蒙藥復(fù)方特潤舒都樂中抗菌化合物大黃酚的分離鑒定

納仁高娃，王純潔，敖日格樂

(1.內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)獸醫(yī)學(xué)院，內(nèi)蒙古呼和浩特010010；2.內(nèi)蒙古醫(yī)學(xué)院生理教研室，內(nèi)蒙古呼和浩特010059)

蒙醫(yī)藥是我國4大民族醫(yī)藥體系之一，是具有完整理論體系和豐富臨床實(shí)踐經(jīng)驗(yàn)的傳統(tǒng)醫(yī)藥學(xué)，是我國乃至世界傳統(tǒng)醫(yī)藥學(xué)的重要組成部分[1]。在蒙藥典中記載著豐富的藥物，其中包含有多種天然、綠色的抑菌、殺菌的蒙藥以及多種含有抗炎免疫等生物活性的藥物。蒙藥復(fù)方特潤舒都樂作為傳統(tǒng)復(fù)方，由大黃、梔子等7味藥構(gòu)成，已經(jīng)經(jīng)過長期的臨床應(yīng)用，明確了其具有很強(qiáng)的抑菌、抗菌抗炎的作用。本研究室對其進(jìn)行了系統(tǒng)的體內(nèi)外抑菌、抗菌試驗(yàn)研究結(jié)果顯示其抑菌效果與環(huán)丙沙星相當(dāng)[2]。本研究利用天然藥物化學(xué)法，對其抗菌有效成分進(jìn)行分離鑒定，為藥物的二次開發(fā)奠定基礎(chǔ)。

1 材料和方法

1.1 主要實(shí)驗(yàn)材料 蒙藥復(fù)方特潤舒都樂由大黃、梔子等7味藥構(gòu)成，均購自內(nèi)蒙古九合永齡堂藥店，符合《內(nèi)蒙古蒙藥材標(biāo)準(zhǔn)》。

1.2 主要試劑和儀器 薄層層析用正相硅膠板、拌樣用硅膠(80目～100目)和柱層析用硅膠(200目～300目)均為青島海洋化工廠生產(chǎn)；凝膠Sephadex LH-20為瑞典Amershan公司產(chǎn)品；顯色劑為10%H2SO4乙醇溶液；無水乙醇、乙酸乙酯、正丁醇、石油醚均為分析純(天津市化學(xué)試劑三廠，批號：20090202)；Bruker AM-400和 Bruker Avance III 600型核磁共振儀為Bruker公司產(chǎn)品；分析和半制備型高效液相色譜儀Agilent 1100HPLC為Agilent公司產(chǎn)品，色譜柱為Zorbax SB-C18(Agilent，4.6mm×250mm，1m L/min；9.4mm×250mm，3m L/min)，檢測器為二極管陣列檢測器(DAD)。

1.3 藥物成分提取與分離 稱取蒙藥復(fù)方，70%乙醇提取后，分別用石油醚、正丁醇、乙酸乙酯、水溶液萃取，獲得不同溶劑萃取浸膏[3]。前期研究表明石油醚部分為體內(nèi)抗菌最有效部位[2]。每次取石油醚浸膏1g，加10m L(乙酸乙酯：正己烷=1∶9)稀釋，經(jīng)硅膠柱多次洗脫，獲得約20mg橙黃色固體夾雜白色粉末，先用0.5m L CDCl3溶解樣品，在400M Hz核磁共振波譜儀上做氫譜，表明樣品為混合物，在低場區(qū)有類似黃酮信號，高場區(qū)有脂肪酸和其它雜質(zhì)信號。需對樣品進(jìn)行分離純化后再鑒定其結(jié)構(gòu)。采用葡聚糖凝膠色譜對其進(jìn)行分離，用氯仿-甲醇(1∶1)進(jìn)行洗脫，收集不同的流份，用硅膠薄層色譜進(jìn)行檢測，合并相同的流份；對合并后的不同流份根據(jù)薄層色譜檢驗(yàn)情況，采用硅膠柱色譜進(jìn)一步分離，用石油醚-丙酮(8∶1～6∶1)進(jìn)行梯度洗脫，薄層色譜檢測，最后用反相高效液相色譜進(jìn)行純化(流動相為50%乙腈)。

1.4 藥物提取成份的結(jié)構(gòu)鑒定 對得到的橙黃色化合物，用400M Hz核磁共振波譜儀(NMR)測定氫譜、碳譜、無畸變極化轉(zhuǎn)移增強(qiáng)譜(DEPT)、異核單量子相關(guān)譜(HSQC)，用600M Hz核磁共振波譜儀(NMR)測定異核多鍵相關(guān)譜(HMBC)[3]，確定該物質(zhì)結(jié)構(gòu)。

2 結(jié)果與討論

2.1 藥物成分提取與分離結(jié)果 治療奶牛乳房炎蒙藥復(fù)方特潤舒都樂是沿用至今的傳統(tǒng)復(fù)方，具有抑菌抗菌抗炎免疫等藥理作用[2]。為初步探索蒙藥復(fù)方的活性部位，對兩種蒙藥復(fù)方做了乙醇回流提取，依次用石油醚、正丁醇、乙酸乙酯等不同有機(jī)溶劑進(jìn)行萃取，得到石油醚層浸膏、乙酸乙酯層浸膏、正丁醇層浸膏和水母液浸膏[3]。前期研究表明抗菌成分主要集中在石油醚層浸膏內(nèi)[2]。因此，本實(shí)驗(yàn)采用硅膠色譜和反相高效色譜及葡聚糖凝膠色譜對其進(jìn)行分離，不同溶劑進(jìn)行洗脫，反相高效液相色譜純化，最終得到一橙黃色化合物(約8mg)。

2.2 藥物提取成分的結(jié)構(gòu)鑒定結(jié)果 得到的單一成分通過NMR測定氫譜、碳譜、DEPT譜、HSQC譜，HMBC譜[4]，得出該化合物結(jié)構(gòu)(圖1)。與文獻(xiàn)對照表明，該化合物為大黃酚(Chrysophanol)[5-6]，NMR數(shù)據(jù)歸屬見表1。

圖1 大黃酚分子結(jié)構(gòu)圖Fig.1Molecular structuer of Chrysophanol

表1 大黃酚在CDCl3中核磁共振波普數(shù)據(jù)排布(J in Hz)Table 1NMR assignments for Chrysophanol in CDCl3(J in Hz)

分離鑒定結(jié)果為大黃酚，大黃酚為已知的體內(nèi)有效抗菌抑菌成分[7]，大黃酚屬蒽醌類化合物[8-9]，具有很強(qiáng)的體內(nèi)外抑菌作用，對金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、甲型鏈球菌、肺炎球菌、流感桿菌等多種細(xì)菌具有不同程度的抑制作用[10]。因此，確定蒙藥復(fù)方特潤舒都樂抗菌抑菌有效成分為大黃酚。特潤舒都樂作為傳統(tǒng)復(fù)方應(yīng)用至今，臨床效果非常顯著，但其服用量大、不夠經(jīng)濟(jì)等弱點(diǎn)，有待于通過有效成分，獲得新的經(jīng)濟(jì)、實(shí)用的抗菌、抑菌抗炎的新藥物。

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