急性白血病患者血清及腦脊液基質(zhì)細(xì)胞衍生因子－1α的表達(dá)水平及意義

王樹輝 (貴州省人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，貴州 貴陽(yáng) 550002)

基質(zhì)細(xì)胞衍生因子1(SDF-1)具有細(xì)胞生長(zhǎng)因子和趨化因子活性，通過細(xì)胞因子的網(wǎng)絡(luò)系統(tǒng)在免疫和炎癥反應(yīng)、血管和神經(jīng)發(fā)育、造血的調(diào)控、腫瘤的轉(zhuǎn)歸等多種生理、病理過程中發(fā)揮重要的作用〔1〕。多種血液系統(tǒng)惡性腫瘤的細(xì)胞株中存在SDF-1/CXCR4的過表達(dá)，而關(guān)于SDF-1的高表達(dá)是否可以作為急性白血病特別是中樞神經(jīng)系統(tǒng)白血病(CNSL)相關(guān)標(biāo)志物的研究還比較少。有研究表明，SDF-1與其受體CXCR4相互作用，可促進(jìn)急性白血病細(xì)胞的趨化增殖及遷移，提高急性白血病細(xì)胞對(duì)化療藥物的耐受〔2，3〕。本實(shí)驗(yàn)通過檢驗(yàn)急性白血病患者血清及腦脊液中SDF-1α的表達(dá)水平，擬從不同角度尋找可能有效的治療急性白血病患者的策略，為臨床用藥提供可靠的理論基礎(chǔ)。

1 資料與方法

1.1 資料

1.1.1 一般資料 納入貴州省人民醫(yī)院2010年3月至2012年6月診斷的急性白血病患者36例，其中男20例，女16例;年齡48～80歲，平均62歲。同時(shí)納入同期普外科患者14例作為對(duì)照組，年齡46～78歲，平均60歲。

1.1.2 診斷標(biāo)準(zhǔn) 按照WHO髓系和淋巴腫瘤分類法(2001)MIMC分型的診斷標(biāo)準(zhǔn)和《血液病診斷及療效標(biāo)準(zhǔn)》確診〔4〕。其中急性淋巴細(xì)胞性白血病(ALL)10例(L1型1例，L2型3例，T-ALL型2例，B-ALL型5例);急性髓系白血病(AML)26例(M2型3例，M3型4例，M4型8例，M5型11例)，其中CNSL 19例，非中樞神經(jīng)系統(tǒng)白血病(NCNSL)17例。

1.1.3 化療方案 ALL患者采用VDLP或CODP方案誘導(dǎo)緩解;AML患者采用DA或MA方案誘導(dǎo)緩解，其中M3型采用全反式維A酸、亞砷酸誘導(dǎo)緩解治療，CNSL患者采用甲氨蝶呤、阿糖胞苷、地塞米松常規(guī)鞘內(nèi)化療。經(jīng)過標(biāo)準(zhǔn)化療方案治療2個(gè)療程后有26例急性白血病患者完全緩解，其中ALL 6例，AML 20例;未緩解患者10例，其中ALL 4例，AML 6例;CNSL組患者5例腦脊液幼稚細(xì)胞轉(zhuǎn)為陰性。

1.2 方法

1.2.1 標(biāo)本采集 急性白血病患者分別在治療前及標(biāo)準(zhǔn)化療方案治療2個(gè)療程的第6天清晨采集空腹外周靜脈血2 ml，20 min后2 500 r/min離心20 min，收集上清液后置于EP管中，于－70℃冰箱保存?zhèn)溆?同時(shí)無菌管收集患者腦脊液1 ml保存?zhèn)溆?。?duì)照組采集標(biāo)本處理方法亦同上。

1.2.2 ELISA方法檢測(cè)患者血液及腦脊液中SDF-1α的表達(dá)實(shí)驗(yàn)完全按照人SDF-1α ELISA試劑盒的操作步驟進(jìn)行，最后用酶標(biāo)儀450 nm波長(zhǎng)下檢測(cè)各孔的A值。然后根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品的A值及對(duì)應(yīng)的濃度計(jì)算標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程，再根據(jù)樣品的A值利用回歸方程計(jì)算出對(duì)應(yīng)的樣品濃度。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 采用SPSS12.0軟件分析計(jì)算，計(jì)量數(shù)據(jù)以±s表示，各均數(shù)比較采用t檢驗(yàn)。

