丹參素冰片酯乳劑中丹參素冰片酯和冰片的含量測定＊

左正龍，惠民權(quán)，申旭霽，孫宇宏，楊凌鑒，鄭曉暉

(1.西北大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院，陜西 西安 710069; 2.西安力邦制藥有限公司，陜西 西安 710075)

丹參素冰片酯[β－(3，4－二羥基苯基)－α－羥基丙酸冰片酯，DBZ]是根據(jù)拼合原理及中藥方劑理論中君使對藥的傳統(tǒng)觀念，選取中藥藥對丹參、冰片中活性藥效結(jié)構(gòu)單元拼合而成的全新先導(dǎo)化合物[1]。該化合物已獲國家發(fā)明專利(ZL200610042787.3)[2]，并提交PCT國際專利申請資料(公開號為PCT/CN2007/0011550)。藥理研究表明[2]，丹參素冰片酯具有明顯的抗腦缺血作用，可作為治療腦血管疾病的化學(xué)新藥來進(jìn)一步研發(fā)。該藥的脂肪乳乳劑具有藥物穩(wěn)定性好、生物利用度高、血管刺激性小的優(yōu)點(diǎn)[3]。丹參素冰片酯包括兩個光學(xué)異構(gòu)體，丹參素冰片酯乳劑處方為丹參素冰片酯(1%)、大豆油(10%)、油酸(0.06%)、卵磷脂(1.2%)、甘油(2.25%)、乙二胺四乙酸(0.005%)。冰片是丹參素冰片酯分解后的殘留物，且具有一定的毒副作用[4]，故其檢測作為一項(xiàng)重要指標(biāo)，對于保證丹參素冰片酯乳劑的穩(wěn)定性和安全性具有重要意義。

1 儀器和試藥

Agilent 1100型系列高效液相色譜系統(tǒng)，包括四元梯度泵，自動進(jìn)樣器，柱溫箱和DAD二極管陣列檢測器(美國Agilent公司);Agilent 6890 N氣相色譜儀(FID檢測器，美國Agilent公司);Sartorius BP 221s型電子天平(美國Sartorius公司);KQ5200DE型數(shù)控超聲清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)。丹參素冰片酯乳劑樣品(西安力邦制藥公司，批號為20100901);丹參素冰片酯對照品(西北大學(xué)中草藥現(xiàn)代化研究及工程中心，色譜檢測純度為98%);天然冰片對照品(中國藥品生物制品檢定所，批號為111688－200501);色譜純甲醇(美國Fisher公司)，水為純凈水，其余試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

2.1.1 丹參素冰片酯(高效液相色譜法)

色譜柱:Agilent TC －C18柱(250 mm ×4.6 mm，5 μm);流動相:甲醇－0.2%甲酸水(65∶35);檢測波長:280 nm;流速:0.7 mL/min;柱溫:25 ℃ ;進(jìn)樣量:20 μL。在擬訂色譜條件下，丹參素冰片酯與其他組分色譜峰均可基線分離，且分離度大于1.5;丹參素冰片酯的理論板數(shù)為9 342。色譜圖見圖1。

2.1.2 冰片(氣相色譜法)

色譜柱:HP －1 毛細(xì)管柱(30.0 m ×0.32 mm ×0.25 μm);檢測器:FID;載氣:氦氣;進(jìn)樣口溫度:260℃;檢測器溫度:260℃;進(jìn)樣量:1 μL;程序升溫:80℃保持22 min后，以3.0℃ /min速率升溫至130℃，保持16 min。在擬訂色譜條件下，冰片與其他組分色譜峰均可基線分離，且分離度大于1.5;冰片的理論板數(shù)為110754。色譜圖見圖2。

2.2 溶液制備

精密稱取丹參素冰片酯對照品0.010 3 g，天然冰片對照品0.010 2 g，分別置10 mL容量瓶中，用甲醇超聲溶解，稀釋至刻度，搖勻作為對照品溶液(丹參素冰片酯1.03 g/L，冰片1.02 g/L)，4℃儲存?zhèn)溆?。精密量取樣? mL，加甲醇定容至10 mL，超聲破乳5 min，配置成母液;精密吸取母液0.5 mL，加甲醇定容至10 mL，超聲1 min，使溶液澄清，配制成供試品溶液。精密量取空白乳劑1 mL，同法配制成陰性供對照品溶液。

