草地早熟禾對腐霉枯萎病的抗性評價

任小巍， 袁慶華

（1.中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院北京畜牧獸醫(yī)研究所，北京 100193； 2.蘭州大學(xué)草地農(nóng)業(yè)科技學(xué)院，蘭州 730020）

草地早熟禾（Poa pratensis Linn.）是重要的多年生草坪草植物，適于生長在冷濕的氣候環(huán)境，以其綠期長、色澤翠綠、質(zhì)地優(yōu)美而著稱［1－3］，在我國的北方及中部地區(qū)種植非常廣泛。由于草地早熟禾具有冷季型草坪草的特性，在夏季高溫高濕的環(huán)境脅迫下，常造成病害的大面積發(fā)生［4］，其中，腐霉枯萎?。≒ythiumdisease，病原菌為 Pythium aphanidermatum）在高溫高濕條件下侵染速度極快，能在1～2d之內(nèi)毀壞大面積草坪，形成大片枯草禿斑，破壞相當(dāng)嚴(yán)重，是一種毀滅性病害［5－7］。

目前國內(nèi)學(xué)者對冷季型草坪草主要病害發(fā)生及其流行規(guī)律已有一些報道［8］，但對草地早熟禾品種間對腐霉枯萎病的抗性缺少系統(tǒng)的研究。根據(jù)董愛香等的研究［9］，不同品種草地早熟禾抗褐斑病病害能力存在很大的差異，因而了解品種間的抗病性差異，對于篩選抗病品種和防治病害的發(fā)生具有重要的指導(dǎo)意義。本研究在溫室條件下采用不同的接種方法，對來自國內(nèi)外的45個草地早熟禾品種進行了苗期抗病性評價，比較了不同品種對腐霉枯萎病的抗性，旨在為抗腐霉枯萎病草地早熟禾品種的選擇及病害防治提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 供試材料

供試草地早熟禾材料共計45份，由中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院北京畜牧獸醫(yī)研究所牧草種質(zhì)資源實驗室提供，品種名稱及來源見表1。

腐霉枯萎病病原菌瓜果腐霉（Pythium aphanider－matum）：從北京龍熙高爾夫球場發(fā)病草坪上采集并分離后經(jīng)過致病性測定獲得。

1.2 試驗方法

1.2.1 幼苗培養(yǎng)及接種

將待評價的草地早熟禾材料播種于直徑11cm×高9cm的花盆中，室內(nèi)溫度為25℃，每盆保留130株幼苗。試驗共分3組接種處理。

表1 45份草地早熟禾品種及來源

（1）傳統(tǒng)土壤接種法：將滅菌后的土壤與長滿菌絲的玉米沙培養(yǎng)基按土壤質(zhì)量：培養(yǎng)基直徑＝140g∶3cm的比例混合后裝盆，均勻撒種種苗。

（2）改進的土壤接種法：先將滅菌土壤裝盆后撒種育苗，同時在盆中央保留直徑為3cm的空白區(qū)域用于接種病菌，待播種后苗齡15d時進行接種，即將一直徑為2.5cm的菌餅埋入空地處。

（3）培育30d的草地早熟禾幼苗接種：與改進的土壤接種法基本相同，不同之處是選擇30d的幼苗進行接種。

上述3種接種試驗均設(shè)3次重復(fù)和未接種空白對照。接種在溫室中（30～37℃，RH 90%以上）進行。

1.2.2 抗病性評價

傳統(tǒng)土壤接種法試驗在幼苗出土后20d統(tǒng)計草地早熟禾各品種的發(fā)病率，改進的土壤接種法和培育30d的草地早熟禾幼苗接種法于接種后20d統(tǒng)計幼苗的發(fā)病率，計算公式如下：

根據(jù)發(fā)病率將45份草地早熟禾的抗病性劃分為4個等級，即：發(fā)病率＜20%為高抗，20%≤發(fā)病率＜25%為中抗，25%≤發(fā)病率＜30%為中感，發(fā)病率≥30%為高感。

