5－氟尿嘧啶類脂囊泡藥動(dòng)學(xué)和組織分布研究

袁 悅，王 覓，2，諶紅丹，車 鑫，趙 琨，王 晶

（1.沈陽藥科大學(xué)藥學(xué)院，遼寧沈陽110016；2.河北省中醫(yī)院藥劑科，河北石家莊500011）

5－氟尿嘧啶類脂囊泡藥動(dòng)學(xué)和組織分布研究

袁 悅1，王 覓1，2，諶紅丹1，車 鑫1，趙 琨1，王 晶1

（1.沈陽藥科大學(xué)藥學(xué)院，遼寧沈陽110016；2.河北省中醫(yī)院藥劑科，河北石家莊500011）

用非離子表面活性劑制備5－氟尿嘧啶（5－Fu）囊泡，并對(duì)其進(jìn)行了小鼠體內(nèi)藥動(dòng)學(xué)和組織分布的研究.采用薄膜分散法制備5－Fu的類脂囊泡，以5－Fu水溶液為對(duì)照，尾靜脈注射自制5－Fu囊泡和5－Fu水溶液，利用高效液相色譜法檢測(cè)血漿和各組織中的5－Fu濃度，利用統(tǒng)計(jì)學(xué)方法計(jì)算了5－Fu在小鼠體內(nèi)的藥動(dòng)學(xué)參數(shù)及小鼠的組織分布參數(shù).與注射水溶液組相比，5－Fu囊泡組MRT值延長，AUC0～t值增加.組織分布結(jié)果顯示：5－Fu囊泡在肝、腎中AUC值顯著增加；5－Fu囊泡明顯延長了5－Fu在體內(nèi)的作用時(shí)間，比普通水溶液具有一定的緩釋和提高生物利用度的作用.

5－氟尿嘧啶；類脂囊泡；藥物動(dòng)力學(xué)；組織分布

非離子表面活性劑囊泡（non－ionic surfactant vesicles，niosomes）是由合成的非離子表面活性劑與膽固醇形成的一種單室或多室具有封閉雙層結(jié)構(gòu)的有序組織聚集體，簡稱類脂囊泡［1］.

近年來，隨著新型藥物傳遞系統(tǒng)的研究與應(yīng)用，發(fā)現(xiàn)利用非離子表面活性劑囊泡包裹藥物可以減少藥物在達(dá)到有效部位前被破壞［2］、延長藥物的半衰期［3］，從而延長藥物的作用時(shí)間以及降低藥物毒副作用，改變藥物在體內(nèi)的分布，達(dá)到被動(dòng)靶向作用等［4］.與脂質(zhì)體相比，非離子表面活性劑囊泡的載體材料不含磷脂，避免了磷脂的氧化降解，使工藝簡化、成本降低，是一種極有希望的新型藥物載體.近年來，囊泡包封技術(shù)已經(jīng)成為化學(xué)、藥學(xué)和生命科學(xué)研究領(lǐng)域中的熱點(diǎn)課題之一.

5－Fu是臨床常用的一種注射用抗代謝類抗腫瘤藥物，抗瘤譜較廣，但靜脈給藥后血中半衰期短，消除極快，需靜脈持續(xù)給藥，并且由于5－Fu靜脈給藥后對(duì)機(jī)體正常組織和病理部位無選擇性，有嚴(yán)重的骨髓抑制和胃腸道反應(yīng)的毒副作用等問題，因此臨床應(yīng)用受到限制［5］.我們選用適宜的非離子表面活性劑將其制成非離子表面活性劑囊泡［6］，進(jìn)行靜脈注射，希望能夠延長其體內(nèi)循環(huán)時(shí)間，增加藥物的療效.

本文制備了5－Fu囊泡，并研究其在小鼠體內(nèi)的藥動(dòng)學(xué)及組織分布，考察其制成囊泡制劑后對(duì)小鼠體內(nèi)行為的影響.

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 儀器和材料

儀器：LC－10AT高效液相色譜儀（日本島津株式會(huì)社），SPD－10A檢測(cè)器（日本島津株式會(huì)社），Easy3000色譜工作站（杭州普惠科技有限公司）；MD200－2電子分析天平（奧豪斯國際貿(mào)易有限公司）；TDL80－213型高速離心機(jī)（上海安亭科學(xué)儀器廠）；XW－80A旋渦混合器（上海精科實(shí)業(yè)有限公司）；79HW－1恒溫磁力攪拌器（江蘇金壇榮華儀器制造有限公司）.

材料：5－Fu（上海邦成有限公司）；Span20表面活性劑（國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司）；膽固醇（天津市博迪化工有限公司）；阿昔洛韋（鄭州旭誠貿(mào)易有限公司）；乙酸乙酯（山東禹王實(shí)業(yè)有限公司）；甲醇（山東禹王實(shí)業(yè)有限公司）.

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 色譜條件

色譜條件：色譜柱為Agilent ODS C18柱（250mm×4.6mm，5μm）；流動(dòng)相為V（甲醇）∶V（水）＝10∶90；流速為0.6mL/min；波長為267nm；柱溫為25℃.