2.3 方法學(xué)考察

圖1 高效液相色譜圖

圖2 氣相色譜圖

線性關(guān)系考察:精密吸取2.2項(xiàng)下對照品溶液適量，將其配成丹參素冰片酯質(zhì)量濃度為 0.01，0.025，0.05，0.10，0.25，0.50，1.00 g/L，冰片質(zhì)量濃度為 0.001，0.002，0.005，0.010，0.020，0.050 g/L的系列對照品溶液。按擬訂的色譜條件測定，以質(zhì)量濃度 C對峰面積 A作線性回歸，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，線性回歸方程丹參素冰片酯為 A=9 595 C+10.5，R2=0.999(n=7);冰片為 A=6 909 C －0.217，R2=0.999(n=7)。結(jié)果表明，丹參素冰片酯和冰片的質(zhì)量濃度線性范圍是0.01～1.00 g/L和0.001～0.050 g/L。

精密度試驗(yàn):分別取丹參素冰片酯對照品溶液(0.10 g/L)和冰片對照品溶液(0.010 g/L)，按上述色譜條件重復(fù)進(jìn)樣6次。結(jié)果丹參素冰片酯和冰片峰面積的 RSD分別為0.96%和4.3%(n=6)，表明儀器進(jìn)樣精密度良好。

穩(wěn)定性試驗(yàn):取丹參素冰片酯對照品溶液(0.10 g/L)和冰片對照品溶液 (0.010 g/L)，室溫放置 0，2，4，7，10，14，24 h，分別按擬訂的色譜條件進(jìn)樣測定。結(jié)果丹參素冰片酯和冰片峰面積的RSD分別為1.4%和5.4%(n=7)，表明對照品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

重復(fù)性試驗(yàn):取丹參素冰片酯樣品5份，依法制備供試品溶液并進(jìn)行測定。結(jié)果丹參素冰片酯峰面積的 RSD為0.9%(n=5)，冰片始終未檢出，表明方法重復(fù)性良好。

加樣回收試驗(yàn):取空白乳劑1 mL，分別加入丹參素冰片酯對照品溶液(10 g/L)和冰片對照品溶液(1.00 g/L)1 mL，按供試品溶液制備方法處理，分別在擬訂的色譜條件下，連續(xù)進(jìn)樣5次，計(jì)算回收率。結(jié)果見表1。

表1 丹參素冰片酯和冰片加樣回收試驗(yàn)結(jié)果(n=5)

2.4 樣品含量測定

在擬訂的色譜條件下，取3批樣品，依法制備供試品溶液，連續(xù)進(jìn)樣3次，記錄其峰面積，根據(jù)丹素冰片酯和冰片的標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算其含量。結(jié)果3批樣品中丹素冰片酯含量為4.75 g/L，冰片未檢出。

3 討論

本方法簡便，精密度、重復(fù)性均好，回收率亦符合要求，可作為檢測丹素冰片酯乳劑中丹素冰片酯和冰片含量的方法使用。

對高效液相色譜條件的分析中，在245，280，310 nm波長下，分別以不同比例的甲醇－0.2%甲酸水為流動相測定，根據(jù)丹素冰片酯峰的保留時(shí)間和響應(yīng)值，最后確定檢測波長為280 nm，流動相為甲醇－0.2%甲酸水(65∶35)。

[1]張群正，董 巖，南葉飛，等.β－(3，4－二羥基苯基)－α－羥基丙酸異丙酯/冰片酯合成研究[J].有機(jī)化學(xué)，2009，29(9):1 466－1 469.

[2]鄭曉暉，張群正，王世祥，等.β－(3，4－二羥基苯基)－α－羥基丙酸冰片酯、其合成方法和用途:CN:1868998[P].2006－11－29.

[3]高 潔.丙泊酚脂肪乳的制備工藝及質(zhì)量控制研究[D].武漢:華中科技大學(xué)，2008.

[4]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(一部)[M].北京:化學(xué)工業(yè)出版社，2005:40.