載脂蛋白B基因3'VNTP的多態(tài)性與冠心病關(guān)系的研究

車(chē)艷苓 丑廣程

冠心病又稱(chēng)冠狀動(dòng)脈性心臟病，是由于動(dòng)脈粥樣硬化病變?cè)斐傻陌咨邏K，而這些斑塊漸漸增多造成動(dòng)脈腔狹窄，使患者的血流受阻，導(dǎo)致心臟缺血，產(chǎn)生心絞痛的一種疾病。隨著社會(huì)經(jīng)濟(jì)的發(fā)展以及社會(huì)老齡化的來(lái)臨，冠心病漸漸成為影響人們健康的危險(xiǎn)因素，該病的主要誘因是冠狀動(dòng)脈粥樣硬化，但是動(dòng)脈粥樣硬化的原因尚未完全清晰［1］。目前醫(yī)學(xué)上對(duì)于該病的研究尚在繼續(xù)，大多醫(yī)學(xué)專(zhuān)家認(rèn)為它是一種由多因素引起的疾病。而載脂蛋白B基因3'VNTP的多態(tài)性在一定程度上和脂質(zhì)的代謝、心血管等疾病有著較大可能的聯(lián)系，脂質(zhì)代謝的變異目前已被證實(shí)是造成動(dòng)脈粥樣硬化的因素，而載脂蛋白B基因3'VNTP的多態(tài)性很可能是導(dǎo)致冠心病的因素。本文通過(guò)檢測(cè)兩組對(duì)象的載脂蛋白B基因的3'VNTP等位基因，研究它的多樣性與冠心病之間的關(guān)系，現(xiàn)將結(jié)果報(bào)道如下。

資料與方法

1.一般資料:選取的我院2009年1月至2011年6月收治的80例冠心病患者中，男50例，女30例，平均年齡為(50.5±13.3);健康組經(jīng)體檢發(fā)現(xiàn)均沒(méi)有冠心病患者，其中，男60例，女40例，平均年齡為(46.5±10.4)。所選的所有對(duì)象沒(méi)有血緣關(guān)系，也無(wú)糖尿病、肝病等疾病。

2.方法

(1)標(biāo)本的采集:采集標(biāo)本前囑咐所有受檢人員需在空腹的情況下采取靜脈血液，血液量為1.5ml到3ml，用2%的絡(luò)合劑乙二胺四乙酸(EDTA)進(jìn)行抗凝，采用3%的明膠將白細(xì)胞分離出來(lái)，經(jīng)SDS破膜以及乙醇沉淀等多個(gè)步驟來(lái)將DNA提取出來(lái)［2］。

(2)PCR技術(shù):PCR的特異性依賴(lài)于與靶序列兩端互補(bǔ)的寡核苷酸引物，PCR由變性－－退火(復(fù)性)－－延伸三個(gè)基本反應(yīng)步驟構(gòu)成:①模板DNA的變性:模板DNA經(jīng)加熱至90℃ ～95℃一定時(shí)間后，使經(jīng)過(guò)PCR擴(kuò)增形成的雙鏈DNA解離，使之成為單鏈與引物結(jié)合;②模板DNA與引物的退火:模板DNA經(jīng)加熱變性成單鏈后，溫度降至55℃～60℃，引物與模板DNA單鏈的互補(bǔ)序列配對(duì)結(jié)合;③引物的延伸:DNA模板－－引物結(jié)合物在DNA聚合酶的作用下，于70℃ ～75℃，以dNTP為反應(yīng)原料，靶序列為模板，按堿基配對(duì)與半保留復(fù)制原理，合成一條新的與模板DNA鏈互補(bǔ)的半保留復(fù)制鏈重復(fù)循環(huán)變性－－退火－－延伸三過(guò)程［3］。

(3)對(duì)3'VNTP等位基因的判定:在樣品的緩沖液中加進(jìn)10毫升的擴(kuò)增產(chǎn)物，然后用12%聚丙烯酰胺凝膠電泳觀測(cè)擴(kuò)增的結(jié)果。通過(guò)圖片軟件判別結(jié)果，依據(jù)每條DNA段落在凝膠內(nèi)的泳動(dòng)距離，以串聯(lián)重復(fù)序列的拷貝數(shù)=(片段長(zhǎng)度－151bp)/15bp公式計(jì)算出等位基因的堿基對(duì)數(shù)，憑借偶數(shù)命名等位基因的原則就能夠得到各類(lèi)基因型。

