紫芝在力竭大鼠抗運動性疲勞和抗組織損傷中的作用

祝自新

紫芝在力竭大鼠抗運動性疲勞和抗組織損傷中的作用

祝自新

目的：探討補充紫芝多糖粉對雄性SD大鼠力竭運動所導致的運動表現(xiàn)、能量代謝及組織損傷的影響。方法：將40只SD大鼠隨機分為控制組（C）、力竭組（E）、力竭低劑量紫芝組（EL）、力竭中劑量紫芝組（EM）及力竭高劑量紫芝組（EH），每組8只。力竭給藥組大鼠分別以文獻常用劑量為100mg／kg、200mg／kg、500mg／kg劑量空腹紫芝多糖溶液灌胃，控制組和力竭對照組大鼠服用等劑量生理鹽水，服用30天后，將控制組大鼠直接處死，4個力竭組做跑步運動至力竭后處死，采集其血液、肌肉及肝臟樣本，分別測定血漿中葡萄糖（GLU）、乳酸（LAC）及血尿素氮（BUN）濃度，血漿中天門冬胺酸轉(zhuǎn)胺酶（AST）、丙胺酸轉(zhuǎn)胺酶（ALT）、肌酸激酶（CK）、乳酸脫氫酶（LDH）活性，測定體重、跑步時間（力竭時間）、肝糖原和肌糖原含量。結(jié)果：能量代謝方面，與C組相較，E組的肌糖原含量、血糖濃度顯著降低、血尿素氮濃度顯著增加（P＜0.05）；與E組相較，EM組血糖濃度及肌糖原含量顯著降低，而EH組肌糖原含量顯著降低（P＜0.05），其余數(shù)據(jù)均無顯著差異。跑步時間方面，EL組、EH組較E組顯著延長（P＜0.05），且EH組較EL組顯著延長（P＜0.05），而EM組只有增加的趨勢。組織損傷方面，E組血漿AST、ALT、CK及LDH活性顯著高于C組（P＜0.05）。與E組相較，EL、EM及EH組的AST、ALT、CK及LDH活性皆無顯著差異。結(jié)論：補充紫芝多糖粉可以顯著增強大鼠運動表現(xiàn)和抗運動性疲勞的作用，能一定程度減輕心肌、骨骼肌、肝臟損傷；另外，補充高劑量（500mg／kg·d）紫芝多糖粉對抗運動性疲勞作用效果最好，說明在一定范圍內(nèi)存在著量—效關(guān)系。

紫芝；抗運動疲勞；抗組織損傷；鼠；動物實驗

靈芝作為藥物已具有悠久的歷史，特別是作為扶正固本的藥物，在中國具有廣泛的保健作用和悠久的使用歷史。早在《神農(nóng)本草經(jīng)》時，就把靈芝列為上品，因而獲得“仙草”、“還魂草”和“瑞草”的稱謂，并根據(jù)靈芝類的形態(tài)和顏色將其分為赤芝、黑芝、青芝、白芝、黃芝、紫芝6種。紫芝是靈芝的特有種類，又名“中國靈芝”，是中國分布的90多種靈芝中被中國藥典（2005年）收錄的兩種藥用靈芝之一，分析其重要性可與靈芝相提并論［3，7］。據(jù)《本草綱目》中記載：紫芝一名木芝，氣味甘、溫，無毒；主治耳聾，利關(guān)節(jié)，保神、益精氣，堅筋骨，好顏色，久服，輕身不老延年［1］。目前，國內(nèi)、外對靈芝的研究較多的是赤芝，而對紫芝的研究較少，一個重要原因是紫芝的資源貧乏［11］?，F(xiàn)代醫(yī)學通過研究證實，紫芝醇提物具有保肝解毒、抗炎鎮(zhèn)痛和救治毒菇中毒作用［23］。楊國紅（2008）等研究發(fā)現(xiàn)，紫芝發(fā)酵液的胞內(nèi)水提醇沉物中可溶于水的部分具有最佳的抗腫瘤效果［11］。鄭林用（2007）將18種靈芝菌株子實體水煎液對小鼠進行負重游泳時間的影響性比較分析，得出紫芝具有明顯的增強機體運動耐力的效應［16］。運動性疲勞是人體在運動過程中一次強有力的負荷或持續(xù)運動負荷后，靠應力集中的運動器官（關(guān)節(jié)、韌帶、骨骼、肌肉）和與之密切相關(guān)的臟器的協(xié)調(diào)功能下降、能量不足等所引起的一系列生理性、功能性的變化。它導致運動器官功能下降，感覺不適，能量缺乏和代謝產(chǎn)物的堆積等現(xiàn)象［10］。如果疲勞沒有得到及時的恢復而使疲勞累積將導致疲勞過度，從而會嚴重影響運動成績，對身體的健康也會造成不良影響。目前，國內(nèi)、外關(guān)于紫芝對于力竭運動后產(chǎn)生的氧化壓力及疲勞現(xiàn)象影響的研究報到較少，故本研究通過力竭運動造成氧化壓力的模式，以探討紫芝補充對于SD大白鼠力竭運動表現(xiàn)及力竭運動后抗組織的影響。

