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    NDRG2在乳腺癌細(xì)胞系中的表達(dá)及其對乳腺癌細(xì)胞生長的影響

    2012-09-19 00:35:36劉祥
    中國醫(yī)學(xué)創(chuàng)新 2012年20期
    關(guān)鍵詞:癌基因細(xì)胞系抗體

    劉祥

    乳腺癌的發(fā)展是一個復(fù)雜的生物學(xué)過程,包括癌基因的激活、抑癌基因的失活以及調(diào)節(jié)凋亡、粘附和血管生成相關(guān)基因的缺陷等[1-3]。NDRG2是一種抑癌基因,在多種腫瘤組織和腫瘤細(xì)胞系中表達(dá)下調(diào)。

    1 材料與方法

    1.1 材料 乳腺癌細(xì)胞系T47D、MCF7、MDA-MB-453、MDA-MB-231均購自武漢大學(xué)典型培養(yǎng)物典藏中心。質(zhì)粒pcDNA3.1-NRDG2為本實驗室構(gòu)建并測序正確。anti-NDRG2單克隆抗體購自cell signaling公司,anti-beta actin及HRPIgG抗體購自博士德公司。

    1.2 方法 Western blot:將胰蛋白酶消化的5×106個細(xì)胞用PBS洗2遍,裂解0.5 h后,4 ℃離心10 min,取上清,加入緩沖液,煮沸。將待測蛋白電泳,轉(zhuǎn)膜,封閉非特異性抗體。然后分別加入鼠抗人NRDG2T抗體,4 ℃過夜。次日用TBST洗3遍后,再分別加入HRP標(biāo)記的抗鼠二抗,室溫孵育2 h,ECL顯色。

    2 結(jié)果

    2.1 各種乳腺癌細(xì)胞系中NDRG2的表達(dá) 收取常規(guī)培養(yǎng)的乳腺癌細(xì)胞系,檢測mRNA水平及蛋白水平NDRG2的表達(dá),MDA-MB-453和MDA-MB-231細(xì)胞中NDRG2的表達(dá)較低(圖1)。

    圖1 各種乳腺癌細(xì)胞系中NDRG2的表達(dá)

    2.2 轉(zhuǎn)染pcDNA3.1-NRDG2后,MDA-MB-453細(xì)胞中NDRG2的表達(dá) MDA-MB-453細(xì)胞系轉(zhuǎn)染pcDNA3.1-NRDG2后,NRDG2的表達(dá)在mRNA水平及蛋白水平均升高(圖2)。

    圖2 轉(zhuǎn)染pcDNA3.1-NRDG2后,MDA-MB-453細(xì)胞中NDRG2的表達(dá)(1.Blank;2.pcDNA3.1;3.pcDNA3.1-NRDG2)

    2.3 高表達(dá)NRDG2后,細(xì)胞生長曲線 將MDA-MB-453細(xì)胞經(jīng)苔盼蘭染色,細(xì)胞計數(shù)并繪制生長曲線,高表達(dá)NRDG2的細(xì)胞生長速度明顯低于NRDG2低表達(dá)的細(xì)胞 (圖 3)。

    圖3 高表達(dá)NRDG2后,細(xì)胞生長曲線(1.Blank;2.pcDNA3.1;3.pcDNA3.1-NRDG2)

    3 討論

    本實驗檢測了不同惡性程度的乳腺癌細(xì)胞系,發(fā)現(xiàn)NRDG2表達(dá)水平與細(xì)胞的惡性程度有一定關(guān)系。另外,通過脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法在MDA-MB-453細(xì)胞系中高表達(dá)NRDG2,發(fā)現(xiàn)細(xì)胞的生長明顯減慢。該實驗提示NRDG2在乳腺癌細(xì)胞系中各有不同,且NRDG2影響了乳腺癌細(xì)胞的生長。此實驗為針對NRDG2信號通路進(jìn)行乳腺癌的有效分子治療提供了可靠證據(jù)。

    [1] N.C.Popescu,D.B.Zimonjic.Chromosome and gene alterations in breast cancer as markers for diagnosis and prognosis as well as pathogenetic targets for therapy[J].Am.J.Med.Genet,2002,115(3):142-149.

    [2] C.M.Perou,T.Sorlie,M.B.Eisen,et al.Molecular portraits of human breast tumours[J].Nature,2000,406(6797):747-752.

    [3] F.Lerebours,R.Lidereau.Molecular alterations in sporadic breast cancer[J].Crit.Rev.Oncol.Hematol,2002,44(2):121-141.

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