春,劉玉玲,等.博來霉素致肺纖維化大鼠形態(tài)學(xué)變化的實驗研究[J].中國實驗動物學(xué)報,2003,11(2):77-80.

    [4]盧韶華,王岫南,譚云山,等.基質(zhì)金屬蛋白酶與彌漫性肺間質(zhì)纖維化[J].國外醫(yī)學(xué):呼吸系統(tǒng)分冊,2004,24(z1):31-34.

    [5]朱禮星,鐘南山,徐軍,等.基質(zhì)金屬蛋白酶與肺纖維化[J].現(xiàn)代臨床醫(yī)學(xué)生物工程學(xué)雜志,2001,7(5):382-385.

    [6]Corbe MS,Caulet-Maugendre N,Germain S,et al. Inhibition of bleomycin-induced pulmonary fibrosis in mice by the matrix metalloproteinase inhibitor batimastat [J]. J Pathol,2001,193(4):538-545.

    [7]Underwood DC,Osborn RR,Bochnowicz S,et al. SB 239063,a p38 MAPK inhibitor,reduces neutrophilia,inflammatory cytokines,MMP-9,and fibrosis in lung [J]. Am J Physiol Lung Cell Mol Physiol,2000,279(5):895-902.

    [8]Lemjabbar H,Gosset P,Lechapt ZE,et al. Overexpression of alveolar macrophag elationaseB(MMP-9)in patients with idiopathic pulmonary fibrosis:effects of steroid and immuno suppressive treatment [J]. Am J Respir Cell Mol Biol,1999,20(5):903-913.

    [9]Oggionni T,Morbini P,Inghilleri S,et al. Time course of matrix metalloproteases and tissue inhibitors in bleomycin-induced pulmonary fibrosis [J]. Eur J Histochem,2006,50(24):317-332.

    (收稿日期:2012本文編輯:程銘)

    猜你喜歡
    清肺肺纖維化陽性細(xì)胞
    我國研究人員探索肺纖維化治療新策略
    中老年保健(2022年2期)2022-11-25 23:46:31
    遺傳性T淋巴細(xì)胞免疫缺陷在百草枯所致肺纖維化中的作用
    清肺排毒湯治療新型冠狀病毒肺炎的中醫(yī)思考
    清肺排毒湯為什么要配大米湯
    特發(fā)性肺纖維化合并肺癌
    冬清肺火用橄欖
    大口黑鱸鰓黏液細(xì)胞的組織化學(xué)特征及5-HT免疫反應(yīng)陽性細(xì)胞的分布
    沙利度胺治療肺纖維化新進展
    人胎腦額葉和海馬中星形膠質(zhì)細(xì)胞的發(fā)育性變化
    清肺湯聯(lián)合左氧氟沙星治療老年肺部感染40例