1 實驗對象與方法

1.1 實驗對象

1.1.1 實驗材料

實驗材料為紫芝多糖粉，江西大茅山制藥有限責任公司。

1.1.2 實驗動物

實驗雄性健康Sprague-Dawley（SD）大鼠由中南大學湘雅二醫(yī)院動物實驗室提供，8周齡，體重270±30g；共40只SD大鼠分籠飼養(yǎng)，大鼠飼養(yǎng)溫度在23℃～27℃之間，進食及飲水符合實驗動物標準。

1.1.3 實驗藥品

1）手術(shù)用藥：乙醚；NaCl；2）飼料成分：Laboratory rodent diet 5001（Ralston Purina Co.，St.Louis，MO）；3）試劑盒：latrozyme TA-LQ（RM163-K）試劑盒（日本Iatron Laboratorise Inc.公司）、CK活性測定試劑盒（CK335）、Beckman Synchron CX7試劑盒（美國Randox Laboratories公司），血糖檢測試劑盒（GLU）、乳酸測定試劑盒、尿素氮測定試劑盒、肌糖原測試盒、肝糖原測試盒（南京建成生物工程研究所）。

1.1.4 主要儀器

722可見分光光度計（上海悅豐儀器儀表有限公司）、動物跑臺（上海欣軟信息科技有限公司）、熒光顯微鏡（上海蔡康光學儀器廠）、恒溫循環(huán)水槽（南京恒星實驗設(shè)備有限公司）、高速冷凍離心機（德國SIGMA公司）、去離子水設(shè)備（上?；菰此幚碓O(shè)備有限公司）、制冰機（廣州鴻達機械有限公司）、－80℃冷凍柜（東莞市正臺測試儀器有限公司）、60℃烘箱（蘇州德瑞普烘箱制造有限公司），及微量移液器、電子天平等。

1.2 研究方法

1.2.1 動物分組

將40只SD大鼠隨機分為控制組（C）、力竭組（E）、力竭低劑量（100mg／kg·d）紫芝組（EL）、力竭中劑量（200 mg／kg·d）紫芝組（EM）及力竭高劑量（500mg／kg·d）紫芝組（EH），每組8只。

1.2.2 實驗動物飼養(yǎng)

實驗動物飼養(yǎng)在不銹鋼網(wǎng)內(nèi)，各組每日給予20～25克Lab 5001作為飼料，自由飲水，利用一臺電子天平每日記錄大鼠攝食情況，每周記錄體重1次，實驗為期30天。

