藏藥婆婆納藥材薄層鑒別方法學(xué)研究

王云紅，張小梅，林 芳，胡 榮，嚴(yán)倩茹，楊榮平*

1重慶市中藥研究院重慶市中藥資源學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，重慶400065;2 成都中醫(yī)藥大學(xué)，成都611137

婆婆納是常用的藏藥之一，藏藥名冬那端赤，為玄參科婆婆納屬植物長果婆婆納Veronica ciliata Fiseh 的干燥全草。具有清熱，愈瘡，生肌，止血的功效，主要用于治療瘡癤，創(chuàng)傷，炎癥。婆婆納被收載在1995 年版《藏藥部頒》中，但由于婆婆納的標(biāo)準(zhǔn)僅有性狀描述，沒有鑒別，不能很好的控制婆婆納的質(zhì)量。為能有效控制婆婆納藥材的質(zhì)量，本研究首次對(duì)婆婆納的薄層鑒別進(jìn)行了系統(tǒng)研究，建立了婆婆納對(duì)照藥材薄層鑒別的方法，為婆婆納藥材質(zhì)量控制提供科學(xué)依據(jù)。

近年來，婆婆納的研究較少，其有效成分尚不清楚，特征成分不明確，選擇單一成分的對(duì)照品進(jìn)行薄層鑒別沒有依據(jù)。因而，本研究通過建立對(duì)照藥材的方法對(duì)婆婆納藥材進(jìn)行薄層定性研究。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

BP121S 電子天平(萬分之一，北京賽多利斯科學(xué)儀器有限公司);BUG25-12 超聲波清洗機(jī)(220W，50KHZ，必能信超聲(上海)有限公司);數(shù)顯恒溫水浴鍋(上海梅香儀器有限公司);高效硅膠G 薄層板，規(guī)格:100 ×100 mm、100 ×200 mm，厚度:0.20～0.25 mm，批號(hào):20101102，青島海洋化工分廠;薄層色譜展開缸(雙槽，規(guī)格:100 ×200 mm、200 ×200 mm，上海信誼儀器廠)。

1.2 試藥及藥材

所用試劑均為分析純(重慶川東(集團(tuán))有限公司化學(xué)試劑廠);

婆婆納對(duì)照藥材為西藏自治區(qū)食品藥品檢驗(yàn)所提供的基地生產(chǎn)對(duì)口藥材;

婆婆納藥材樣品為西藏自治區(qū)食品藥品檢驗(yàn)所提供的不同批次的樣品。

2 方法與結(jié)果

2.1 婆婆納對(duì)照藥材薄層條件的建立

2.1.1 提取溶媒的考察

取婆婆納對(duì)照藥材3 g(5 份)，精密稱定，置于錐形瓶中，分別加乙醚、乙酸乙酯、三氯甲烷、95%乙醇、甲醇40 mL，超聲處理30 min，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)酉鄳?yīng)的提取液2 mL 使溶解，作為供試品溶液。照薄層色譜法(《中國藥典》2010 年版一部附錄IV B)試驗(yàn)，分別吸取供試品溶液5 μL，點(diǎn)于同一硅膠G 薄層板上，以環(huán)己烷-丙酮(7 ︰3)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，在110℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，并置于日光下檢視。結(jié)果表明:以甲醇為溶媒提取的供試品斑點(diǎn)較少，反映藥材的信息量少;95%乙醇為溶媒提取的樣品斑點(diǎn)較乙醚等提取樣品的斑點(diǎn)少，且95%乙醇提取的樣品粘度較大，點(diǎn)樣過程有困難;乙醚、乙酸乙酯、三氯甲烷為溶媒提取的樣品斑點(diǎn)信息相似，但乙酸乙酯相對(duì)其他兩種有機(jī)試劑毒性較小。且乙酸乙酯提取的樣品展開后斑點(diǎn)較多，斑點(diǎn)清晰，分離度好，且乙酸乙酯毒性較小，擬采用乙酸乙酯作為提取溶媒。

2.1.2 顯色劑的考察

取2.1.1 項(xiàng)下的5 個(gè)供試品溶液，照薄層色譜法試驗(yàn)，分別吸取供試品溶液5 μL，點(diǎn)于同一硅膠G 薄層板上，以環(huán)己烷-丙酮(7 ︰3)為展開劑，三張薄層板同時(shí)展開，取出，晾干，分別噴以10%硫酸乙醇溶液、5%香草醛硫酸溶液、磷鉬酸溶液，在110 ℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，于日光下檢視，薄層色譜圖見圖1。結(jié)果表明:在日光下檢視，10%硫酸乙醇溶液顯色后斑點(diǎn)較清晰，顏色鮮明;5%香草醛硫酸溶液顯色后斑點(diǎn)顏色雖然鮮明，但是顯示出的斑點(diǎn)較少;磷鉬酸溶液顯色后斑點(diǎn)雖然清晰，但是不能反映出斑點(diǎn)的顏色。因而，采用10%硫酸乙醇溶液為顯色劑。

