國產(chǎn)HIV抗體尿液診斷試劑盒(膠體金法)性能研究

劉俊華，任蘊(yùn)慧，劉麗麗，王光陽，趙文利

(1.漯河市疾病預(yù)防控制中心 河南漯河 462000;2.漯河市第三人民醫(yī)院 河南漯河 462000)

人免疫缺陷病毒(Human immunodeficiency virus，HIV)是引起人類獲得性免疫缺陷綜合征(Acquired immunodeficiency syndrome，AIDS)的病原體。經(jīng)過20多年的發(fā)展，HIV診斷技術(shù)特別是免疫診斷技術(shù)的發(fā)展呈現(xiàn)兩個(gè)特點(diǎn):①縮短窗口期，已從間接酶聯(lián)免疫法的第一代檢測技術(shù)大約3個(gè)月發(fā)展到夾心法抗體與P24抗原同檢的第四代檢測技術(shù);②取材的方便化和非侵入性，標(biāo)本由單一血清向全血、唾液以及尿液等其他體液標(biāo)本拓展［1，2］。雖然有些HIV感染者的尿液也能培養(yǎng)出HIV病毒，但非侵入性取材的尿液不是HIV的主要傳染源。尿液標(biāo)本在HIV檢測中的諸多優(yōu)勢，使HIV抗體尿液診斷技術(shù)越來越受到重視，而膠體金技術(shù)與此項(xiàng)技術(shù)的結(jié)合，更能發(fā)揮尿液快檢在HIV篩查中的作用。本文研究了國產(chǎn)HIV抗體尿液診斷試劑盒(膠體金法)的分析性能，報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 標(biāo)本 漯河市疾病預(yù)防控制中心HIV確證實(shí)驗(yàn)室經(jīng)免疫印跡(Western blot，WB)確認(rèn)的HIV抗體陽性患者，HIV抗體陽性患者做CD4T淋巴細(xì)胞時(shí)，同時(shí)接一份尿液標(biāo)本，共保存HIV抗體陽性患者尿液394例。漯河市第三人民醫(yī)院門診尿常規(guī)標(biāo)本1 562例(其中HCG陽性尿樣120例，血紅蛋白尿16例)，衛(wèi)生部臨檢中心HIV國家質(zhì)控血清盤(LOT20081202)。

1.2 試劑 國產(chǎn)HIV抗體尿液診斷試劑盒(膠體金法)(批號20090819)，進(jìn)口Calypte公司的AwareHIVU紙條(批號20090301)。

1.3 方法 取10例陽性患者尿液標(biāo)本混合，用抗-HIV陰性混合尿液進(jìn)行系列稀釋，比較兩種產(chǎn)品檢出限的差異;取國家血清參考品，用抗-HIV陰性混合尿液進(jìn)行系列稀釋，考核兩種產(chǎn)品的性能;用394例HIV抗體陽性尿液標(biāo)本和1 562例常規(guī)門診標(biāo)本，比較兩種產(chǎn)品的靈敏度和特異性，結(jié)果不一致的門診標(biāo)本經(jīng)漯河市疾病預(yù)防控制中心HIV確證實(shí)驗(yàn)室用WB法驗(yàn)證。嚴(yán)格按產(chǎn)品說明書操作。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件，兩組率比較采用卡方檢驗(yàn)，檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05。

2 結(jié)果

2.1 國產(chǎn)試劑與AwareHIV-U試紙條的結(jié)果 最低檢出限相當(dāng)，混合尿液標(biāo)本系列稀釋靈敏度檢測比較結(jié)果，見表1。

表1 國產(chǎn)試劑與AwareHIV-U試紙條檢測尿液HIV抗體檢出限對照表

2.2 國產(chǎn)試劑國家質(zhì)控血清盤中靈敏度標(biāo)本 S1稀釋1 000倍為陰性(S1為陰性基質(zhì)液)、S2、S3稀釋5 000倍為陽性;18份I型陽性參考品除P15(1∶100檢為陰性，Aware也為陰性)其它均1∶5 000檢出陽性(1份為1∶5 000稀釋，其它均達(dá)1∶10 000以上稀釋);2份Ⅱ型陽性參考品1∶50均檢為陽性，1∶100均檢為陰性，AwareHIV-U紙條測Ⅱ型稀釋標(biāo)本均為陰性，陰性血清參考品20份稀釋1 000倍檢測均為陰性。Aware-HIV-U紙條檢測P15為陰性。

2.3 臨床性能評估 國產(chǎn)試劑和AwareHIV-U試紙條檢測HIV抗體陽性尿液標(biāo)本完全一致，各發(fā)生5例漏檢。檢測門診尿常規(guī)標(biāo)本，國產(chǎn)試劑發(fā)生2例假陽性，而AwareHIV-U發(fā)生1例假陽性。國產(chǎn)試劑靈敏度和特異性分別是 98.73%(390/395)和 99.87%(1 559/1 561)，而AwareHIV-U試紙條靈敏度和特異性分別為 98.73%(390/395)和 99.94%(1 560/1 561)，經(jīng)卡方檢驗(yàn)兩者靈敏度差異和特異度差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，見表2。

表2 國產(chǎn)試劑與AwareHIV-U試紙條臨床性能比較表

3 討論

尿液標(biāo)本以及其取材的特點(diǎn)，使其在HIV臨床篩查中應(yīng)用越來越多。但以往國內(nèi)關(guān)于尿液HIV抗體檢測研究的對象主要是 HIV-1 抗體［4，5］，只是最近幾年開始涉及HIV-2抗體［6］，而且這些研究對象都是進(jìn)口試劑。隨著體外診斷技術(shù)的快速發(fā)展，國內(nèi)體外診斷試劑廠家也開始進(jìn)行尿液HIV抗體檢測研究［7］，但尿液HIV1/2抗體膠體金法檢測尚未見報(bào)道，而尿液HIV1/2抗體膠體金法因標(biāo)本和技術(shù)特點(diǎn)更適合臨床篩查HIV抗體。

本研究的國產(chǎn)試劑和AwareHIV-U試紙條均采用膠體金技術(shù)檢測尿液標(biāo)本中的HIV-1抗體和HIV-2抗體，結(jié)果表明國產(chǎn)HIV抗體尿液診斷試劑盒(膠體金法)最低檢出限與AwareHIV-U試紙條相當(dāng)，在國家質(zhì)控血清盤HIV-2抗體檢測方面優(yōu)于AwareHIV-U試紙條。兩種試劑檢測臨床標(biāo)本的靈敏度和特異性雖經(jīng)統(tǒng)計(jì)分析無顯著性差異，國產(chǎn)試劑靈敏度明顯優(yōu)于AwareHIV-U試紙條，特別對于HIV-2抗體。但國產(chǎn)試劑的特異性比AwareHIV-U試紙條低，而且兩種試劑都有5例HIV抗體陽性漏檢，說明膠體金技術(shù)檢測尿液HIV抗體的靈敏度還有待提高。兩種產(chǎn)品發(fā)生的假陽性都是高血紅蛋白尿，血紅蛋白影響辣根酶過氧化物酶活性，從而引起以其為標(biāo)記酶的ELISA檢測技術(shù)的假陽性［7］，但血紅蛋白是否與膠體金技術(shù)檢測尿液HIV抗體產(chǎn)生假陽性相關(guān)需要研究?；谶@樣的結(jié)果，值得對這個(gè)產(chǎn)品進(jìn)一步研究，提高靈敏度，以適合臨床篩查需要。

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