2 結(jié)果

2.1 不同時間各組SD大鼠的體重比較

經(jīng)重復測量方差分析顯示，組間、組內(nèi)及交互作用均有統(tǒng)計學意義（F值分別為21.25、25.32和8.25，P均＜0.05）進一步分析顯示，在組內(nèi)比較方面，5個組在實驗后20天和30天體重均比初始體重有所上升（P均＜0.05），且各組試驗后30天與20天體重比較也均有上升（P均＜0.05）；在組間比較方面，初始體重各組間無統(tǒng)計學差異（P＝0.313），實驗后20天，力竭運動組體重明顯低于控制組（P＜0.001），也明顯低于紫芝中劑量組和高劑量組（P均＜0.05），但與紫芝低劑量組差異則無統(tǒng)計學意義（P＝0.140）；實驗后30天，力竭運動組體重同樣明顯低于控制組（P＜0.001），也明顯低于紫芝3個劑量組（P均＜0.05），紫芝低劑量組與中高劑量組差異顯著（P均＜0.05）。

表2 本研究不同時間各組SD大鼠的體重比較一覽表（±SD）Table 2 Comparison of the Weights of SD Rats of Various Groups in Different Time

表2 本研究不同時間各組SD大鼠的體重比較一覽表（±SD）Table 2 Comparison of the Weights of SD Rats of Various Groups in Different Time

注：＊表示與初始體重比較P＜0.05，＃表示與20（因為作者在解剖前10天即20天進行力竭適應實驗）天后體重比較P＜0.05，□表示與力竭運動組比較P＜0.05，△表示與紫芝低劑量組比較P＜0.05。

n 初始體重（g）20天后體重（g）30天后體重（g）控制組 8 230±7 325±18＊□375±23＊?！趿哌\動組 8 235±11 266±15＊301±14＊＃紫芝低劑量組8 237±10 275±17＊331±18＊＃□紫芝中劑量組8 231±8 289±15＊□364±21＊?！酢髯现ジ邉┝拷M8 239±12 301±19＊□△359±19＊＃□△

2.2 各組SD大鼠的跑步時間比較

圖1顯示，各組SD大鼠的跑步時間隨著紫芝劑量的增加而上升，經(jīng)單因素方差分析顯示，組間差別有統(tǒng)計學意義（F＝20.71，P＜0.001）。兩兩比較的結(jié)果顯示，力竭運動組運動時間小于其余各組（P均＜0.05），紫芝低劑量組運動時間小于中高劑量組（P均＜0.05），紫芝中劑量組小于高劑量組（P＜0.001）。

圖1 本研究各組SD大鼠的跑步時間比較柱狀圖Figure 1. Comparison of the Running Time of SD Rats of Various Groups

2.3 補充紫芝對力竭運動后各組SD大鼠能量代謝的影響

表2顯示，在血糖濃度影響方面，40min力竭運動組和紫芝低、中、高劑量組與控制組比較，血糖濃度均有所下降（P均＜0.05）；紫芝中劑量組、高劑量組與力竭運動組和紫芝低劑量組比較，血糖濃度也顯著降低（P均＜0.05），其他各組兩兩差別均無統(tǒng)計學意義（P均＞0.05）；在乳酸濃度影響方面，力竭運動組和紫芝低、中、高劑量組與控制組比較均有所上升（P均＜0.05）；力竭運動組與紫芝低、中、高劑量組相比差異則無統(tǒng)計學意義；在血中尿素氮濃度影響方面，力竭運動組和紫芝低、中、高劑量組與控制組比較，血尿素氮濃度均有所上升（P均＜0.05）；紫芝低劑量組、中劑量組、高劑量組與力竭運動組比較，血尿素氮也顯著降低（P均＜0.05），紫芝低劑量組與高劑量組比較，差別也有統(tǒng)計學意義（P＝0.023），其他各組兩兩差別均無統(tǒng)計學意義（P均＞0.05）；在肌糖原濃度影響方面，力竭運動組和紫芝低、中、高劑量組與控制組比較，濃度均有所降低（P均＜0.05），其他各組兩兩差別均無統(tǒng)計學意義（P均＞0.05）；在肝糖原方面，控制組與力竭運動組比較差異無統(tǒng)計學意義（P＝0.205），而紫芝各劑量組與上述兩組比較則有顯著降低（P均＜0.05）。

