徐莉娟,代麗萍,王凱娟,張建營,王 鵬#
1)鄭州大學(xué)公共衛(wèi)生學(xué)院流行病學(xué)教研室 鄭州 450001
2)鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院檢驗科 鄭州 450052
乳癌是全世界范圍內(nèi)中年女性最常見的惡性腫瘤,發(fā)病率為10% ~15%[1]。近年來我國乳癌的發(fā)病率明顯上升,從20世紀(jì)90年代初期已居女性惡性腫瘤之首。乳癌的發(fā)病以40~60歲的女性最為多見,近年來40歲以下的發(fā)病率逐漸升高。早期診斷是乳癌二級預(yù)防的核心內(nèi)容。乳腺位于體表,癌腫易通過患者自查以及各種檢查手段如紅外線掃描、數(shù)字X線檢查、B超檢查和磁共振成像掃描以及細針穿刺活檢等發(fā)現(xiàn),使乳癌比其他腫瘤更易早期診斷。除此之外,腫瘤標(biāo)志物[2]檢測亦是目前早期診斷乳癌常用的方法之一。乳癌抗原(CA153)、癌胚抗原(CEA)等已被認為是有價值的指標(biāo),但實際應(yīng)用中單項指標(biāo)的準(zhǔn)確性并不理想。作者聯(lián)合檢測乳癌患者血清中多種腫瘤相關(guān)抗原(tumor-associated antigen,TAA)抗體的表達,探討TAA聯(lián)合檢測在乳癌早期診斷中的應(yīng)用價值。
1.1 標(biāo)本來源 115例乳癌患者血清標(biāo)本均由鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院檢驗科提供(為到該院就診、經(jīng)組織病理學(xué)確診的乳癌患者),153例正常人血清標(biāo)本均采集自到該院進行健康體檢并證實無任何腫瘤相關(guān)疾患的健康成人。
1.2 主要試劑和儀器 14種TAA(CyclinE,CDK2,CyclinB1,CyclinD1,p16,p62,Imp1,Koc,cIAP,Survivin,p53,Calnuc,C-myc,RalA)為美國德克薩斯州大學(xué)生命科學(xué)系腫瘤免疫和腫瘤分子流行病學(xué)研究室提供,96孔酶標(biāo)板(美國 Gibco公司),SUNRISE酶標(biāo)儀(美國Tecan公司)。
1.3 血清中TAA抗體抗原的檢測及結(jié)果判定采用間接酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)[3]:各種抗原以0.5 g/L的稀釋度包被96孔板;一抗均按1∶100稀釋,PBS作為空白對照,每孔加100 μL,37℃孵育2 h,PBST洗板3次;二抗 HRP標(biāo)記的羊抗人 IgG(H+L)1∶4000 稀釋,每孔100 μL,37 ℃孵育2 h,洗板3次;DAB顯色液每孔100 μL,37℃避光反應(yīng)至充分顯色;終止液50 μL,在酶標(biāo)儀上讀取波長450 nm處的OD值,空白孔調(diào)零。結(jié)果判定:每份樣品血清做3孔,取平均值判斷結(jié)果,空白孔調(diào)零;選擇5個乳癌患者血清和5個正常人血清作為判斷每批ELISA試驗之間可靠性的指標(biāo);所有檢測的正常人血清OD值的平均值加2個標(biāo)準(zhǔn)差為判斷臨界值[4],高于此值為陽性,低于此值為陰性。
1.4 統(tǒng)計學(xué)處理 采用SPSS 13.0進行分析,應(yīng)用χ2檢驗或四格表確切概率法處理數(shù)據(jù),檢驗水準(zhǔn)α =0.05。