    亚洲成人中文字幕在线播放| 天天一区二区日本电影三级| 极品教师在线视频| 最近在线观看免费完整版| 少妇猛男粗大的猛烈进出视频 | a在线观看视频网站| 久久热精品热| 亚洲人成网站高清观看| 极品教师在线视频| 久久国内精品自在自线图片| 日韩欧美免费精品| 久久久久久国产a免费观看| 日韩欧美一区二区三区在线观看| 日日啪夜夜撸| 亚洲电影在线观看av| 国产精品98久久久久久宅男小说| 美女被艹到高潮喷水动态| 亚洲精华国产精华精| www.色视频.com| ponron亚洲| 观看免费一级毛片| 久久久色成人| 久久久精品欧美日韩精品| 成人三级黄色视频| 变态另类成人亚洲欧美熟女| 啦啦啦观看免费观看视频高清| 在线免费观看不下载黄p国产 | 淫妇啪啪啪对白视频| xxxwww97欧美| 亚洲va在线va天堂va国产| 听说在线观看完整版免费高清| 97人妻精品一区二区三区麻豆| 亚洲av五月六月丁香网| 内地一区二区视频在线| 久久久色成人| 美女xxoo啪啪120秒动态图| 中文字幕熟女人妻在线| 亚洲av日韩精品久久久久久密| АⅤ资源中文在线天堂| 亚洲精品国产成人久久av| 国产一区二区在线观看日韩| 欧美一区二区精品小视频在线| 一个人看的www免费观看视频| 天堂av国产一区二区熟女人妻| 黄色丝袜av网址大全| 亚洲人成伊人成综合网2020| 俺也久久电影网| 久久天躁狠狠躁夜夜2o2o| 久久6这里有精品| 欧美zozozo另类| 天美传媒精品一区二区| 亚洲最大成人av| 欧美性猛交黑人性爽| 高清日韩中文字幕在线| 国产精品国产高清国产av| 亚洲美女搞黄在线观看 | 色噜噜av男人的天堂激情| 成人永久免费在线观看视频| x7x7x7水蜜桃| 尾随美女入室| 欧美成人免费av一区二区三区| 国产亚洲欧美98| 日本黄色片子视频| 成人av在线播放网站| 国产成人aa在线观看| 色精品久久人妻99蜜桃| 久久中文看片网| 女同久久另类99精品国产91| 国产色婷婷99| 真人一进一出gif抽搐免费| 九九热线精品视视频播放| 男女做爰动态图高潮gif福利片| 在线观看av片永久免费下载| 国产爱豆传媒在线观看| 久久香蕉精品热| 1000部很黄的大片| 亚洲,欧美,日韩| 大又大粗又爽又黄少妇毛片口| 亚洲男人的天堂狠狠| 欧美色欧美亚洲另类二区| 日韩亚洲欧美综合| 午夜福利视频1000在线观看| 日本欧美国产在线视频| 久9热在线精品视频| 亚洲人与动物交配视频| 性欧美人与动物交配| 男人的好看免费观看在线视频| 一区二区三区免费毛片| 日韩欧美精品免费久久| 午夜福利视频1000在线观看| 最后的刺客免费高清国语| 人妻夜夜爽99麻豆av| 成人一区二区视频在线观看| 国产视频内射| 国产淫片久久久久久久久| 97热精品久久久久久| 午夜老司机福利剧场| 久久天躁狠狠躁夜夜2o2o| 春色校园在线视频观看| 色播亚洲综合网| 最近视频中文字幕2019在线8| 一a级毛片在线观看| 色在线成人网| 12—13女人毛片做爰片一| 中国美白少妇内射xxxbb| 欧美日本视频| 久久久久久久久久成人| 精品福利观看| 成人特级黄色片久久久久久久| 国产伦在线观看视频一区| 99热这里只有精品一区| 日韩 亚洲 欧美在线| 国产成人av教育| 久久久国产成人精品二区| 成人二区视频| 少妇人妻精品综合一区二区 | 一级黄片播放器| 成年免费大片在线观看| 一卡2卡三卡四卡精品乱码亚洲| 内地一区二区视频在线| 久久人妻av系列| 啦啦啦韩国在线观看视频| 在线观看舔阴道视频| 夜夜夜夜夜久久久久| 