血管緊張素Ⅱ－1型受體基因多態(tài)性與高血壓及血管內(nèi)皮功能的相關(guān)性

張 強(qiáng) 崔天祥 李 莉 楊麗紅 孔 靜 (鄭州大學(xué)第二附屬醫(yī)院，河南 鄭州 450014)

腎素-血管緊張素系統(tǒng)(RAS)對(duì)血壓和機(jī)體內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定發(fā)揮至關(guān)重要的作用。由于RAS的作用均由血管緊張素Ⅱ-1型受體(AT1R)介導(dǎo)，因此AT1R基因與原發(fā)性高血壓(EH)相關(guān)性的研究成為近年來(lái)的熱點(diǎn)。血管內(nèi)皮細(xì)胞能合成及分泌多種生物活性物質(zhì)，對(duì)維持管壁張力和血流有重要作用。近年來(lái)，一些研究證實(shí)高血壓存在內(nèi)皮損傷，而EH患者血管內(nèi)皮功能的遺傳機(jī)制研究國(guó)內(nèi)鮮有報(bào)道。本研究擬探討AT1R基因多態(tài)性與血管內(nèi)皮功能在EH發(fā)病中的相關(guān)性。

1 資料與方法

1.1 臨床資料

1.1.1 EH組 入選鄭州大學(xué)第二附屬醫(yī)院高血壓門(mén)診EH患者82例，男53例，女29例，年齡(62±6)歲，收縮壓(154±12)mmHg，舒張壓(86±10)mmHg，均為漢族，EH 診斷符合1999年中國(guó)高血壓防治指南規(guī)定的診斷標(biāo)準(zhǔn)。受試者均無(wú)血緣關(guān)系，且排除繼發(fā)性高血壓。

1.1.2 正常血壓組 33例，來(lái)自健康體檢人群，男23例，女10例，年齡(60±8)歲，收縮壓(120±14)mmHg，舒張壓(72±10)mmHg，未服用影響血壓的藥物對(duì)象間無(wú)血緣關(guān)系。

1.2 檢測(cè)方法

1.2.1 血樣采集 取靜脈血5 ml，其中1 ml離心分離血漿，－15℃保存，待測(cè)血漿氧化氮(NO)和內(nèi)皮素(ET);(2)余血加入2%EDTA抗凝管中，－70℃保存，待提取基因組DNA。

1.2.2 AT1R基因的檢測(cè) (1)DNA的提取:應(yīng)用杭州VGENG生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)的血細(xì)胞基因組DNA制備試劑盒提取組織DNA。(2)PCR擴(kuò)增:AT1R引物序列:上游5'-CAC CAT GTT TTG AGG TT-3'，下游5'-CGA GTT TCT GAC ATT GTT C-3'，由上海生工生物工程技術(shù)服務(wù)有限公司合成。(3)限制性酶切:PCR擴(kuò)增產(chǎn)物3 μl加入內(nèi)含10 U dDeI的限制性內(nèi)切酶反應(yīng)緩沖液稀釋成20 μl，37℃酶切3 h。(4)電泳分型:酶解產(chǎn)物點(diǎn)樣于2%瓊脂糖凝膠中電泳30 min后EB染色，紫外燈下觀察結(jié)果并照相。

1.2.3 血漿NO、ET的檢測(cè) NO測(cè)定采用硝酸還原酶法，ET測(cè)定采用放射免疫法。

1.2.4 肱動(dòng)脈超聲檢查 參照Cvelermajer等〔1〕首創(chuàng)的利用高分辨率超聲檢測(cè)肱動(dòng)脈擴(kuò)張判斷血管內(nèi)皮功能的方法。受檢者停用血管擴(kuò)張劑24 h以上，采用HDI-3000型彩色多普勒超聲診斷儀和7.5 MHz線陣探頭，探查深度4 cm，同步記錄心電圖，仰臥位，右上肢外展45°，掌心向上，以二維超聲成像掃描肱動(dòng)脈。再以肘上2～15 cm肱動(dòng)脈為靶動(dòng)脈，顯示長(zhǎng)軸切面，測(cè)量舒張末期內(nèi)徑。每次3個(gè)心動(dòng)周期，取平均值。分別測(cè)量每位受試者靜息時(shí)、反應(yīng)性充血、再休息及含服硝酸甘油(NTG)后肱動(dòng)脈內(nèi)徑。測(cè)定基礎(chǔ)值(D0)后將血壓計(jì)袖帶放于肱動(dòng)脈遠(yuǎn)端，充氣加壓至收縮壓上50 mmHg，維持4～5 min放氣，放氣后60～90 s內(nèi)迅速測(cè)量肱動(dòng)脈內(nèi)徑(D1)。休息10 min，血管內(nèi)徑恢復(fù)至試驗(yàn)前狀態(tài)后，舌下含服硝酸甘油0.5 mg，3～4 min后再次測(cè)量血管內(nèi)徑(D2)。整個(gè)過(guò)程保持超聲探頭始終處于固定位置。反應(yīng)性充血及服用硝酸甘油后血管內(nèi)徑改變情況以第一次測(cè)量基礎(chǔ)值的百分?jǐn)?shù)表示，即(D1或D2-D0)/100%。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 應(yīng)用SPSS17.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析:計(jì)量資料用±s表示，均數(shù)比較采用t檢驗(yàn);兩組之間頻數(shù)分布采用χ2檢驗(yàn)。