2 結(jié)果

2.1 治療前后患者血清及腦脊液中SDF-1α濃度比較 急性白血病組患者血清及腦脊液中SDF-1α濃度均明顯高于對(duì)照組，且ALL組患者血清及腦脊液中SDF-1α濃度明顯高于AML組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P＜0.01)?；?個(gè)療程后，不論是ALL患者還是AML患者，血清及腦脊液中SDF-1α濃度均明顯低于治療前，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P＜0.01)。見表1。

表1 標(biāo)準(zhǔn)方案化療2個(gè)療程前后各組血清及腦脊液中SDF-1α濃度比較(ng/L，±s)

表1 標(biāo)準(zhǔn)方案化療2個(gè)療程前后各組血清及腦脊液中SDF-1α濃度比較(ng/L，±s)

與化療前比較:1)P＜0.01;與對(duì)照組比較:2)P＜0.01;與AML組比較:3)P＜0.01

組別 n 血清 腦脊液ALL組 化療前 10 2 690.35±202.172)3)3 032.88±326.792)3)化療后 10 2 034.53±154.651) 2 258.91±206.841)AML組 化療前 26 2 424.06±311.032) 2 784.20±426.012)化療后 26 1 569.29±256.441) 1 934.37±306.631)對(duì)照組14 1 252.36±257.13 1 360.06±328.98

2.2 急性白血病患者化療后未緩解與完全緩解患者血清及腦脊液中SDF-1α濃度比較 治療后未緩解組患者血清及腦脊液中SDF-1α濃度明顯高于完全緩解組患者，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P＜0.01)。見表2。

2.3 化療前及標(biāo)準(zhǔn)方案化療2個(gè)療程后CNSL組患者與NCNSL組患者血清及腦脊液中SDF-1α濃度比較 無論是化療前還是經(jīng)標(biāo)準(zhǔn)方案化療2個(gè)療程后，CNSL組患者血清及腦脊液中SDF-1α濃度明顯高于NCNSL組患者，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P＜0.01)。見表3。

表2 急性白血病患者化療后未緩解組與完全緩解組血清及腦脊液中SDF-1α濃度比較(ng/L，±s)

表2 急性白血病患者化療后未緩解組與完全緩解組血清及腦脊液中SDF-1α濃度比較(ng/L，±s)

與完全緩解組比較:1)P＜0.01

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表3 化療前及標(biāo)準(zhǔn)方案化療2個(gè)療程后CNSL及NCNSL患者血清及腦脊液中SDF-1α濃度比較(ng/L，±s)

表3 化療前及標(biāo)準(zhǔn)方案化療2個(gè)療程后CNSL及NCNSL患者血清及腦脊液中SDF-1α濃度比較(ng/L，±s)

與CNSL組比較:1)P＜0.01;與化療前比較:2)P＜0.01

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3 討論

SDF-1具有多種特殊化學(xué)作用，定位于10號(hào)染色體長(zhǎng)臂，它的特異性受體CXCR4為G蛋白耦聯(lián)的七次跨膜受體，定位于人第4號(hào)染色體，可在正常造血干/祖細(xì)胞、其他多種組織細(xì)胞以及包括血液系統(tǒng)腫瘤在內(nèi)的多種腫瘤細(xì)胞上表達(dá)。SDF-1/CXCR4表達(dá)情況與白血病的發(fā)生、發(fā)展有著直接的關(guān)系。SDF-1/CXCR4表達(dá)水平增高使白血病細(xì)胞增殖失控、分化障礙、凋亡受阻，從而促進(jìn)了白血病的進(jìn)一步發(fā)生、發(fā)展〔5〕，因而檢測(cè)SDF-1/CXCR4表達(dá)狀況為評(píng)估判斷急性白血病病人預(yù)后及輔助監(jiān)測(cè)病情提供了幫助。CXCR4的配體主要表達(dá)于淋巴結(jié)、肺、肝及骨髓中，新近研究表明，CXCR4是目前ALL患者細(xì)胞表面表達(dá)最強(qiáng)的因子受體之一，其配體SDF-1對(duì)其有極強(qiáng)的誘導(dǎo)趨化作用，表達(dá)SDF-1的骨髓成纖維細(xì)胞(BMF)層可趨化B-ALL細(xì)胞選擇性停留，且趨化能力與CXCR4的表達(dá)呈正相關(guān)，但是該作用可被β1整合素抑制劑和抗CXCR4抗體抑制〔6，7〕。由此證實(shí)SDF-1是B-ALL細(xì)胞的強(qiáng)力趨化因子，對(duì)其有雙向調(diào)節(jié)作用，參與了ALL細(xì)胞在淋巴結(jié)和骨髓等器官的浸潤(rùn)過程。多種血液系統(tǒng)惡性腫瘤的細(xì)胞株中存在SDF-1/CXCR4的過表達(dá)，而關(guān)于SDF-1的高表達(dá)是否可以作為急性白血病特別是CNSL相關(guān)標(biāo)志物的研究還比較少。曾東風(fēng)等〔8〕用ELISA法檢測(cè)了急性白血病患者外周血中SDF-1的含量，結(jié)果明顯高于正常對(duì)照組，尤以ALL為甚，而且發(fā)現(xiàn)外周血中SDF-1的表達(dá)水平與急性白血病患者的病情變化有一定的相關(guān)性。本實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)急性白血病患者在化療前及化療2個(gè)療程后血清及腦脊液中SDF-1α呈高濃度表達(dá)，而且在不同類型急性白血病患者之間存在差異。