1.2.2 溶液的配置

標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液：精密稱取160.0mg 5－Fu對(duì)照品，置于100mL容量瓶中，加適量水，超聲溶解，用蒸餾水稀釋至刻度，搖勻，得到質(zhì)量濃度為1600μg/mL的儲(chǔ)備液.分別精密吸取上述儲(chǔ)備液0.1，0.5，1.5，2.5，4，5，10和30mL置于50mL容量瓶中，用蒸餾水稀釋定容，配成質(zhì)量濃度為3.2，16.0，48.0，80.0，128，160，320和960μg/mL的系列標(biāo)準(zhǔn)溶液，備用.

內(nèi)標(biāo)溶液：精密稱取40mg阿昔洛韋對(duì)照品，置于50mL容量瓶中，加適量蒸餾水，超聲溶解，加水至刻度，搖勻，得質(zhì)量濃度為800μg/mL的阿昔洛韋溶液，即為內(nèi)標(biāo)溶液.

1.2.3 生物藥品處理方法

精確量取生物樣品（血漿或組織勻漿液）100μL，加入10μL內(nèi)標(biāo)液（阿昔洛韋的質(zhì)量濃度為800μg/mL），渦旋混合1min，再加入1.5mL乙酸乙酯，渦旋5min，10000r/min離心8min.移取上清，氮?dú)獯蹈?，加?00μL流動(dòng)相復(fù)溶，進(jìn)樣.

1.2.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制定

精密吸取生物樣品（血漿或組織勻漿液）100μL置于具塞離心試管中，分別加入5－Fu系列標(biāo)準(zhǔn)溶液10μL，配制成相當(dāng)于質(zhì)量濃度為0.32，4.8，8.0，12.8，16.0，32.0和96.0μg/mL的血液樣品和質(zhì)量濃度依次為0.32，1.6，4.8，8.0，12.8，16.0，32.0μg/mL的組織樣品，加入內(nèi)標(biāo)溶液（質(zhì)量濃度為800μg/mL阿昔洛韋溶液）10μL，按“1.2.1色譜條件”對(duì)生物樣品進(jìn)行處理，進(jìn)樣20μL，記錄色譜圖及峰面積，以A對(duì)C做線性回歸.

1.2.5 回收率與精密度

取空白生物樣品勻漿100μL，按“1.2.3標(biāo)準(zhǔn)曲線的制定”操作，配制低、中、高3個(gè)濃度（5－Fu血漿質(zhì)量濃度分別為1.6，8.0和16μg/mL）的樣品，每一濃度進(jìn)行5個(gè)樣本分析，連續(xù)測(cè)定3d，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算各樣品的測(cè)得濃度，計(jì)算日內(nèi)與日間精密度.

取100μL空白生物樣品勻漿，按“1.2.3標(biāo)準(zhǔn)曲線的制定”操作，配制低、中、高3個(gè)濃度（5－Fu血漿質(zhì)量濃度分別為1.6，8.0和16μg/mL）的樣品，每一濃度5個(gè)樣本進(jìn)樣分析，記錄5－Fu的峰面積，并與配制相應(yīng)濃度的5－Fu對(duì)照品溶液進(jìn)樣所得到的峰面積相比，計(jì)算提取回收率.

1.2.6 給藥方案及樣品采集

小鼠稱重，5－Fu按25mg/kg劑量尾靜脈注射對(duì)照溶液和制劑，每種劑型平行3組.分別在0，2，5，10，15，20，30，60，90，120，240min摘眼球取血，收集血液于肝素抗凝管中，10000r/min離心5min，取血漿備用.

其中取2，5，10，30，60，240min時(shí)間點(diǎn)小鼠心、肝、脾、肺、腎組織.置于生理鹽水中，洗凈，濾紙吸干，稱重.按2mL/g組織加入生理鹽水，制成組織勻漿.

2 結(jié)果與討論

2.1 方法專屬性

5－Fu的保留時(shí)間為7.121min，內(nèi)標(biāo)的保留時(shí)間為12.623min，分離度較佳且峰形良好.

2.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線方程

相應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)曲線方程如表1所示.結(jié)果表明在相應(yīng)的濃度范圍內(nèi)，線性關(guān)系良好.

表1 各組織標(biāo)準(zhǔn)曲線方程

2.3 回收率及精密度

精密度和回收率結(jié)果如表2所示，結(jié)果表明，高、中、低3個(gè)濃度的日內(nèi)與日間精密度及提取回收率結(jié)果均良好.

表2 各組織精密度及回收率結(jié)果

2.4 血藥濃度和藥動(dòng)學(xué)參數(shù)測(cè)定

對(duì)小鼠尾靜脈注射5－Fu水溶液和5－Fu類脂囊泡后，對(duì)血藥濃度－時(shí)間數(shù)據(jù)進(jìn)行處理，藥時(shí)曲線如圖1所示，藥動(dòng)學(xué)參數(shù)如表3所示.