国产精品精品国产色婷婷| 国产精品,欧美在线| 男人舔奶头视频| 成人高潮视频无遮挡免费网站| 十八禁国产超污无遮挡网站| 韩国av一区二区三区四区| 色尼玛亚洲综合影院| 人妻少妇偷人精品九色| 亚洲精品影视一区二区三区av| 亚洲av一区综合| 美女xxoo啪啪120秒动态图| 舔av片在线| 亚洲狠狠婷婷综合久久图片| 免费观看人在逋| 欧美黑人巨大hd| 国产亚洲精品久久久com| 午夜激情福利司机影院| 老司机福利观看| 国产高清三级在线| 国产亚洲精品av在线| 婷婷精品国产亚洲av| 99久久久亚洲精品蜜臀av| 国产午夜福利久久久久久| 永久网站在线| 男人舔奶头视频| 国内揄拍国产精品人妻在线| 九色成人免费人妻av| 亚洲精品成人久久久久久| 男女下面进入的视频免费午夜| 久久99热这里只有精品18| АⅤ资源中文在线天堂| 69av精品久久久久久| 男插女下体视频免费在线播放| 日本黄色片子视频| 99久国产av精品| 成人性生交大片免费视频hd| 美女高潮的动态| 精品久久久久久久久久久久久| 日日夜夜操网爽| 国产午夜精品论理片| 欧美日韩国产亚洲二区| a级一级毛片免费在线观看| 国产成人a区在线观看| 国内精品久久久久精免费| 老司机午夜福利在线观看视频| 国产视频内射| 国产精品永久免费网站| 午夜久久久久精精品| 午夜视频国产福利| 国内精品一区二区在线观看| 深爱激情五月婷婷| 国产精品免费一区二区三区在线| 国产精品一及| 少妇的逼好多水| 丰满乱子伦码专区| 少妇猛男粗大的猛烈进出视频 | 国产精品久久久久久精品电影| 亚洲18禁久久av| 一级毛片久久久久久久久女| 亚洲va在线va天堂va国产| 久久精品国产亚洲网站| 天堂影院成人在线观看| 国产成人a区在线观看| 91狼人影院| 在线播放国产精品三级| 国内久久婷婷六月综合欲色啪| 亚洲人与动物交配视频| 欧美色视频一区免费| 久久久国产成人免费| 国产精品久久视频播放| 在线观看美女被高潮喷水网站| 禁无遮挡网站| 精品欧美国产一区二区三| 最近在线观看免费完整版| 欧美高清性xxxxhd video| 免费一级毛片在线播放高清视频| 欧美日韩瑟瑟在线播放| 午夜福利在线观看免费完整高清在 | 亚洲精品一卡2卡三卡4卡5卡| 91在线观看av| 亚洲欧美日韩东京热| h日本视频在线播放| 亚洲专区中文字幕在线| 一区二区三区高清视频在线| 91午夜精品亚洲一区二区三区 | 男插女下体视频免费在线播放| 在现免费观看毛片| 精品一区二区三区视频在线| x7x7x7水蜜桃| 亚洲人成网站在线播| 久久精品国产亚洲av天美| 又黄又爽又刺激的免费视频.| 麻豆一二三区av精品| 三级男女做爰猛烈吃奶摸视频| 欧美一区二区精品小视频在线| 国产精品无大码| 九九久久精品国产亚洲av麻豆| 国产精品国产三级国产av玫瑰| 深爱激情五月婷婷| 久久午夜福利片| 性色avwww在线观看| 51国产日韩欧美| 欧美丝袜亚洲另类 | 99久久久亚洲精品蜜臀av| 久久这里只有精品中国| 日韩欧美免费精品| 别揉我奶头~嗯~啊~动态视频| 国产亚洲精品久久久com| 简卡轻食公司| 日本黄色片子视频| 老女人水多毛片| 久久久久久久久中文| 动漫黄色视频在线观看| 久久精品国产自在天天线| 久久99热这里只有精品18| 久久久久久大精品| 欧美色视频一区免费| 九九爱精品视频在线观看| 在线播放无遮挡| 国产一区二区三区视频了| 国产一区二区在线观看日韩| 听说在线观看完整版免费高清| 久9热在线精品视频| 