2.1 每種TAA抗體檢測結(jié)果及真實性評價 見表1。由表1可見,單個TAA檢測乳癌患者血清時,乳癌組與正常組TAA檢出的陽性率差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P <0.05),檢測的靈敏度13.0% ~32.2%,其中CyclinE抗體的陽性率(32.2%)最高,Calnuc抗體的陽性率(13.0%)最低;正常人抗體陽性率較低,CyclinB1抗體的陽性率(3.9%)最高,cIAP抗體的陽性率(0.7%)最低。
2.2 不同TAA抗體組合的檢測結(jié)果 并聯(lián)試驗診斷結(jié)果見表2。
表1 每種TAA抗體檢測結(jié)果及真實性評價
表2 不同TAA抗體組合的檢測結(jié)果
由表2可見,隨著抗原種類的增加,檢測的靈敏度逐漸增加,當(dāng)增加到8種抗原時,繼續(xù)增加抗原種類,不能提高檢測的靈敏度,反而降低特異度。因此,從14種抗原中篩選出8種抗原的并聯(lián)組合(Cyclin E,Koc,Imp1,cIAP,p62,p16,Cyclin B1 和Calnuc)為最佳組合,8種抗原聯(lián)合檢測的靈敏度從32.2%增加到72.2%,比單個抗原增加了40%,特異度僅從98.0%降低到91.5%,約登指數(shù)為0.637,陽性預(yù)測值為86.5%,陰性預(yù)測值為81.4%。
2.3 最佳組合檢測乳癌的評價 見表3。篩選出的8種TAA聯(lián)合檢測時,乳癌患者血清中TAA抗體陽性率明顯高于正常人群血清,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=115.796,P <0.001),提示8 種 TAA 聯(lián)合檢測乳癌的臨床診斷價值較高,診斷結(jié)果與真實值之間中度一致[真實性評價:靈敏度=72.2%,特異度=91.5%,約登指數(shù)=0.637,陽性似然比=靈敏度/(1-特異度)=8.490,陰性似然比=(1-靈敏度)/特異度 =0.304,一致率 =83.2%,Kappa=0.650,陽性預(yù)測值 =86.5%,陰性預(yù)測值 =81.4%]。
表3 最佳組合檢測乳癌結(jié)果 例
既往研究[5-6]發(fā)現(xiàn)聯(lián)合檢測一組精心挑選的抗原抗體可以提高腫瘤早期診斷的靈敏度,同時為使抗原抗體聯(lián)合檢測在臨床應(yīng)用中達到一定的真實性,不同類型的腫瘤可能需要不同的抗原抗體組合[3,7],但至目前,國內(nèi)沒有關(guān)于 TAA 抗體在乳癌中應(yīng)用的相關(guān)報道。
該研究結(jié)果表明,單獨應(yīng)用一種抗原抗體檢測時靈敏度普遍偏低,最高不到33%,在乳癌診斷中沒有實際意義;隨著TAA組合抗原種類的增加,直到最后8種TAA的聯(lián)合檢測,診斷的靈敏度有明顯上升,達到72.2%,而特異度則無明顯下降,說明聯(lián)合檢測確實可以提高乳癌的陽性檢出率。
該研究中所采用的抗原組合并不包括目前國際腫瘤學(xué)研究領(lǐng)域普遍認可的與乳癌相關(guān)性較高的CA153和CEA,主要原因是CA153在乳癌Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ期診斷的靈敏度分別只有10% ~15%、20% ~25%和30% ~45%,而且在正常人群、乳腺良性病變、慢性肝炎、免疫球蛋白病和其他腺癌等中也發(fā)現(xiàn)有CA153增高[8];CEA雖然是乳癌臨床監(jiān)測常用指標(biāo),但它在乳癌復(fù)發(fā)診斷中的價值更大[9]。
綜上所述,在乳癌的早期診斷中聯(lián)合檢測多種TAA抗體具有一定的應(yīng)用價值,今后的研究重點應(yīng)該集中在鑒定和設(shè)計乳癌特異的TAA組合,從而建立一種新的乳癌早期體外非侵入性診斷技術(shù)。
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