蓮芝消炎膠囊中脫水穿心蓮內(nèi)酯質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)的研究

王奇志，黃輝球，黃志剛，梁旭霞，馮 煦*

1江蘇省中國(guó)科學(xué)院植物研究所(南京中山植物園)江蘇省藥用植物研究開(kāi)發(fā)中心，南京 210014;2廣東惠州九惠藥業(yè)有限公司，南岸路199號(hào)，惠州 516007

蓮芝消炎膠囊系穿心蓮醇浸膏與山芝麻浸膏組成的復(fù)方制劑，具有清熱、解毒、消炎功效。用于腸胃炎、支氣管炎、扁桃體炎、咽喉炎、肺炎等疾患。為目前暢銷的一種非處方藥。有關(guān)其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中含量測(cè)定采用加堿水解酸回滴定，以每1 mL氫氧化鈉滴定液(0.1 moL/L)，相當(dāng)于 35.05 mg的穿心蓮內(nèi)酯(C20H30O5)計(jì)算，應(yīng)為標(biāo)準(zhǔn)量的 90.0% ～110.0%［1］，由于加入指示劑的色澤標(biāo)準(zhǔn)存在人為因素，難以掌握，重現(xiàn)性差，且測(cè)定對(duì)象僅為總內(nèi)酯。無(wú)脫水穿心蓮內(nèi)酯含量的標(biāo)示，與藥典要求以脫水穿心蓮內(nèi)酯含量評(píng)價(jià)穿心蓮制劑質(zhì)量不一致。雖然有關(guān)穿心蓮膠囊中脫水穿心蓮內(nèi)酯已有報(bào)道［2，3］，但對(duì)蓮芝膠囊的相關(guān)研究則很少。為此，我們從原料質(zhì)量、總內(nèi)酯、提取工藝、測(cè)定方法和有效成分質(zhì)控諸多方面對(duì)該產(chǎn)品進(jìn)行了系統(tǒng)研究，本文報(bào)道蓮芝消炎膠囊中脫水穿心蓮內(nèi)酯質(zhì)控的探討。

1 儀器、藥品和試劑

1.1 儀器

高效液相色譜儀LC-10ATVP配SPD-10AVP檢測(cè)器;UV2100紫外掃描儀;色譜柱YMP pack ODS-A A303 S-5 μm，250 ×4.6 mm。

1.2 試劑

純凈水、甲醇(色譜純)、乙醇(分析純)。

1.3 樣品

蓮芝消炎膠囊浸膏，蓮芝消炎膠囊產(chǎn)品、山芝麻浸膏(廣惠州九惠制藥有限公司提供)、脫水穿心蓮內(nèi)酯、穿心蓮內(nèi)酯(中國(guó)藥品生物制品檢定所，供含量測(cè)定用）。

2 色譜條件

流動(dòng)相為甲醇:水(6∶4)，體積流量1 mL/min，靈敏度0.005 AuFS，檢測(cè)波長(zhǎng)254 nm，柱溫30℃。

圖3結(jié)果表示在保留時(shí)間t=14～17 min間，山芝麻浸膏此處無(wú)出峰信號(hào)，測(cè)定脫水穿心蓮內(nèi)酯時(shí)不存在干擾。

3 溶液的配制

3.1 標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制

為適應(yīng)制劑中可能存在所含脫水穿心蓮內(nèi)酯不同質(zhì)量濃度的要求，本實(shí)驗(yàn)制備了高、中、低三種不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)液。高濃度取5.26 mg，中濃度3.96 mg，低濃度取2.69 mg分別置于25 mL量瓶中，加甲醇溶解并定容，三個(gè)質(zhì)量濃度分別為:0.2104 mg/mL、0.1584 mg/mL 和 0.1076 mg/mL。

3.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備

取上述配制的標(biāo)準(zhǔn)液用量分別為2，6，10，14，18(μL)，在相同條件下測(cè)得面積積分值。結(jié)果脫水穿心蓮內(nèi)酯量在0.2～4 μg間呈線性關(guān)系，回歸方程y和r值分別為:

3.3 精密度的測(cè)定

精密吸取相同體積的標(biāo)準(zhǔn)液20 μL，進(jìn)樣6次，分別測(cè)得面積積分值見(jiàn)表1，RSD%值表明精密度良好。

表1 兩次精密度測(cè)定結(jié)果Table 1 Two results of precision

3.4 回收率的測(cè)定

表2 加樣回收率試驗(yàn)Table 2 Adding recovery test(n=12)