圖1 婆婆納對(duì)照藥材薄層鑒別顯色劑的考察Fig.1 chromogenic reagents test of Veronica cciliata Fiseh

2.1.3 提取方法的考察

取婆婆納對(duì)照藥材3 g(2 份)，精密稱定，置于錐形瓶中，加乙酸乙酯40 mL，分別超聲處理30 分鐘和加熱回流處理30 分鐘，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)骷右宜嵋阴? mL 使溶解，作為供試品溶液。照薄層色譜法試驗(yàn)，取不同提取方法提取的供試品溶液5 μL，點(diǎn)于同一硅膠G 薄層板上，以環(huán)己烷-乙酸乙酯(7 ︰3)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，置110 ℃烘箱中顯色至斑點(diǎn)清晰，于日光下檢視。結(jié)果超聲和加熱回流兩種處理方法的結(jié)果差別不大。因此，選用操作簡便的超聲處理為供試品的提取方法。

2.1.4 提取時(shí)間的考察

取婆婆納對(duì)照藥材3 g，精密稱定，置于錐形瓶內(nèi)，加乙酸乙酯40 mL，分別超聲處理10、20、30、40 min，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)右宜嵋阴? mL 使溶解，作為供試品溶液。照薄層色譜法試驗(yàn)，取不同提取時(shí)間提取的供試品溶液5 μL，點(diǎn)于同一硅膠G 薄層板上，以環(huán)己烷-乙酸乙酯(7∶3)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，置110 ℃烘箱中顯色至斑點(diǎn)清晰，于日光下檢視。結(jié)果超聲處理30和40 min 的樣品斑點(diǎn)較超聲處理10 和20 min 的樣品斑點(diǎn)多，且較之更清晰。因而，選用超聲處理30 min 為樣品提取的時(shí)間。

2.1.5 展開劑選擇

對(duì)照藥材溶液的制備:取本品粉末3 g，精密稱定，置于錐形瓶內(nèi)，加乙酸乙酯40 mL，分別超聲處理30 min，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)右宜嵋阴? mL 使溶解，作為對(duì)照藥材溶液。照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取對(duì)照藥材溶液6 μL，點(diǎn)于硅膠G 板上，分別以(1)環(huán)己烷-丙酮(6∶4)，(2)環(huán)己烷-乙酸乙酯(7∶3)，為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，置110 ℃烘箱中加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，日光下檢視，結(jié)果:展開劑(1)(2)所展開的對(duì)照藥材色譜斑點(diǎn)分離度均較好，但展開劑(1)展開后的供試品分離效果較好，斑點(diǎn)清晰，顏色鮮艷，因而確定環(huán)己烷-丙酮(6∶4)為展開劑。

2.1.6 點(diǎn)樣量考察

吸取2.1.5 項(xiàng)下制備的對(duì)照藥材溶液各4、6、8、10、12 μL 分別點(diǎn)于同一硅膠G 薄層板上，以環(huán)己烷-丙酮(6 ∶4)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，結(jié)果:點(diǎn)樣量為6 μL 時(shí)斑點(diǎn)已清晰。因此，確定對(duì)照藥材溶液點(diǎn)樣量為6 μL。

2.1.7 方法耐用性實(shí)驗(yàn)

預(yù)平衡和預(yù)飽和方式的考察:照薄層色譜法，吸取2.1.5 項(xiàng)下制備的對(duì)照藥材溶液6 μL，點(diǎn)于硅膠G 薄層板上，以環(huán)己烷-丙酮(6∶4)為展開劑，不進(jìn)行預(yù)平衡和預(yù)飽和操作，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，置110 ℃烘箱中顯色至斑點(diǎn)清晰，于日光下檢視。結(jié)果未經(jīng)預(yù)平衡和預(yù)飽和操作得到的薄層色譜圖分離度較好，斑點(diǎn)清晰，無明顯的邊緣效應(yīng)。因此，本薄層鑒別不需預(yù)平衡和預(yù)飽和。

展開溫度和濕度的考察:照薄層色譜法，吸取上述已制備的對(duì)照藥材溶液6 μL，點(diǎn)于硅膠G 薄層板上，以環(huán)己烷-丙酮(6∶4)為展開劑，在濕度為77%時(shí)分別于20、40 ℃環(huán)境下及在溫度為20 ℃時(shí)分別于濕度為77%、32%環(huán)境下展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，置110 ℃烘箱中顯色至斑點(diǎn)清晰，于日光下檢視，結(jié)果，溫度、濕度對(duì)分離效果無顯著影響。因此認(rèn)為溫度和濕度對(duì)其沒有影響，在通常條件下操作即可。