亚洲精品乱码久久久v下载方式| 在线观看舔阴道视频| 三级国产精品欧美在线观看| 成年女人看的毛片在线观看| 亚洲美女黄片视频| 人人妻,人人澡人人爽秒播| 国产乱人视频| 日韩精品有码人妻一区| 色综合站精品国产| 国产美女午夜福利| 午夜日韩欧美国产| 伦精品一区二区三区| 熟妇人妻久久中文字幕3abv| 色哟哟哟哟哟哟| 一级a爱片免费观看的视频| 久久久久久久久久黄片| 日韩av在线大香蕉| x7x7x7水蜜桃| 成人一区二区视频在线观看| 国产午夜福利久久久久久| 久久婷婷人人爽人人干人人爱| 亚洲av第一区精品v没综合| 国产中年淑女户外野战色| 免费人成在线观看视频色| 国产乱人伦免费视频| 亚洲成人久久性| 91av网一区二区| 国产一区二区三区在线臀色熟女| 欧美xxxx黑人xx丫x性爽| 97热精品久久久久久| 亚洲不卡免费看| 国产伦精品一区二区三区四那| 国产白丝娇喘喷水9色精品| 老熟妇仑乱视频hdxx| 久久这里只有精品中国| 欧美性猛交╳xxx乱大交人| 校园人妻丝袜中文字幕| 免费人成视频x8x8入口观看| 99久久无色码亚洲精品果冻| 可以在线观看的亚洲视频| 亚洲三级黄色毛片| av.在线天堂| 97超视频在线观看视频| 午夜老司机福利剧场| 天堂影院成人在线观看| 三级男女做爰猛烈吃奶摸视频| 高清日韩中文字幕在线| 久久久精品欧美日韩精品| 在线免费十八禁| 中文字幕久久专区| 永久网站在线| 亚洲国产欧洲综合997久久,| 午夜福利视频1000在线观看| 51国产日韩欧美| 美女被艹到高潮喷水动态| 999久久久精品免费观看国产| 91麻豆精品激情在线观看国产| 国产精品精品国产色婷婷| 精品一区二区三区视频在线| 国产69精品久久久久777片| 人人妻人人看人人澡| 12—13女人毛片做爰片一| 亚洲熟妇熟女久久| 最近在线观看免费完整版| 亚洲欧美激情综合另类| 日本三级黄在线观看| 国产精品一区二区三区四区免费观看 | 免费大片18禁| 亚洲av熟女| 男人狂女人下面高潮的视频| 少妇的逼水好多| 此物有八面人人有两片| 淫秽高清视频在线观看| 色视频www国产| 两性午夜刺激爽爽歪歪视频在线观看| av.在线天堂| 日韩欧美精品v在线| АⅤ资源中文在线天堂| 午夜福利视频1000在线观看| 日韩欧美国产在线观看| 亚洲人成网站在线播放欧美日韩| 亚洲av.av天堂| 国产精品久久视频播放| 精品99又大又爽又粗少妇毛片 | 免费不卡的大黄色大毛片视频在线观看 | 欧美丝袜亚洲另类 | 国产av不卡久久| 国产欧美日韩一区二区精品| 人妻丰满熟妇av一区二区三区| 日本黄大片高清| 精品人妻1区二区| 国产欧美日韩精品亚洲av| 偷拍熟女少妇极品色| bbb黄色大片| 亚洲人成网站在线播| 欧美人与善性xxx| 久久香蕉精品热| 18禁黄网站禁片免费观看直播| 麻豆国产97在线/欧美| 麻豆国产av国片精品| 亚洲在线观看片| 日韩中文字幕欧美一区二区| 久久人人爽人人爽人人片va| 欧美色视频一区免费| 国产伦精品一区二区三区四那| 久久精品人妻少妇| 免费看美女性在线毛片视频| 成熟少妇高潮喷水视频| 免费av不卡在线播放| 亚洲av免费在线观看| a在线观看视频网站| 又爽又黄无遮挡网站| 中国美白少妇内射xxxbb| 午夜影院日韩av| а√天堂www在线а√下载| 国产69精品久久久久777片| av在线老鸭窝| 久久久久久久久久成人| 午夜福利18| 欧美日韩乱码在线| 麻豆av噜噜一区二区三区| 在线国产一区二区在线| 日韩一本色道免费dvd| 