圖1 5－Fu 2種制劑藥時(shí)曲線圖

表3 體內(nèi)藥動(dòng)學(xué)參數(shù)

藥動(dòng)學(xué)參數(shù)結(jié)果顯示，5－Fu類脂囊泡和普通水溶液相比，AUC有明顯的提高（P＜0.05），半衰期也有一定的延長，說明類脂囊泡制劑相比于普通水溶液具有一定的緩釋和提高生物利用度的作用.

各組織注射不同制劑后AUC結(jié)果見圖2.由圖2可知，5－Fu類脂囊泡在各組織中AUC相對(duì)于普通水溶液，藥物在血漿、心、肝、脾、腎中的分布有一定的提高，尤其是在血漿、肝和腎中的提高是非常顯著的，而在肺中的藥物濃度卻相對(duì)下降了.這可能是由于藥物主要是通過肝腎代謝和排泄的，由于類脂囊泡的緩釋作用，使得藥物在體內(nèi)滯留時(shí)間延長，從而使得藥物在血漿、肝、腎中的濃度持續(xù)在一定的水平，表現(xiàn)為AUC顯著增加.

圖2 不同制劑在不同組織中藥物AUC結(jié)果

3 結(jié)論

本文以5－Fu水溶液為對(duì)照，考察了制備的5－Fu類脂囊泡通過尾靜脈注射后在小鼠體內(nèi)的藥物動(dòng)力學(xué)及組織分布結(jié)果.結(jié)果表明，制備的類脂囊泡具有一定的緩釋和提高生物利用度的作用，從而可以實(shí)現(xiàn)降低制劑給藥次數(shù)和藥物毒副作用.

［1］ HONG M，ZHU S，JIANG Y，et al.Efficient tumor targeting of hydroxycamptothecin loaded PEGylated niosomes modified transferrin［J］.Journal of Control Release，2009，133：96－102.

［2］ SANYOG JAIN，RAKESH KUMAR SHARMA，VYAS S P.Chitosan nanoparticles encapsulated vesicular systems for oral immunization：preparation，in vitro and in vivo characterization［J］.Journal of Pharmacy ＆Pha2macology，2006，58（3）：303－310.

［3］ KHAKSA G，D SOUZA R，LEWIS S，UDUPA N.Pharmacokinetic study of niosome encapsulated insulin［J］.Indian Journal of Experimental Biology，2000，38（9）：901－905.

［4］ DUFES CHRISTINE，GAILLARD FREDERIC，UCHEGBU IJEOMAF，et al.Glucose－targeted niosome deliver vasoactive intestinal peptide（VIP）to the brain［J］.International Journal of Pharmaceutics，2004，285（1/2）：77－85.

［5］ FOURNIER E，PASSIRANI C，COLIN N，et al.Development of novel 5－Fu－loaded poly（methylidene malonate 2.1.2）－based microspheres for the treatment of brain cancers［J］.Eur J Pharm Biopharm，2004，57（2）：189－97.

［6］ 袁悅，王紅霞，劉巖，等.類脂囊泡作為5－氟尿嘧啶藥物載體研究［J］.分子科學(xué)學(xué)報(bào)，2010，26（6）：420－423.

Abstract：To study the preparation of 5－flurouracil（5－Fu）noisomes and the pharmacokinetics and tissue distribution in mice.5－Fu noisomes were prepared using film dispersion method.5－Fu noisomes and 5－Fu solution were carried out in mice by caudal vein injection.5－Fu concentrations of plasma and various tissues were detected by HPLC methods.Statistical methods were used to calculate the parameters of pharmacokinetics and tissue distribution in mice.Compared to the group of 5－Fu solution，MRT and AUC0～tof 5－Fu niosomes both were increased.Compared with 5－Fu solution，5－Fu niosomes had a sustained release and a improved bioavailability.

Keywords：5－Fu；niosomes；pharmacokinetic；tissue distribution

（責(zé)任編輯：石紹慶）

Study on pharmacokinetic and tissue distribution in mice of 5－flurouracil niosomes

YUAN Yue1，WANG Mi1，2，CHEN Hong－dan1，CHE Xin1，ZHAO Kun1，WANG Jing1
（1.School of Pharmacy，Shenyang Pharmaceutical University，Shenyang 110016，China；2.Department of Pharmacy，Hebei Province Traditional Chinese Medicine Hospital，Shijiazhuang 500011，China）

O648［學(xué)科代碼］150·30

A

2011－10－15

遼寧省博士啟動(dòng)基金資助項(xiàng)目（20081035）；沈陽市科技局資助項(xiàng)目（1081231－1－00）；遼寧省企業(yè)博士后項(xiàng)目（bsh2010042）.

袁悅（1972—），女，博士，副教授，主要從事物理藥學(xué)和藥物新劑型研究；通訊作者：王晶（1963—），女，副教授，主要從事物理藥學(xué)研究.

1000－1832（2012）02－0099－04