展開距離的考察:照薄層色譜法，吸取上述已制備的對(duì)照藥材溶液6 μL，點(diǎn)于硅膠G 薄層板上，以環(huán)己烷-丙酮(6∶4)為展開劑，展開，展開距離分別為8 cm 和11 cm，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，置110 ℃烘箱中顯色至斑點(diǎn)清晰，于日光下檢視。結(jié)果:展開距離為8 cm 時(shí)對(duì)照藥材已能較好的分離，但展距為11 cm 時(shí)效果更好。因此，確定展距在11 cm 左右。

不同薄層板的考察:照薄層色譜法，吸取上述已制備的對(duì)照藥材溶液6 μL，分別點(diǎn)于預(yù)制硅膠G 薄層板(青島海洋化工廠分廠)和實(shí)驗(yàn)室自制硅膠G薄層板上，以環(huán)己烷-丙酮(6∶4)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，置110 ℃烘箱中顯色至斑點(diǎn)清晰，于日光下檢視。結(jié)果:青島海洋化工廠分廠生產(chǎn)的預(yù)制板和本實(shí)驗(yàn)自制的硅膠G 薄層板，對(duì)供試品溶液均能起到很好的分離效果，說明該鑒別方法的耐用性好，但相比之下，預(yù)制板分離效果更好。

2.1.8 對(duì)照藥材薄層色譜圖

分別吸取上述已制備的對(duì)照藥材溶液6 μL，點(diǎn)于同一硅膠G 薄層板上，按照擬定的薄層鑒別的方法，展開，晾干，檢視。薄層色譜圖見圖2。結(jié)果，婆婆納對(duì)照藥材可被分離出7 個(gè)清晰的斑點(diǎn)，做為特征斑點(diǎn)。

圖2 婆婆納對(duì)照藥材薄層色譜圖Fig.2 TLC of Veronica cciliata Fiseh

2.2 婆婆納藥材的薄層鑒別

2.2.1 婆婆納供試品溶液的制備

取本品粉末3 g，加乙酸乙酯40 mL，超聲處理30 分鐘，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)右宜嵋阴? mL 使溶解，作為供試品溶液。

2.2.2 婆婆納對(duì)照藥材的制備

取婆婆納對(duì)照藥材3 g，加乙酸乙酯40 mL，超聲處理30 min，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)右宜嵋阴? mL 使溶解，作為對(duì)照藥材溶液。

2.2.3 薄層色譜條件及結(jié)果

色譜條件:吸附劑:硅膠G 薄層板;展開劑:環(huán)己烷-丙酮(6∶4);顯色劑:10%硫酸乙醇溶液;顯色條件:110 ℃烘箱中加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，日光下檢視;點(diǎn)樣量:6 μL。

樣品薄層色譜圖:按照2.2.3(1)項(xiàng)下的色譜條件，將10 批樣品的供試品溶液及對(duì)照藥材溶液點(diǎn)于同一薄層板上，展開，晾干，顯色，薄層色譜圖見圖3。結(jié)果:10 批樣品在與對(duì)照藥材色譜特征斑點(diǎn)相應(yīng)的位置上均顯相同顏色的斑點(diǎn)。結(jié)果表明:建立的方法分離度高，重現(xiàn)性好，簡便，可用于婆婆納的質(zhì)量控制。

圖3 10 批婆婆納藥材薄層色譜圖Fig.3 TLC of Veronica cciliata Fiseh

3 討論

目前，對(duì)婆婆納的研究較少，其有效部位尚不明確，在以后的工作中將進(jìn)一步研究婆婆納的有效部位，為其質(zhì)量控制提供依據(jù)。本研究以對(duì)照藥材為對(duì)照，對(duì)照藥材主要優(yōu)點(diǎn)是斑點(diǎn)多，反應(yīng)的信息多。

藏藥現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)為《藏藥部頒》1995 年版，很多藥材和制劑，沒有“鑒別”項(xiàng)，或者“鑒別”項(xiàng)下沒有薄層鑒別，僅有理化鑒別或顯微鑒別，不能更好的控制的質(zhì)量。因而，呼吁有關(guān)部門應(yīng)重視民族藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的提高，使民族藥這一非物質(zhì)文化能得以長久流傳。

1 Chinese Pharmacopoeia.2010.

2 People's Republic of China Ministry of health pharmaceutical standards.1995.