丁子香酚對(duì)黃瓜疫霉菌的室內(nèi)毒力測(cè)定

楊泓威，易圖永，雷 穎，戴良英

（湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)生物安全科學(xué)技術(shù)學(xué)院，湖南 長(zhǎng)沙 410128）

黃瓜疫霉病是一種毀滅性病害，一般地區(qū)發(fā)病率達(dá)10%～30%，有時(shí)甚至高達(dá)90%，嚴(yán)重影響黃瓜的產(chǎn)量和質(zhì)量，影響農(nóng)戶種植黃瓜的積極性[1]。黃瓜疫霉病是由假菌界卵菌綱的黃瓜疫霉菌（Phytophthora melonis）引起的，主要危害植株的莖、葉及果實(shí)。黃瓜疫霉菌在侵入寄主體內(nèi)后短時(shí)間內(nèi)產(chǎn)生大量的孢子囊，釋放游動(dòng)孢子，造成二次侵染。病原菌以菌絲體、卵孢子或厚垣孢子的形式在病株和土壤中越冬，孢子可借風(fēng)、雨或灌溉水傳播，病害難以控制[2]。

目前，黃瓜疫霉病仍以化學(xué)防治為主[3]，為了探尋高效、低毒的化學(xué)藥劑，在初步篩選的基礎(chǔ)上[4-5]，筆者選用植物來(lái)源的化學(xué)藥劑丁子香酚為材料，以嘧肽霉素為對(duì)照，通過(guò)菌絲生長(zhǎng)速率法進(jìn)行了室內(nèi)毒力測(cè)定。同時(shí)為了比較丁子香酚對(duì)植物病原真菌的抑制效果，還測(cè)定了其對(duì)稻瘟病菌的室內(nèi)毒力。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

供試藥劑為有效成分0.3%的丁子香酚（河北省博愛(ài)惠豐生化農(nóng)藥有限公司）；對(duì)照藥劑為有效成分6%的嘧肽霉素（遼寧省大連奧德植保藥業(yè)有限公司）。

供試的黃瓜疫霉菌和稻瘟病菌由植物病蟲(chóng)害生物學(xué)與防控湖南省重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室提供，使用前先在26℃下活化，試驗(yàn)培養(yǎng)基全部為馬鈴薯葡萄糖（PDA）培養(yǎng)基。

1.2 試驗(yàn)方法

采取菌絲生長(zhǎng)速率法[6]。根據(jù)預(yù)備試驗(yàn)結(jié)果，針對(duì)兩種單劑分別設(shè)置5個(gè)對(duì)應(yīng)的濃度梯度。將原藥稀釋溶解，用無(wú)菌水定容成一定濃度的母液，再按照相應(yīng)的濃度，用微量可調(diào)移液器吸取4 mL稀釋液，加入到36 mL融化并稍冷卻的PDA培養(yǎng)基中，制成含藥培養(yǎng)基，每個(gè)藥劑濃度重復(fù)3次，并設(shè)置含等量無(wú)菌水的對(duì)照組。

在已經(jīng)活化好的菌種平板上，用直徑7 mm的打孔器打孔得到菌餅，待培養(yǎng)基完全冷卻凝固后，將菌餅挑出置于含藥培養(yǎng)皿的中央，每個(gè)培養(yǎng)皿放一個(gè)菌餅，在26℃的恒溫箱中培養(yǎng)7天[7-8]。之后用垂直十字法測(cè)量各菌落的直徑，取平均值，按如下公式計(jì)算該濃度藥劑對(duì)菌落的抑制率：

抑制率（%）=1-處理菌落直徑-菌餅直徑對(duì)照菌落直徑-菌餅直徑×100%。

用EXCEL軟件分析數(shù)據(jù)，獲得毒力回歸方程、相關(guān)系數(shù)和EC50值[8]。EC50值即表示殺菌劑對(duì)目標(biāo)真菌的抑制作用效果[9]。

2 結(jié)果與分析

2.1 兩種藥劑對(duì)黃瓜疫霉菌的毒力測(cè)定

兩種供試藥劑對(duì)黃瓜疫霉菌的毒力試驗(yàn)結(jié)果表明（表1和圖1、圖2）：0.3%的丁子香酚和6%的嘧肽霉素對(duì)黃瓜疫霉菌均有一定的抑制作用。同樣稀釋1 000倍的情況下，丁子香酚的有效濃度為3 mg/L，抑制率為89.29%；嘧肽霉素的有效濃度為60 mg/L，抑制率為80.31%。計(jì)算可得，前者的EC50值為0.622 3 mg/L，后者的EC50值為20.673 9 mg/L?？梢?jiàn)，丁子香酚對(duì)黃瓜疫霉菌的抑制效果比嘧肽霉素好。

表1 兩種藥劑對(duì)黃瓜疫霉菌的室內(nèi)毒力測(cè)定

圖1 不同濃度丁子香酚對(duì)黃瓜疫霉菌的抑制作用

圖2 不同濃度嘧肽霉素對(duì)黃瓜疫霉菌的抑制作用

2.2 丁子香酚對(duì)稻瘟病菌的毒力測(cè)定

丁子香酚對(duì)稻瘟病菌的抑制回歸方程為Y=2.983 8 X+5.979 3（R2=0.999 5），計(jì)算獲得 EC50值為0.469 7 mg/L。這表明丁子香酚對(duì)稻瘟病菌同樣有較好的抑制作用，在相同濃度下對(duì)稻瘟病菌的抑制效果較黃瓜疫霉菌略好（圖3）。

圖3 不同濃度丁子香酚對(duì)稻瘟病菌的抑制作用

3 討論

傳統(tǒng)的殺菌劑如甲霜靈、精甲霜靈等雖然初期殺菌效果顯著，但因長(zhǎng)期高濃度的施用，病菌已經(jīng)形成了較強(qiáng)的抗藥性，防治效果已逐步弱化。丁子香酚是一種植源性的新型農(nóng)藥，主要用于治療人類和動(dòng)物的疾病，其殺菌的作用機(jī)理是干擾白色念珠菌包膜形成，具有抗白色念珠菌的作用[10-11]，其高效、低毒、殘留少的特性在植物用藥方面具有很大的開(kāi)發(fā)潛力，目前這方面相關(guān)的研究還較少見(jiàn)。嘧肽霉素也是我國(guó)近年來(lái)開(kāi)發(fā)的具有自主知識(shí)產(chǎn)權(quán)的農(nóng)用抗生素[12]，已經(jīng)證實(shí)其在田間對(duì)多種植物真菌病害具有良好的防治效果[13]。

試驗(yàn)結(jié)果表明丁子香酚對(duì)黃花疫霉菌的毒力效果顯著，通過(guò)EC50值分析，其防治效果比嘧肽霉素還要好。因?yàn)槎∽酉惴泳哂袕V譜抗菌特性，該試驗(yàn)還檢測(cè)了丁子香酚對(duì)稻瘟病菌的毒力，結(jié)果顯示其對(duì)稻瘟病菌也具有較好的防治藥效。綜合上述結(jié)論，丁子香酚在植物病害防治領(lǐng)域具有巨大的潛力，是目前傳統(tǒng)化學(xué)殺菌劑的較理想代替產(chǎn)品。

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