3.統(tǒng)計(jì)學(xué)方法:所有數(shù)據(jù)均采用SPSS12.0數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)，計(jì)數(shù)資料采取X2檢驗(yàn)，數(shù)據(jù)比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。

結(jié) 果

1.冠心病組與健康組在臨床資料上的比較，見(jiàn)表1。兩組調(diào)查對(duì)象在甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白(HDL－C)、脂蛋白a(LP(a))方面具有明顯的差異，且冠心病組的TG、Lp(a)明顯高于健康組，而在HDL－C上低于健康組。兩組在ApoB上沒(méi)有表現(xiàn)出明顯的差異。其中，對(duì)低密度脂蛋白(LDL)的處理公式為:LDL=TC－HDL－TG/5。

表1 兩組在TC、HDL－C、TG等方面的比較

2.兩組載脂蛋白B基因3'VNTP的多態(tài)性:經(jīng)檢測(cè)發(fā)現(xiàn)兩組對(duì)象的等位基因在分布頻率方面體現(xiàn)了呈現(xiàn)雙峰型的特點(diǎn)，現(xiàn)在主要根據(jù) HVE32、HVE34、HVE38來(lái)對(duì)等位基因進(jìn)行亞組對(duì)比研究，結(jié)果顯示B基因在健康組的出現(xiàn)率低于冠心病組。詳見(jiàn)表2(僅是部分?jǐn)?shù)據(jù))。

表2 冠心病組與健康組載脂蛋白B基因3'VNTP等位基因頻率分布情況

討 論

1.載脂蛋白B是低密度脂蛋白和極低密度脂蛋白的組成要素，和動(dòng)脈粥樣硬化有著極為重要的聯(lián)系，另一方面動(dòng)脈粥樣硬化是冠心病的主要誘因［4］。同時(shí)由于地區(qū)的差異，載脂蛋白B基因3'VNTP等位基因分布頻率也存在區(qū)別。就目前看來(lái)，根據(jù)許多學(xué)者對(duì)載脂蛋白B基因的多態(tài)性的研究顯示，APOB基因的多態(tài)性和冠心病的發(fā)生有著極為緊密的關(guān)系，通過(guò)本文對(duì)ApoB的基因3'VNTP的分析看，大等位基因的分布頻率在冠心病組與健康組間有著明顯的差別，說(shuō)明大等位基因跟ApoB基因的表達(dá)調(diào)換了，導(dǎo)致血脂代謝出現(xiàn)了紊亂的現(xiàn)象。此次研究說(shuō)明了大等位基因在一定程度上參與了導(dǎo)致冠心病發(fā)生的過(guò)程，但是大等位基因是不是一定引起冠心病的發(fā)生，還需要進(jìn)一步研究。

1 張樂(lè)，曾藝，楊期東，等.載脂蛋白B基因3'VNTP多態(tài)性與長(zhǎng)沙地區(qū)腦血管病的關(guān)系研究［J］.實(shí)用預(yù)防醫(yī)學(xué)，2005，1(12):57－59.

2 張宏偉，許虹，向輝華，等.湖北恩施土家族地區(qū)人群載脂蛋白B基因3'VNTP與患冠心病相關(guān)性的臨床分析［J］.甘肅醫(yī)學(xué)，2010，4(29):364 －366.

3 顧云，王綠婭，吳桂賢，等.冠心病和腦梗塞患者載脂蛋白B基因多態(tài)性研究［J］.中華心血管病雜志，2001，27(1):13 －16.

4 杜珙，薛紅，吳剛，等.血漿載脂蛋白B基因3'端可變數(shù)目串聯(lián)重復(fù)序列的結(jié)構(gòu)研究［J］.中華醫(yī)學(xué)遺傳學(xué)雜志，2006，3(23):335－338.