2.4 補充紫芝對力竭運動后各組SD大鼠肝臟、心肌及肌肉的的影響

表4顯示，與控制組比較，力竭運動組AST、ALT、CK及LDH活性均顯著增加（P＜0.05），提示力竭運動會造成肝臟、心肌，及肌肉損傷；而與力竭運動組組比較，低、中、高劑量組血漿中AST、ALT、CK及LDH活性差別均無統(tǒng)計學意義（P均＞0.05），這表明雖然紫芝各劑量組運動時間延長，但肝臟、心肌，及肌肉的損傷并沒有顯著變化，提示補充對這些組織可能有一些保護作用。

3 討論

過度訓練是以體重減輕、運動能力下降、易疲勞為主要特征的一種運動性疾病，嚴重威脅運動員的運動生涯和身體健康。本實驗通過為期30天負荷訓練過程，運動組大鼠體重與同期對照組相比顯著下降，這與其他學者過度訓練動物模型結(jié)果一致［2，9，13］。

體重是能夠反映機體肌肉的發(fā)育程度的重要指標之一。通過體重的變化情況能反應出機體的機能狀態(tài)情況，對于衡量機體的生長發(fā)育有著重要意義［6］。本研究發(fā)現(xiàn)，各組SD鼠間的初始體重差異并不顯著，但力竭運動組末期體重顯著低于控制組（P＜0.05），且兩組SD鼠的每日平均攝食量并無顯著差異。造成E組SD鼠末期體重低于C組末期體重的原因，可能是由于為了讓SD鼠適應動物跑臺的運作，解剖前每天在動物跑臺上以20m／min的速度，跑15～20min，由此造成E組末期體重的下降。EM組SD鼠的體重顯著高于E組（P＜0.05），且EM組每日平均的攝食量也顯著高于E組，推測導致E組末期體重較高的原因在于EM組平均攝食量較高。此外，本研究EH組紫芝的補充量為最高，每日補充量約為1.22kcal，而體重EH體重比EM的體重低，且EH組體重的增加與C組和E組比較，均未達到顯著水平（P＞0.05），因此，推測紫芝的補充量不是造成大鼠體重變化的主因，這與李野的研究結(jié)果基本一致［5］。

表3 本研究補充紫芝對40min力竭運動后各組SD大鼠能量代謝影響一覽表（X±SD）Table 3 Influence of Ganoderma Sinensis Supplement on the Energy Metabolism of SD Rats of Various Groups after 40Minutes of Exhaustive Exercise

表4 本研究補充紫芝對SD大鼠40min力竭運動后血漿中AST、ALT、CK及LDH活性的影響一覽表（±SD）Table 4 Influence of Ganoderma Sinensis Supplement on the Activity of AST，ALT，CK and LDH in the Plasma of SD Rats after 40Minutes of Exhaustive Exercise

表4 本研究補充紫芝對SD大鼠40min力竭運動后血漿中AST、ALT、CK及LDH活性的影響一覽表（±SD）Table 4 Influence of Ganoderma Sinensis Supplement on the Activity of AST，ALT，CK and LDH in the Plasma of SD Rats after 40Minutes of Exhaustive Exercise

