松乳菇菌絲體純培養(yǎng)特性研究*

薛振文 應(yīng)國華 呂明亮 李伶俐 張 坤 高鳳娟 葉和軍

(1.麗水市林業(yè)科學(xué)研究院,浙江 麗水 323000;2.興和縣農(nóng)業(yè)局,內(nèi)蒙古 興和 013650;3.麗水學(xué)院,浙江 麗水 323000;4.麗水白云生態(tài)林場,浙江 麗水 323000)

松乳菇 [Lactarius deliciosus(L.ex.Fr.)Gray]是一種外生菌根食用菌,又名美味松乳菇,俗稱烏松菌、松菌、茶花菌、雁來菌、寒菌,屬紅菇科,乳菇屬。其味道鮮美,營養(yǎng)豐富。在浙江西南部山區(qū)有大量分布,繁殖季節(jié)為春秋兩季,當?shù)剞r(nóng)民有采食并上市場交易的習(xí)慣。松乳菇目前尚不能進行人工栽培,市場供應(yīng)全依賴于野生采集,由于過度采摘,產(chǎn)地自然資源破壞嚴重,產(chǎn)量逐漸減少。

項目組在成功實現(xiàn)褐環(huán)粘蓋牛肝菌人工栽培的基礎(chǔ)上,利用菌根學(xué)原理進一步研究松乳菇的人工栽培技術(shù)。現(xiàn)將松乳菇菌絲體部分研究工作報道如下。

1 材料與方法

1.1 供試菌株 菌種為麗水市林業(yè)科學(xué)研究院食用菌研究所在麗水采集、分離、保藏,編號L4,經(jīng)中國林科院熱帶林業(yè)研究所分子鑒定為松乳菇。

1.2 供試培養(yǎng)基 母種培養(yǎng)基為:馬鈴薯20%、麩皮1%、葡萄糖2%、蛋白胨0.3%、磷酸二氫鉀0.15%、硫酸鎂0.05%、維生素B10.001%、瓊脂2.1%、水1 L、pH自然。

碳源基礎(chǔ)培養(yǎng)基:基礎(chǔ)配方為馬鈴薯 10%、蛋白胨0.3%、磷酸二氫鉀0.15%、硫酸鎂0.05%、維生素B10.001%、瓊脂2.1%、水1 L,pH自然;分別加葡萄糖、白糖、紅糖、D-果糖作為處理組;以不加碳源的培養(yǎng)基為對照。

氮源基礎(chǔ)培養(yǎng)基:基礎(chǔ)配方為馬鈴薯20%、葡萄糖2%、磷酸二氫鉀0.15%、硫酸鎂0.05%、維生素B10.001%、瓊脂2.1%、水1 L、pH自然;分別加氯化銨、酒石酸胺、蛋白胨、酵母浸膏粉、乙二胺四乙酸、牛肉浸膏、豆胨、硝酸鈉、葉酸、煙酸、鹽酸硫胺、L-谷氨酸作為處理組;以不加氮源的培養(yǎng)基為對照。

1.3 pH值梯度試驗 設(shè)4、6、8、10四個pH梯度,采用母種培養(yǎng)基配方,用鹽酸和氫氧化鈉調(diào)節(jié)培養(yǎng)基pH。

1.4 不同培養(yǎng)溫度梯度試驗 采用母種培養(yǎng)基配方,設(shè)15℃、22℃、27℃、32℃四個梯度為培養(yǎng)溫度。

1.5 試驗方法 采用半固體平板培養(yǎng)法:按照無菌操作要求,挑取活化的菌種塊約0.5 cm2接種于固體平板中央,封口標記,每處理設(shè)5個重復(fù)。溫度梯度試驗組培養(yǎng)皿置于各溫度培養(yǎng)箱中避光靜置培養(yǎng),其余均置于27℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。分別于接種后第7天和第19天采用十字交叉法測量菌落直徑,觀察生長情況并予以記錄。采用DPS和Microsoft Office Excel軟件進行數(shù)據(jù)處理分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同碳源對松乳菇菌絲生長的影響

(1)菌絲日均生長量。從表1可以看出,相比不加碳源培養(yǎng)基 (CK),加碳源培養(yǎng)基對松乳菇菌絲生長效應(yīng)明顯,其中以葡萄糖為碳源的菌絲日均生長量較大,為4.406 mm,與其他碳源培養(yǎng)基有極顯著差異;其次是以白糖為碳源,日均生長量為4.052 mm;以D-果糖和紅糖為碳源的生長效應(yīng)無顯著差異,菌絲日均生長量較少,分別為3.683 mm和3.608 mm。表明不同碳源對松乳菇菌絲體生長的影響有明顯差異。

(2)菌落形態(tài)特征。以菌絲濃密、菌皮厚、有氣生菌絲、菌落顏色呈淡黃色或白色為長勢良好。從表1可見,松乳菇以葡萄糖和D-果糖為碳源的菌絲長勢較好,表現(xiàn)為菌落凹凸不平,呈橙黃色,菌皮較厚,菌絲濃密。其次為白糖和紅糖,表現(xiàn)為菌落較平整,菌皮較薄,菌絲較密,無氣生菌絲,菌絲中間橙黃色前端白色。在不加碳源的培養(yǎng)基上長勢差,菌絲稀淡,菌皮薄,緊貼培養(yǎng)基生長,無氣生菌絲,菌落平整,呈白色。