九色成人免费人妻av| 简卡轻食公司| 老熟妇乱子伦视频在线观看| 五月玫瑰六月丁香| 韩国av在线不卡| 赤兔流量卡办理| 亚洲欧美日韩无卡精品| 精品免费久久久久久久清纯| 欧美成人免费av一区二区三区| 天天一区二区日本电影三级| 色噜噜av男人的天堂激情| 桃红色精品国产亚洲av| 成人精品一区二区免费| 精品久久久久久,| 毛片一级片免费看久久久久 | 国产免费男女视频| 国产一区二区在线观看日韩| 99国产精品一区二区蜜桃av| 女人被狂操c到高潮| 亚洲av五月六月丁香网| 国产成年人精品一区二区| 美女 人体艺术 gogo| 国内精品一区二区在线观看| 亚洲精品色激情综合| 久久午夜亚洲精品久久| 赤兔流量卡办理| 欧美高清性xxxxhd video| 在线观看舔阴道视频| 亚洲成人中文字幕在线播放| 午夜福利在线观看吧| 99久久精品一区二区三区| 国产精品久久久久久亚洲av鲁大| 精品久久久久久久久av| 国产精品伦人一区二区| 老熟妇乱子伦视频在线观看| 亚洲熟妇中文字幕五十中出| 色视频www国产| 麻豆成人av在线观看| 午夜福利在线在线| 亚洲性夜色夜夜综合| 亚洲不卡免费看| 国产极品精品免费视频能看的| 综合色av麻豆| 精品日产1卡2卡| 亚洲人成网站在线播放欧美日韩| 久久婷婷人人爽人人干人人爱| 一边摸一边抽搐一进一小说| 成人美女网站在线观看视频| 国产三级中文精品| 最近最新免费中文字幕在线| 中文字幕高清在线视频| 久久这里只有精品中国| 国产麻豆成人av免费视频| 国产探花极品一区二区| 久久久久久久久大av| 男插女下体视频免费在线播放| 赤兔流量卡办理| 午夜福利在线在线| 天美传媒精品一区二区| 久久精品国产亚洲av天美| 成人av一区二区三区在线看| 日韩av在线大香蕉| 免费人成在线观看视频色| 无遮挡黄片免费观看| 国产精品嫩草影院av在线观看 | 亚洲专区国产一区二区| 国产男人的电影天堂91| 免费看日本二区| 三级国产精品欧美在线观看| 天美传媒精品一区二区| 又黄又爽又刺激的免费视频.| 国产男靠女视频免费网站| videossex国产| 国产精品人妻久久久久久| www.色视频.com| 免费在线观看成人毛片| 成人特级黄色片久久久久久久| 国产私拍福利视频在线观看| av女优亚洲男人天堂| 午夜视频国产福利| 自拍偷自拍亚洲精品老妇| 美女xxoo啪啪120秒动态图| 国产精品伦人一区二区| 老熟妇乱子伦视频在线观看| 久久婷婷人人爽人人干人人爱| 久久九九热精品免费| 中文字幕熟女人妻在线| 乱系列少妇在线播放| 99久久九九国产精品国产免费| 精品久久久久久久久av| 亚洲精品456在线播放app | 99在线人妻在线中文字幕| 成人二区视频| 欧美三级亚洲精品| av在线天堂中文字幕| 尤物成人国产欧美一区二区三区| 日韩一本色道免费dvd| 色播亚洲综合网| av专区在线播放| 国产高清激情床上av| 韩国av在线不卡| 国产视频一区二区在线看| 国产精品女同一区二区软件 | 婷婷六月久久综合丁香| 97超级碰碰碰精品色视频在线观看| 国产熟女欧美一区二区| 日韩欧美免费精品| 99热精品在线国产| 久久99热这里只有精品18| 国产日本99.