金柑總黃酮解酒功效的體外活性試驗(yàn)初探

陳則夷，王仁才，黃紅芳，劉吉?jiǎng)P

（湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)園藝園林學(xué)院，湖南 長沙 410128）

利用天然植物活性成分解酒功效的研究在葛花[1-2]、枳椇子[3]、橄欖[4]等先后得到證實(shí)，但有關(guān)金柑解酒功效的研究尚未見報(bào)道。金柑作為傳統(tǒng)的藥食同源果實(shí)，具有疏肝醒酒的功效。乙醇脫氫酶（ADH）[5]是參與乙醇在體內(nèi)代謝的主要酶，在乙醇代謝中具有加快乙醇代謝，降低血醇濃度，減輕其對(duì)機(jī)體的傷害等重要作用。試驗(yàn)主要研究了不同成分提取液對(duì)金柑總黃酮提取差異，以及金柑總黃酮的劑量對(duì)乙醇脫氫酶活性的影響。

1 材料與方法

1.1 材料

供試材料為瀏陽金柑（金彈），采自瀏陽官渡金柑種植園。

1.2 金柑總黃酮的制備

選取20個(gè)金柑，清洗干凈，剝皮，將金柑皮放在托盤中，烘箱中50℃烘干，中藥粉碎機(jī)打粉。取金柑皮干粉3份，分別稱重5.00 g，用脫脂紙包好置于3個(gè)索氏提取器中（編號(hào)為A、B、C）。分別加入200 mL分析純石油醚，在80℃下脫脂至無色，過濾，去濾渣，在A中加入200 mL 80%的乙醇溶液，在80℃下回流提取2.5 h，過濾，回收乙醇提取液；在B中加200 mL正丁醇，在80℃下提取2.5 h，過濾，回收正丁醇提取液；在C中加入200 mL乙酸乙酯，在80℃下回流提取2.5 h，回收乙酸乙酯提取液。

1.3 黃酮含量的檢測及金柑黃酮的體外酶激活測定

黃酮含量的檢測：采用紫外分光光度計(jì)測定黃酮含量，分別取80%乙醇提取液、正丁醇提取液、乙酸乙酯提取液各20 mL，真空旋干，用10 mL 30%乙醇溶液溶解于25 mL容量瓶中，加5%的NaNO2溶液1.0 mL，搖勻，放置6 min后加入10%的Al（NO3）3溶液 1.0 mL，搖勻，放置 6 min 后加入4%NaOH溶液10.0 mL，用30%乙醇定容，搖勻，以空白為對(duì)照，10～15 min后于510 nm處測定吸光度A。

金柑黃酮的體外酶激活測定：采用瓦勒—霍赫（Valle&Hoch）改良法檢測乙醇脫氫酶活性。在帶塞試管中加入焦磷酸鈉緩沖液1.5 mL，NAD+1.0 mL，乙醇0.5 mL，分別加入3種金柑提取液0.1、0.2、0.3、0.4 mL，混合 37℃下加蓋溫育 5 min。溫育后的帶塞試管中立即加入乙醇脫氫酶0.1 mL，對(duì)照管中以蒸餾水代替乙醇脫氫酶，搖勻，37℃溫育5 min，用722型分光光度計(jì)測定吸光度（A340）值，以后每隔30 s讀數(shù)一次，連續(xù)測定5 min。以對(duì)照管調(diào)定零點(diǎn)，計(jì)算出每分鐘的平均吸光值ΔA/min。

乙醇脫氫酶活性計(jì)算法：

抑制（激活）率計(jì)算：

抑制（激活）率（%）=酶活性無藥對(duì)照組－酶活性加藥測定組/酶活性無藥×100

2 結(jié)果與分析

2.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線的確定

蘆丁標(biāo)樣品的標(biāo)準(zhǔn)曲線方程為y=1.072 3 x－0.010 2，R2=0.999 5，其中 y為吸光度，x為蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品濃度，表明蘆丁濃度與吸光度具有良好的線性關(guān)系。

圖1 蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線

2.2 不同溶劑提取的金柑黃酮含量

以1.3方法測得80%乙醇提取液黃酮含量為0.4 mg/mL，正丁醇提取液黃酮含量為0.222 mg/mL，乙酸乙酯提取液黃酮含量為0.135 mg/mL。結(jié)果表明，隨著提取溶劑非極性的的增大，提取的金柑黃酮的含量減少。如表1所示，80%乙醇提取液的總黃酮為0.400 mg/mL，正丁醇的為0.222 mg/mL，乙酸乙酯的為0.135 mg/mL。

2.3 不同溶劑提取的金柑黃酮對(duì)乙醇脫氫酶活性的影響

從表2中可知，正丁醇提取液和乙酸乙酯提取液對(duì)乙醇脫氫酶激活作用并不明顯，在一定含量上具有一定抑制作用。而80%乙醇溶液提取的金柑總黃酮對(duì)乙醇脫氫酶的活性激活效果較顯著，且隨黃酮含量的增加激活率上升。

表1 不同提取液的吸光度

表2 3種溶劑提取的金柑黃酮對(duì)乙醇脫氫酶活性的影響 （%）

3 討論

（1）金柑總黃酮提取過程中，以80%乙醇水溶液提取液中總黃酮含量最高，由此推斷，金柑總黃酮中主要以極性較大的黃酮類化合物存在。

（2）80%乙醇提取液對(duì)乙醇脫氫酶激活作用較顯著，隨著提取液含量的增加激活率上升，一定含量的正丁醇和乙酸乙酯提取液對(duì)乙醇脫氫酶具有抑制作用。由此推測，在金柑總黃酮中主要是極性較大的黃酮類化合物對(duì)乙醇脫氫酶具有激活作用。結(jié)果表明金柑乙醇提取液可以提高乙醇脫氫酶的活性，具有解酒的功效。

[1]畢業(yè)東，郭富成，張德祥.葛柏解酒液防治小鼠急性酒精中毒作用機(jī)理的實(shí)驗(yàn)研究[J].江西中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2005，（17）：50-51.

[2]城順英，野原埝私.葛花解酒的機(jī)理被破譯[J].世界科學(xué)技術(shù)-中醫(yī)藥現(xiàn)代化[J].2002，4（2）：18.

[3]湯銀紅，丁斌如.枳棋子水提物對(duì)乙醇脫氫酶活性的影響[J].中藥藥理與臨床，2004，20（2）：24

[4]祿保平，苗艷艷，橄欖解酒機(jī)理新證[J].中藥材，2008，（6）：929-931.

[5]Moreno A,Pares X，Purification and characterization of a new alcoholdehydrogenase from human stomach[J].J Biol Chem,1991,266:1128-1133.