根據(jù)發(fā)病率將45份材料劃分為高抗、中抗、中感、高感4類，只是為了對供試品種之間抗病性強弱做一個比較與分類。

2 結(jié)果與分析

從3種接種方法試驗的發(fā)病率統(tǒng)計結(jié)果中可以看出（表2），不同處理草地早熟禾品種間抗性均表現(xiàn)一定差異。采用傳統(tǒng)土壤接種法發(fā)病率變化范圍為19.0%～39.2%，相對抗病性強的品種有：‘公園’、‘午夜’、‘納蘇’等，其中以‘公園’的發(fā)病率最低只有19.0%，該品種抗病性最強。易感病的品種主要有：‘莫桑斯克’、‘雪狼’、‘大青山’等，其中以‘莫桑斯克’的發(fā)病率最高，為39.2%，表明其抗病能力最差。其他品種抗病性介于兩者之間。

采用改進的土壤接種法發(fā)病率變化范圍為13.2%～32.3%，其中抗病性強的品種主要有：‘公園’、‘肯塔基’、‘開魯坦’等，以‘公園’的發(fā)病率最低為13.2%，說明在本次試驗中‘公園’的抗病性最高。感病品種有‘阿蓋爾’、‘莫桑斯克’、‘藍狐’等，以‘阿蓋爾’和‘莫桑斯克’的發(fā)病率最高，分別為32.3%與32.2%，表明這兩個品種抗病能力較差。其他品種的抗病性介于兩者之間（表2）。

培育30d的草地早熟禾幼苗接種法發(fā)病率變化范圍為12.3%～31.5%，抗病性比較強的品種有：‘肯塔基’、‘開魯坦’、‘公園’等，其中‘肯塔基’的發(fā)病率最低，僅為12.3%，說明在該試驗條件下此品種的抗病性最強。感病品種有：‘恩坦沙’、‘菲爾京’、‘阿蓋爾’等，其中‘恩坦沙’的發(fā)病率最高，高達31.5%，說明在該試驗條件下，恩坦沙的抗病能力最差。其他品種的發(fā)病率介于兩者之間（表2）。

表2 草地早熟禾對腐霉枯萎病的抗性鑒定1）

根據(jù)以上試驗結(jié)果，及對45份草地早熟禾品種對腐霉枯萎病抗性的綜合評價得知，各品種平均發(fā)病率變化范圍為15.33%～33.53%，其比率分布如圖1所示。其中，高抗材料有8份，占17.8%；中抗材料有12份，占26.7%；中感材料有11份，占24.4%；高感材料有14份，占31.1%。由分布圖可以看出，高抗區(qū)域種質(zhì)材料最少，而高感區(qū)域種質(zhì)材料所占比例最大。最終得到高抗材料為：‘公園’、‘肯塔基’、‘開魯坦’等；中抗品種有：‘藍孔雀’、‘挑戰(zhàn)者’、‘百思特’等；中感品種有：‘迪斯蒂尼’、‘諾馬’、‘肯利’等；高感品種有：‘莫桑斯克’、‘阿蓋爾’、‘特羅衣’等（表2）。

圖1 草地早熟禾種質(zhì)材料抗感比率分布圖

通過采用3種接種方法對草地早熟禾腐霉枯萎病進行抗性評價，結(jié)果表明，不同接種方法腐霉枯萎病的發(fā)病率存在顯著差異，其中采用傳統(tǒng)的土壤接種法發(fā)病率最高，平均發(fā)病率為32.02%，有17個品種的發(fā)病率在35%以上，以‘莫桑斯克’的發(fā)病率最高，達39.2%，‘公園’的發(fā)病率最低，為19.0%。采用改進的土壤接種法和培育30d的草地早熟禾幼苗接種法之間的平均發(fā)病率差異不大，分別為23.73%和22.47%，發(fā)病率明顯低于傳統(tǒng)的土壤接種法的發(fā)病率，其中改進的土壤接種法中以‘公園’的發(fā)病率最低，為13.2%，‘阿蓋爾’的發(fā)病率最高為32.3%；培育30d的草地早熟禾幼苗接種法‘肯塔基’的發(fā)病率最低為12.3%，‘菲爾京’的發(fā)病率最高為31.4%，都明顯低于傳統(tǒng)的土壤接種法中的最高發(fā)病率39.2%和最低發(fā)病率19.0%。