3.5 日內(nèi)穩(wěn)定性和日間穩(wěn)定性的考察

3.5.1 日內(nèi)穩(wěn)定性

取批號(hào)051003樣品的配制液(配制見(jiàn)后)定時(shí)進(jìn)樣10 μL，測(cè)定內(nèi)含脫水穿心蓮內(nèi)酯峰面積見(jiàn)表2。

3.5.2 日間穩(wěn)定性

取批號(hào)050901樣品的配制液，進(jìn)樣10 μL，隔日一次，共三次，測(cè)得脫水穿心蓮內(nèi)酯峰面積見(jiàn)表3，其日內(nèi)和日間的RSD分別為0.99%和0.56%，說(shuō)明膠囊中脫水穿心蓮內(nèi)酯日內(nèi)和日間穩(wěn)定性良好。

表3 樣品穩(wěn)定性的測(cè)定Table 3 Determination of the stability of the sample

4 蓮芝消炎膠囊中脫水穿心蓮內(nèi)酯的含量測(cè)定

4.1 樣品液制備

根據(jù)正交試驗(yàn)優(yōu)選蓮芝消炎膠囊穿心蓮浸膏的制備工藝得出的結(jié)果，穿心蓮中穿心蓮內(nèi)酯類成分以稀醇的溶出率為最高，考慮到HPLC常用甲醇為流動(dòng)相，所以本試驗(yàn)用甲醇為提取溶劑，并結(jié)合超聲處理可在短時(shí)間內(nèi)達(dá)到提取完全的效果，因此本法為精密稱取樣品0.1 g，置25 mL量瓶中加甲醇20 mL，搖勻，放置30 min后經(jīng)超聲20 min，再室溫放置30 min，加甲醇定容，用0.22 μ 膜濾過(guò)，取續(xù)濾液5 mL置于10 mL量瓶中，加甲醇定容備用。此液進(jìn)樣20 μL 或 10 μL。

4.2 樣品液中脫水穿心蓮內(nèi)酯的含量測(cè)定

本測(cè)定采用外標(biāo)法，色譜條件同前，在樣品液測(cè)試的同時(shí)進(jìn)行了標(biāo)準(zhǔn)品質(zhì)量與峰面積的分析，求得質(zhì)量與峰面積的比值，分別為2.104 μg/7644279.7;1.055 μg/3045742.5(n=3，RSD ＜1%)。從 2004-2006三年間任選多批次，抽樣分析結(jié)果見(jiàn)表4，除一批次(20051003)每0.5 g蓮芝膠囊中脫水穿心蓮內(nèi)酯＜10 mg外大部分都高于10 mg，因此建議蓮芝消炎膠囊中脫水穿心蓮內(nèi)酯的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)擬控制在每0.5 g的膠囊中含脫水穿心蓮內(nèi)酯≥10 mg，可保證蓮芝消炎膠囊的良好療效。

表4 蓮芝消炎膠囊中脫水穿心蓮內(nèi)酯的含量Table 4 dehydroandrographolide content of Lian Zhi Xiao Yan Capsule

5 討論

本實(shí)驗(yàn)建立的RP-HPLC法簡(jiǎn)便、快捷、正確，完全適用于復(fù)方制劑蓮芝消炎膠囊中脫水穿心蓮內(nèi)酯的含量測(cè)定。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明蓮芝消炎膠囊中脫水穿心蓮內(nèi)酯的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)是每粒蓮芝消炎膠囊(0.5 g)中脫水穿心蓮內(nèi)酯的含量控制在≥10 mg為宜。

1 Guangdong Institute for Drug Control.Lian Zhi Xiao Yan Capsule.WS3-B-2403-97

2 Yu XT(俞小陶)，Xu H(許紅).Determination of dehydroandrographolide content in andrographolide capsules by RP-HPLC.Acad J of Guangdong Coll of Pharm(廣東藥學(xué)院學(xué)報(bào))，2003，19:17-19.

3 Chen BL.Determination of dehydroandrographolide content in andrographolide capsules by HPLC.Anhui Med and Pharm J(安徽醫(yī)藥)2005，9:591-592.