注：＊表示與控制組比較P＜0.05，▲表示與力竭運動組比較P＜0.05。

在人體、動物體內(nèi)，肝臟和肌肉內(nèi)的糖原儲量尤其豐富［4］。糖原的大量消耗會導致運動性疲勞的發(fā)生［15］。在能量代謝方面，本研究結(jié)果顯示，力竭運動會造成血糖濃度降低、血尿素氮濃度增加以及肌糖原含量降低等，這表明，力竭運動會造成SD大鼠體內(nèi)能量消耗及代謝產(chǎn)物增加。這可能是由于運動過程中，需要消耗大量能量來維持身體的活動，機體會通過利用肝糖分解產(chǎn)生葡萄糖，再通過三羧酸循環(huán)將葡萄糖進一步代謝分解成丙酮酸，丙酮酸經(jīng)線粒體的檸檬酸循環(huán)進行有氧代謝，產(chǎn)生大量的能量提供給身體活動所需，故會造成SD大鼠肌糖原含量及血糖濃度顯著降低（P＜0.05）。此外，蛋白質(zhì)分解可以產(chǎn)生能量，蛋白質(zhì)通過脫胺作用產(chǎn)生丙酮酸，同時，會產(chǎn)生大量的氨，因此，造成力竭運動組SD鼠尿素氮濃度顯著增加（P＜0.05），這與Meneguello等人研究結(jié)果一致［20］。

Holloszy等研究發(fā)現(xiàn)，減緩運動過程中肌糖原與血糖的消耗，以及減少乳酸的生產(chǎn)量，可以延長激烈運動的表現(xiàn)。維持血糖恒定及減少乳酸生產(chǎn)，也可以提升運動能力［17］。Ikeuchi等研究指出，造成身體的力竭與肝糖耗盡有關(guān)，如果能節(jié)省肝糖的利用，就可以增進運動表現(xiàn)［18］。本實驗研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，補充低、中、高劑量紫芝組與未補充紫芝組比較，在力竭運動后大鼠肌糖原含量、血漿中血糖、血乳酸及血尿素氮濃度大體上無明顯變化；但在運動表現(xiàn)方面，補充低劑量紫芝及高劑量紫芝組可顯著增加大鼠的跑步時間（P＜0.05），補充中劑量紫芝組則有增加趨勢，且在更長時間的運動狀況下，其相關(guān)指標，如血乳酸及血尿素氮濃度并無明顯變化。

本實驗中，雖然補充低劑量紫芝組SD大鼠，力竭運動后其肌糖原含量、血糖、血乳酸及血尿素氮濃度與未補充紫芝組均無明顯差異，但其跑步時間仍然顯著增加。因此，推測在本研究中補充低劑量紫芝組，紫芝主要是通過維持肌糖原含量及血糖恒定，以延長SD大鼠的跑步時間。另外，補充紫芝高劑量組與低劑量組比較發(fā)現(xiàn)，EH組的跑步時間顯著高于EL組，肌糖原含量較EL組同樣增加10%（P＞0.05）。因此，推測本研究中補充高劑量紫芝，除了可維持血糖恒定外，也可能通過其他方式增強延長運動時間的效果，這與柳麗等人研究結(jié)果一致［8］。

在組織損傷方面，有研究者證實，靈芝對動物肝損傷有良好的治療和保護作用［12，14］。Ji LL等研究顯示，運動過程中，可能會造成組織中嗜中性白血球侵潤的現(xiàn)象，吸引單核和巨噬細胞的聚集，進而產(chǎn)生大量自由基及分泌細胞激素，造成組織氧化與發(fā)炎現(xiàn)象［19］。Seachrist等研究表明，一旦組織受到損傷，會造成組織細胞破裂，而且會釋放出原本存在于細胞內(nèi)的物質(zhì)，如AST、ALT、CK及LDH等，使得這些物質(zhì)能在血中被檢測，從而作為組織損傷的指標［21］。本研究顯示，力竭運動會造成血漿中AST、ALT、CK及LDH活性顯著增加（P＜0.05），這表明，力竭運動會造成心肌、肝臟以及肌肉的損傷。Yang等研究發(fā)現(xiàn)，以四氯化碳誘導肝臟損傷，會使得血漿中AST及ALT活性顯著上升，而補充靈芝后，可以降低血漿中AST及ALT的活性［22］。本實驗結(jié)果發(fā)現(xiàn)，補充低、中和高劑量的紫芝組，與未補充紫芝組比較，力竭運動后SD大鼠血漿中AST、ALT、CK及LDH活性并無顯著差異（P＞0.05）。這表明，補充紫芝對保護組織損傷作用并不明顯，推測其可能原因在于力竭運動對組織造成的損傷相對于四氯化碳誘導的肝臟損傷情況較輕，因此，不容易看出紫芝的保護效果，