將供試品種在3個處理中表現(xiàn)出的抗病性進行排序，結(jié)果表明除‘蘭肯’在不同接種方法中的抗病性變化較大外，其他品種均表現(xiàn)出了穩(wěn)定的抗感性能：如‘公園’、‘午夜’、‘肯塔基’和‘開魯坦’，在3種接種方法中其抗病性排序均在前5位，表現(xiàn)出穩(wěn)定的抗病性；‘莫桑斯克’、‘菲爾京’、‘雪狼’3個品種在3種接種方法處理中的抗病性排序都處于后7位，表現(xiàn)出穩(wěn)定的感病性，說明3種接種方法得到的結(jié)果基本一致。進一步分析發(fā)現(xiàn)，傳統(tǒng)的土壤接種法，平均發(fā)病率顯著高于改進的土壤接種法和培育30d的草地早熟禾幼苗接種法；改進的土壤接種法所選用的幼苗比培育30d的草地早熟禾幼苗接種法所選的幼苗苗齡少15d，但與后者相比，得到的抗病性變化無顯著差異，兩者的平均發(fā)病率僅相差1.26%；各品種在不同接種方法中表現(xiàn)出較穩(wěn)定的抗感性，說明3種接種方法均可用于此類抗病性的評價。

3 結(jié)論與討論

（1）腐霉枯萎病是由腐霉（Pythiumspp.）引起的一種土傳病害，目前全世界已報道的腐霉有100多種，但就北京而言主要以瓜果腐霉（Pythium aphanidermatum）為主［10－11］。雖然腐霉在土壤中的活動隨季節(jié)變化，春季最多、秋季次之、夏季最少、冬季基本不活動，但瓜果腐霉的最適生長溫度為30～34℃［12－13］，其侵染草坪進而引起發(fā)病需在夏季持續(xù)高溫高濕的條件下才能進行，因此，試驗中必須保證穩(wěn)定的高溫高濕條件［14］。

（2）本研究采用3種接種方法評價草地早熟禾對腐霉枯萎病的抗性，其中傳統(tǒng)的土壤接種法評價的結(jié)果表明枯萎病的發(fā)病率明顯商于改進的土壤接種法和培育30d的草地早熟禾幼苗接種法，后兩種方法之間平均發(fā)病率差異不大，說明傳統(tǒng)的土壤接種法更適合進行抗病品種的篩選和評價，能夠真實地反映各品種對腐霉枯萎病的抗性，同時此接種方法更接近自然感病的條件。其他兩種接菌方法都是在幼苗種植后15d和30d進行接菌，顯然發(fā)病率會低于第一種接種方法，這也說明了腐霉枯萎病對種子的萌發(fā)和幼苗期的危害是比較大的。

（3）不同品種間對腐霉枯萎病的抗性存在較大差異，各品種抗病性強弱的排序在不同接種試驗中有一定的差異，但絕大多數(shù)品種在不同的接種方法試驗中抗病性排序變化幅度不大，基本趨于一致。只有個別品種如‘蘭肯’草地早熟禾，在3個接種試驗中排序差異較大，在3種接種方法試驗中的抗性排序分別為22、11、40，說明該品種對種接方法比較敏感，易受到外部環(huán)境或者自身因素的影響，對于這類品種需進行多次及反復(fù)的接種試驗，以便獲得較為準(zhǔn)確的接種方法及正確的評價結(jié)果。

（4）研究結(jié)果將45個草地早熟禾品種按抗腐霉枯萎病強弱分為4類，高抗品種有：‘公園’、‘肯塔基’、‘開魯坦’、‘午夜’、‘納蘇’、‘特拉內(nèi)爾’、‘科羅拉多’、‘金錢豹’；中抗品種有：‘藍孔雀’、‘挑戰(zhàn)者’、‘百思特’、‘獎品’、‘藍鳥’、‘諾馬’、‘各綠’、‘男爵’、‘坎勃魯’、‘百勝’、‘槍手股’、‘新歌來德’；中感品種有：‘迪斯蒂尼’、‘華盛頓’、‘肯利’、‘蘭肯’、‘優(yōu)異’、‘優(yōu)美’、‘諾德’、‘藍寶石’、‘米杰瓦’、‘派拉德’、‘?？死埂?；高感品種有：‘悉斯波特’、‘丹加’、‘普利米德’、‘巴林’、‘雷賓斯’、‘藍狐’、‘恩坦沙’、‘特羅衣’、‘洪茲維利’、‘大青山’、‘阿蓋爾’、‘雪狼’、‘菲爾京’、‘莫桑斯克’。研究獲得的初步結(jié)果為今后草坪生產(chǎn)和養(yǎng)護管理實踐中品種的選擇提供了理論依據(jù)。

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