2 結(jié)果

2.1 AT1R基因型檢測(cè)結(jié)果 瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)AT1R基因型見(jiàn)圖1。

2.2 兩組間AT1R基因型頻率及等位基因頻率比較 82例EH患者的基因型AA型70例，AC型9例，CC型3例，基因型頻率分別為85.4%，10.9%和3.7%;A和C的等位基因頻率分別為90.9%和9.1%。33例正常血壓者的基因型AA型31例，AC型2例，CC型0例;基因型頻率分別為94%，6%和0.0%;A和C的等位基因頻率分別為97%和3%。經(jīng)χ2檢驗(yàn)兩組間C等位基因頻率有顯著性差異(χ2=0.046，P＜0.05)。

2.3 三組間血漿NO、ET濃度和肱動(dòng)脈內(nèi)徑變化 見(jiàn)表1。

表1 三組血漿NO、ET濃度和肱動(dòng)脈內(nèi)徑變化比較(±s)

表1 三組血漿NO、ET濃度和肱動(dòng)脈內(nèi)徑變化比較(±s)

與對(duì)照組比較:1)P＜0.05;與EH組比較:2)P＜0.05

組別 n NO(μmol/L)ET(pg/ml)反應(yīng)性充血后血管內(nèi)徑改變(%)含服硝酸甘油后血管內(nèi)徑改變(%)基礎(chǔ)值(mm)對(duì)照組 33 73.98±5.68 51.18±4.83 9.80±2.12 4.6±1.455.0±0.8 EH組 82 66.81±6.861) 56.53±6.111) 7.35±2.031) 4.3±1.09 4.8±0.9 EH具有C等位基因組 12 54.63+5.422) 62.76±5.802) 5.20±1.981)2) 2.9±1.361)2)4.6±0.7

圖1 瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)AT1R基因型

3 討論

RAS通過(guò)AngⅡ調(diào)節(jié)血壓、體液容量和電解質(zhì)平衡，而AngⅡ主要通過(guò)與靶器官細(xì)胞膜上的特異性受體結(jié)合發(fā)揮生物學(xué)效應(yīng)，人類AT1R基因位于3號(hào)染色體長(zhǎng)臂21～25區(qū)〔2〕，基因組全長(zhǎng)47 kb，包含5個(gè)外顯子，為單拷貝基因。1994年Bonnardeaux等〔2〕在AT1R的編碼區(qū)及3'非翻譯區(qū)測(cè)到五種多態(tài)性，與臨床關(guān)系較為密切的基因變異A1166C位于3'未翻譯區(qū)(UTR)的5'端，并證實(shí)A1166C突變與血壓升高有關(guān)。本研究提示AT1R基因A1166C多態(tài)性與EH相關(guān)，C等位基因是EH的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。

血管內(nèi)皮不僅是血管屏障，也是重要的內(nèi)分泌和效應(yīng)器官，可以產(chǎn)生NO、ET-1和多種血管活性物質(zhì)以調(diào)節(jié)血管舒縮功能〔1〕。高血壓可以導(dǎo)致內(nèi)皮功能障礙，但也有研究顯示內(nèi)皮功能紊亂早于高血壓的發(fā)生〔3〕。本研究結(jié)果說(shuō)明高血壓伴有內(nèi)皮細(xì)胞損傷、血管舒縮功能障礙，主要原因是由于內(nèi)皮細(xì)胞釋放的縮血管物質(zhì)增多而舒血管物質(zhì)減少。

Taddei等〔4〕研究發(fā)現(xiàn)，即使無(wú)明顯的影響血管內(nèi)皮的危險(xiǎn)因素，但內(nèi)皮仍出現(xiàn)不同程度的功能障礙，由此認(rèn)為血管內(nèi)皮功能也與遺傳因素有關(guān)。本研究結(jié)果說(shuō)明EH存在血管內(nèi)皮舒縮功能障礙，表現(xiàn)為血漿NO濃度下降和ET濃度升高，且有一定的遺傳因素參與，AT1R基因1166CC型可能是EH內(nèi)皮舒縮功能障礙的危險(xiǎn)因素。

綜上所述，遺傳因素是EH發(fā)病機(jī)制中的重要因素，AT1R基因變異是參與EH發(fā)病的重要分子基礎(chǔ)，EH可以導(dǎo)致血管內(nèi)皮舒縮功能障礙。研究AT1R基因A1166C多態(tài)性與EH內(nèi)皮功能障礙的關(guān)系可以作為早期判斷高血壓預(yù)后的間接指標(biāo)。

1 Celermajer DS，Sorensen KE，Gooch VM，et al.Non-invasive detection of endothelial dysfunction in children and adults at risk of atherosclerosis〔J〕.Lancet，1992;340:1111-5.

2 Bonnardeaux A，Davies E，Jeunemaitre X，et al.Angiotensin II type 1 receptor gene polymorphisms in human essential hypertension〔J〕.Hypertension，1994;24(1):63-9.

3 陳 明，胡申江.高血壓病血管內(nèi)皮功能障礙及治療〔J〕.心血管病學(xué)進(jìn)展，2005;26:222-6.

4 Taddei S，Virdis A，Mattei P，et al.Defective L-arginine-nitric oxide pathway in offspring of essential hypertensive patient〔J〕.Circulation，1996;94:1298-303.