通過對上述結(jié)果的討論分析發(fā)現(xiàn)，補充低劑量的紫芝，可維持力竭運動后SD大鼠血糖濃度的恒定和肌糖原含量的穩(wěn)定，而高劑量紫芝能加強上述效用進而達到延長跑步時間的效果。但補充中劑量的紫芝，各項結(jié)果并不完全一致，這方面還需更進一步的實驗來分析，進而了解紫芝的最適補充劑量。

4 結(jié)論

1.補充一定劑量的紫芝多糖粉對減緩力竭跑步運動造成體重下降的效果一般，由此推測，紫芝的補充量不是造成大鼠體重變化的主因。

2.補充一定劑量的紫芝多糖粉能顯著提高SD大鼠力竭跑步運動的時間，提升跑步運動表現(xiàn)，且在一定劑量范圍內(nèi)存在顯著量效關(guān)系。

3.補充一定劑量的紫芝多糖粉對SD大鼠能量代謝提高效果一般，提示紫芝多糖粉的抗運動性疲勞作用可能是由于紫芝多糖粉能維持肌糖原含量的穩(wěn)定實現(xiàn)的。

4.補充一定劑量的紫芝多糖粉對力竭運動后SD大鼠血漿中AST、ALT、CK及LDH活性變化并無顯著影響。這表明，補充紫芝對保護組織損傷作用并不明顯，提示提高力竭跑步運動大鼠的運動能力主要通過維持力竭運動后SD大鼠血糖濃度的恒定及肌糖原含量的穩(wěn)定實現(xiàn)的。

5.補充高劑量紫芝多糖粉對SD大鼠運動表現(xiàn)和抗運動性疲勞作用效果最好，說明在補充紫芝多糖粉對力竭運動SD大鼠運動表現(xiàn)和抗運動性疲勞效果上在一定范圍內(nèi)存在著量一效關(guān)系。

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The Ganoderma Sinensis Effect in the Exhaustive Rat of Resistant Sport Fatigue and Resistant Tissue Damage

ZHU Zi-xin

Objective：This paper mainly discusses replenishing the Ganoderma sinensis polysaccharide powder to the influence of exercise performance，energy metabolism and the tissue damage caused by the male SD rat exhaustive exercise.Method：40male SD rats are divided into 5 groups at random and there are 8rats in each group of which respectively are control group，exhaustive contrast group，exhaustive low dosage group，exhaustive medium dosage group and exhaustive high dosage group.Exhaustive dose group rat respectively feed in 100mg／kg·d，200mg／kg·d and 500mg／kg·d dosage of Ganoderma sinensis polysaccharide powder in limosis，and feed the control group and exhaustive contrast group rat the isodose normal saline.After feeding for 30days，kill the control group rats directly，and kill the four exhaustive groups which do the running sports until exhausted and then collect the blood，muscle and liver sample，and respectively measure the GLU（glucose），LAC（lactic acid）in the blood plasma，and the BUN（blood urea nitrogen）concentration as well as the AST（aspartate aminotransferase），ALT（alanine aminotransferase），CK（creatine kinase）and LDH（lactic dehydrogenase）activity.And measure the weight，running time（exhaustive time），hepatic glycogen and muscle glycogen content.Result：in the energy metabolism aspect，compared with group C，the group E of the muscle glycogen content and blood sugar concentration reduced conspicuously，and the BUN（blood urea nitrogen）concentration increased conspicuously（P＜0.05）；compared with group E，group EM of the blood sugar concentration and muscle glycogen content reduced conspicuously，and the group EH of the muscle glycogen reduced conspicuously（P＜0.05），there was no any conspicuous difference about the other data.In the running aspect，compared with group E，group EL and group EH lengthen conspicuously（P＜0.05），what’s more，group EH conspicuously lengthen more than group EL，while group EM only appeared the trend of increasing.In the tissue damage aspect，the group E blood plasma AST，ALT，CKand LDH activity are conspicuously higher than group C（P＜0.05）.Compared with group E，the AST，ALT，CK and LDH activity in the group EL，group EM and group EH did not have any conspicuous difference.Conclusion：replenish the Ganoderma sinensis polysaccharide powder can conspicuously enhance the rat exercise performance and effect of anti-mobility fatigue，which can reduce the cardiac muscle，skeletal muscle and liver damage in certain degree；to replenish high dosage（500mg／kg·d）Ganoderma sinensis polysaccharide powder in addition can take best effect on the anti-mobility fatigue，which indicates that in certain range，it exist the energy efficiency relationship.