綜合分析松乳菇菌絲體的單因子碳源試驗結(jié)果,以葡萄糖為最佳。

2.2 不同氮源對松乳菇菌絲生長的影響

(1)菌絲體日均生長量。從表2看,氮源為氯化銨和葉酸的菌絲日均生長量較大,分別為4.458 mm和4.450 mm;其次為鹽酸硫胺、酒石酸胺、L-谷氨酸、硝酸鈉,日均生長量分別為4.083 mm、3.95 mm、3.875 mm、3.65 mm、3.442 mm。相比空白對照,蛋白胨對菌絲生長的效應(yīng)較小,煙酸、酵母浸膏粉、豆胨、乙二胺四乙酸、牛肉浸膏無效應(yīng)或是負效應(yīng)。差異顯著性分析結(jié)果顯示,氯化銨、葉酸與其他氮源處理之間存在極顯著差異,其他各氮源之間存在顯著差異。表明不同氮源對松乳菇菌絲體生長有顯著的影響。

(2)菌落形態(tài)特征。從表2看出,以氯化銨、葉酸、鹽酸硫胺和蛋白胨為氮源的處理,菌絲生長情況好,表現(xiàn)為菌落凹凸不平,顏色呈淡黃色,菌皮較厚,菌絲較密,前端或中間菌絲氣生。以酒石酸胺、L-谷氨酸、硝酸鈉為氮源,菌絲體生長情況較好:菌落凹凸不平,菌皮較薄,菌絲較淡,前端菌絲氣生或無氣生。以煙酸、酵母浸膏粉和豆胨為氮源的菌落生長情況較差:菌落平整,菌皮薄,菌絲淡,無氣生菌絲,與空白對照無明顯區(qū)別。松乳菇菌絲塊在以乙二胺四乙酸和牛肉浸膏為氮源的培養(yǎng)基上不萌發(fā)。

表1 不同碳源的松乳菇菌絲體日均生長量及菌絲生長情況

表2 不同氮源的松乳菇菌絲體日均生長量及菌絲生長情況

表3 不同培養(yǎng)溫度下松乳菇菌絲體日均生長量及菌絲生長情況

表4 培養(yǎng)基不同pH值條件下松乳菇菌絲體日均生長量及菌絲生長情況

綜合分析松乳菇菌絲體的單因子氮源試驗結(jié)果,以氯化銨和葉酸為佳。

2.3 不同培養(yǎng)溫度對松乳菇菌絲生長的影響

(1)菌絲體日均生長量。表3結(jié)果表明,培養(yǎng)溫度在27 ℃時,菌絲日均生長量較大,為4.025 mm;其次為32℃和22℃,日均生長量分別為3.96 mm、3.675 mm;在15℃時,菌絲生長較慢,日均生長量僅為1.225 mm。

差異顯著性分析結(jié)果顯示,培養(yǎng)溫度27℃與其他處理之間存在顯著差異;22℃、27℃、32℃處理與15℃處理之間,有極顯著差異。

(2)菌落形態(tài)特征。從表3看,在不同培養(yǎng)溫度下,菌落形態(tài)和顏色無明顯區(qū)別,生長較好,表現(xiàn)為菌絲濃密,菌落凹凸不平,菌皮較厚,有氣生菌絲。

綜合分析松乳菇菌絲體在22～32℃培養(yǎng)溫度下都能較好生長,以27℃為適。

2.4 培養(yǎng)基不同pH值對松乳菇菌絲生長的影響

(1)菌絲體日均生長量。從表4可見,pH值為6時,菌絲體日均生長量最大,為 4.278 mm;其次是 pH值為 8、10、4,日均生長量分別為3.331 mm、3.167 mm、2.889 mm。

差異顯著性分析結(jié)果,pH值為6處理與其他處理有極顯著差異,其他各處理之間存在顯著差異。表明培養(yǎng)基的酸堿度也是影響松乳菇菌絲體生長的重要因子,其最適pH值為6。

(2)菌落形態(tài)特征。從表4看,pH為4的培養(yǎng)基加瓊脂不能凝固,pH為10時培養(yǎng)基顏色呈紅褐色,其他各處理均屬正常。菌落顏色,pH為6時呈淡黃色,菌絲較強壯;pH為8、10、4時呈橙黃色和橙紅色,菌絲較弱,有衰老現(xiàn)象。從菌落形態(tài)看,pH為4和10時,無明顯氣生菌絲,表明在過酸或過堿培養(yǎng)基上,菌絲生長較差。pH為6和8的處理,菌絲濃密,菌落凹凸不平,菌皮較厚,有氣生菌絲,表明接近中性培養(yǎng)基適于菌絲體生長。

3 結(jié)果與討論

根據(jù)本試驗結(jié)果,松乳菇L4菌株菌絲體生長的最佳碳源為葡萄糖,最佳氮源為氯化銨和葉酸,最適培養(yǎng)溫度為27℃,最適pH值為6。與以往文獻報道的研究結(jié)果[1～4]有所差異,原因可能是與菌株個體差異和所用的研究方法不同有關(guān)。在試驗過程中,保證接種菌齡一致性、接種菌塊大小一致性和接種部位的確定性,也許可以提高試驗結(jié)果的準確性。本研究是在單因子條件下測試的碳、氮營養(yǎng),而多因子的交互效應(yīng)尚待研究。

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