在今后急性白血病患者的臨床治療上，一個(gè)重要方向應(yīng)是應(yīng)用新的方法或藥物鞏固與強(qiáng)化治療方案，以便更多病例延長(zhǎng)緩解期，當(dāng)然這也可能需要應(yīng)用更強(qiáng)烈的化療、更高劑量的放療，以及生長(zhǎng)因子注射、干細(xì)胞移植等組織工程技術(shù)支持〔9〕。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，ALL及AML治療效果相當(dāng)，但AML治療前的血清及腦脊液SDF-1α水平明顯高于ALL，兩組年齡差異是否相關(guān)還有待于進(jìn)一步研究。因此，SDF-1α可以作為白血病治療的新的基因靶點(diǎn)，抑制其在白血病細(xì)胞的表達(dá)，將在逆轉(zhuǎn)白血病細(xì)胞耐藥、增加白血病細(xì)胞對(duì)化療藥物敏感性方面起重要作用。

1 Voermans C，van Heese WP，de Jong I，et al.Migratory behavior of leukemic cells from acute myeloid leukemia patients〔J〕.Eukemia，2002;16(4):649-50.

2 Guang LG，Boskey AL，Zhu W.Regulatory role of stromal cell-derived factor-1 in bone morphogenetic protein-2-induced chondrogenic differentiation in vitro〔J〕.Int J Biochem Cell Biol，2012;44(11):1825-33.

3 Kalinkovich A，Tavor S，Avigdor A.Functional CXCR4-expressing microparticles and SDF-1 correlate with circulating acute myelogenous leukemia cells〔J〕.Cancer Res，2006;66(2):11013-20.

4 張 曦，王占聚，崔為發(fā)，等.急性白血病患者血清及腦脊液中SDF-1α的檢測(cè)及其臨床意義〔J〕.當(dāng)代醫(yī)學(xué)，2011;17(08):48-9.

5 Tavor S，Petit I.Can inhibition of the SDF-1/CXCR4 axis eradicate acute leukemia〔J〕?Semin Cancer Biol，2010;20(3):178-85.

6 Parameswaran R，Yu M，Lim M，et al.Combination of drug therapy in acute lymphoblastic leukemia with a CXCR4 antagonist〔J〕.Leukemia，2011;25(8):1314-23.

7 Spiegel A，Kollet O，Peled A，et al.Unique SDF-l-induced activation of human precursor-B ALL cells as a result of altered CXCR4 expression and signaling〔J〕.Blood，2004;103(8):2900-7.

8 曾東風(fēng)，孔佩艷，陳幸華，等.SDF-l及其受體CXCR4在急性白血病與淋巴瘤表達(dá)的初步研究〔J〕.中國(guó)實(shí)驗(yàn)血液學(xué)雜志，2005;13(1):274-7.

9 許蓮蓉，馮江芳，胥顯民，等.健康人外周血樹突狀細(xì)胞的體外誘導(dǎo)及其功能分析〔J〕.白血病·淋巴瘤，2011;20(8):482-5.