Ganoderma sinensis；resistant sport fatigue；resistant tissue damage

G804.5

A

2012-05-23；

2012-08-26

中央高?；究蒲袠I(yè)務(wù)費資助項目（2011RW026）。

祝自新（1969-），男，湖北孝感人，副教授，碩士，主要研究方向為體育教育訓練學及運動醫(yī)學，E-mail：computer2013＠yeah.net。

華中農(nóng)業(yè)大學體育部，湖北武漢430070 Huazhong Agricultural University，Wuhan 430070，China.

1.2.3 灌胃動物模型

運動給藥組以灌食方式補充紫芝多糖粉，每日根據(jù)前一周稱量其體重計算各組所需紫芝多糖粉，溶入生理鹽水，使最后體積為2ml，搖晃均勻后進行灌食。低劑量組服用按體重100mg／kg·d，中劑量組按體重200mg／kg· d，高劑量組按體重500mg／kg·d為標準，根據(jù)大鼠標準溶液灌胃體積分別制成10mg／mL、20mg／mL和50mg／mL 3個不同濃度的溶液，早晚各服1次，服用30天，安靜組和運動對照組服用等劑量的生理鹽水。

1.2.4 一次性力竭跑步運動模型的建立

所有力竭運動組（E、EL、EM及EH）大鼠各隨即抽取4只，在解剖前10天，每日在動物跑臺上以20m／min的速率，跑15～20min，使其適應動物跑臺的運作，適應階段繼續(xù)紫芝多糖溶液灌胃，使藥物發(fā)揮作用。解剖當天，所有力竭運動組大鼠在動物跑臺上，進行1次激烈力竭運動，將動物跑臺的坡度固定在10°，根據(jù)Bedford等人的漸進式力竭運動方式使力竭運動組的大鼠運動至力竭為止［6］。在大鼠動物跑臺后端設(shè)電擊區(qū)，若大鼠不愿跑步，就會掉入電擊區(qū)，受到電擊的大鼠若仍有力氣，將會再奮力往前跑，而力竭的標準則是以大鼠經(jīng)過5次電擊仍無法起身往前跑，且抓起大鼠時無掙扎動作，即可判定大鼠為力竭狀態(tài)。記錄各組大鼠力竭時間，力竭的大鼠立即用乙醚麻醉后解剖。剩余各組的大鼠分別在跑臺上運動40min即用乙醚麻醉后解剖。

1.2.5 解剖方法

運動40min后處死的大鼠用乙醚麻醉后，開腹從腹大動脈抽取血液，血液抽取完畢后，以生理鹽水灌流肝臟后剪下，再以生理鹽水清洗后擦干稱重；并剪下大鼠的腓腸肌，以生理鹽水清洗后，擦干稱重。肝臟及肌肉組織各取部分分裝后以液態(tài)氮急速冷凍后保存。

1.2.6 取材

1.血液樣本采集及前處理：由腹大動脈抽取血液，在3 500rpm，4℃下離心15min，以分離血漿及血球。取出血漿分裝于含有氟化鈉微量試管中，在30min內(nèi)分析肌酸激酶活性及乳酸濃度，且在24h內(nèi)分析血糖濃度。將血漿樣本儲存在－80℃冰箱中，以待后續(xù)分析。