免费观看| 不卡一级毛片| 成人无遮挡网站| 韩国av一区二区三区四区| 久久这里只有精品中国| 色视频www国产| 日韩欧美 国产精品| 嫩草影院入口| 欧美日韩国产亚洲二区| 亚洲一级一片aⅴ在线观看| 色av中文字幕| 日韩精品青青久久久久久| 日韩欧美精品免费久久| 特级一级黄色大片| 女生性感内裤真人,穿戴方法视频| 日韩欧美在线二视频| 亚洲美女黄片视频| 人妻少妇偷人精品九色| 在线a可以看的网站| 欧美日韩乱码在线| 十八禁国产超污无遮挡网站| 少妇丰满av| 啦啦啦啦在线视频资源| 精品一区二区三区人妻视频| 天天躁日日操中文字幕| 白带黄色成豆腐渣| 夜夜爽天天搞| 一个人看的www免费观看视频| 日本免费a在线| 搡老熟女国产l中国老女人| 国产黄a三级三级三级人| 一卡2卡三卡四卡精品乱码亚洲| 国产亚洲精品久久久久久毛片| 99在线人妻在线中文字幕| 国产av一区在线观看免费| 成人三级黄色视频| 亚洲人成伊人成综合网2020| 两个人的视频大全免费| 亚洲欧美清纯卡通| 亚洲国产精品合色在线| 噜噜噜噜噜久久久久久91| 国产高清三级在线| 久久久久久伊人网av| 中文字幕免费在线视频6| 最好的美女福利视频网| 午夜激情福利司机影院| 国产高潮美女av| 99久久精品国产国产毛片| 欧美激情久久久久久爽电影| 舔av片在线| 日韩一区二区视频免费看| 香蕉av资源在线| 亚洲图色成人| 国产精品无大码| 久99久视频精品免费| 精品一区二区三区人妻视频| 久久天躁狠狠躁夜夜2o2o| 天天躁日日操中文字幕| 国产伦精品一区二区三区四那| 深夜精品福利| 成人亚洲精品av一区二区| 2021天堂中文幕一二区在线观| 99精品久久久久人妻精品| 成人特级黄色片久久久久久久| 久久天躁狠狠躁夜夜2o2o| 日本熟妇午夜| 日本爱情动作片www.在线观看 | 最近最新中文字幕大全电影3| 搡女人真爽免费视频火全软件 | 日本免费a在线| 国产精品不卡视频一区二区| 成人特级av手机在线观看| 成人一区二区视频在线观看| 亚洲精品色激情综合| 午夜久久久久精精品| 精品一区二区免费观看| 午夜福利成人在线免费观看| 美女大奶头视频| 男人狂女人下面高潮的视频| 亚洲美女黄片视频| 久久精品国产亚洲网站| 午夜福利在线在线| 女人被狂操c到高潮| 久久久久久九九精品二区国产| 成人无遮挡网站| 国产乱人伦免费视频| 天美传媒精品一区二区| 小蜜桃在线观看免费完整版高清| 日本精品一区二区三区蜜桃| 国产精品久久电影中文字幕| 午夜福利18| 99热这里只有是精品在线观看| 久久久久久九九精品二区国产| 一本久久中文字幕| 又紧又爽又黄一区二区| 国产高清有码在线观看视频| 日韩在线高清观看一区二区三区 | 亚洲精品影视一区二区三区av| 欧美不卡视频在线免费观看| 免费搜索国产男女视频| 伦理电影大哥的女人| 欧美zozozo另类| 老熟妇乱子伦视频在线观看| 天天躁日日操中文字幕| h日本视频在线播放| 免费搜索国产男女视频| 黄色一级大片看看| 少妇猛男粗大的猛烈进出视频 | 色哟哟哟哟哟哟| 国产精品一区www在线观看 | 欧美成人一区二区免费高清观看| av福利片在线观看| 在线观看午夜福利视频| 一区二区三区激情视频| www.www免费av| 日韩国内少妇激情av| 校园人妻丝袜中文字幕| 两性午夜刺激爽爽歪歪视频在线观看| 国产黄色小视频在线观看| 国产精品乱码一区二三区的特点| 日日干狠狠操夜夜爽| 少妇高潮的动态图| 欧美成人a在线观看| 国产老妇女一区| 国产亚洲精品久久久com| 三级国产精品欧美在线观看| 亚洲国产色片| 97碰自拍视频| 日本黄色片子视频| 精华霜和精华液先用哪个| 亚洲美女搞黄在线观看 | 色在线成人网| 91精品国产九色| 成人国产麻豆网| 尤物成人国产欧美一区二区三区| 美女黄网站色视频|