表1 本研究血液樣本分析測定項目一覽表
Table 1 Blood Sample Analytic Determination Project

測定項目血漿能量代謝BG LA BUN組織損傷AST ALT LDH CK

2.肝臟樣本采集及前處理：剪下的肝臟再以生理鹽水清洗后，擦干稱重，之后剪下數(shù)份0.04～0.08g肝臟樣本，急速冷凍后保存在液態(tài)氮中，以進行肝糖原含量分析，剩下的肝臟組織進行分裝后，保存在－80℃冰箱中。

3.肌肉樣本采集及前處理：以生理鹽水清洗后，擦干稱重，隨后剪下數(shù)份0.04～0.08g肌肉樣本，急速冷凍后保存在液態(tài)氮中，以進行肌糖原含量分析，剩下的肌肉組織進行分裝后，保存在－80℃冰箱。

1.2.7 分析項目

為探討力竭性運動與紫芝補充對大鼠能量代謝、運動表現(xiàn)及組織損傷的影響，本實驗分析：1）能量代謝：測定血漿中葡萄糖、乳酸及血尿素氮濃度，以及分析肌糖原與肝糖原含量；2）運動表現(xiàn)：測定力竭運動組各組跑步時間；3）組織損傷：血漿方面分析心肌及肝臟損傷指標，包括天門冬胺酸轉(zhuǎn)胺酶（AST）、丙胺酸轉(zhuǎn)胺酶（ALT）活性；肌肉損傷指標則分析血漿中肌酸激酶（CK）、乳酸脫氫酶（LDH）活性。

1.2.8 測定項目及方法

1.血漿中葡萄糖濃度測定：采用北京康思潤業(yè)生物技術(shù)有限公司，血糖檢測試劑盒（GLU）進行測定；

2.血漿中乳酸濃度測定：采用北京金豪制藥有限公司，乳酸測定試劑盒（液體試劑）—LAC（酶顯色法）LA9230；

3.血漿中尿素氮濃度的測定：采用北京金豪制藥有限公司，尿素氮測定試劑盒（液體試劑）—BUN（Urease-GLDH紫外法），BU9213。

4.肌糖原與肝糖原含量的測定：稱取肌肉或肝臟組織0.04～0.08g，放入裝500μl（1mol／l）的試管中，在75℃下水浴30min，水浴過程中不斷震蕩，使樣本完全溶解。取100μl溶解液室溫依次加入pH＝4.8醋酸鈉溶液（0.3 mol／L）250μl和pH＝4.8淀粉酶（10mg／ml）250μl后搖勻，在室溫下靜置12h后，再加入1NNaOH后搖勻。利用分光光度計，在波長505nm下測定樣本溶解液的吸收光值，根據(jù)葡萄糖濃度－吸收光值標準曲線計算樣本的葡萄糖濃度，從而推得肝糖原含量（μmol／g）。

5.組織損傷：測定心臟及肝臟損傷指標－血漿AST和ALT活性的測定。采用日本Iatron Laboratorise Inc.公司的latrozyme TA-LQ（RM163-K）試劑盒測定的AST和ALT的活性。肌肉損傷指標－血漿CK和LDH活性的測定。采用美國Randox Laboratories公司生產(chǎn)的CK活性測定試劑盒（CK335）測定血漿CK的活性，采用Beckman Synchron CX7試劑盒測定LDH活性。

1.3 數(shù)據(jù)統(tǒng)計學分析

數(shù)據(jù)采用SPSS 15.0統(tǒng)計軟件分析，所有定量資料先進行正態(tài)性檢驗，符合正態(tài)分布的定量資料以均數(shù)±標準差（±SD）表示，控制組與力竭運動組的比較采用獨立樣本t檢驗（方差齊時）或t′檢驗（方差不齊時），力竭運動組與紫芝的3個劑量組間的比較采用單因素方差分析，兩兩比較采用S-N-K法，體重在不同組間和不同時間的變化采用重復測量資料的方差分析，檢驗水準設(shè)定為0.05即P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

1000-677X（2012）09-0075-06