楊子明,董仲璽,吳建璋,顏小捷,李典鵬,* ,陳海珊,張厚瑞
(1.廣西植物功能物質研究與利用重點實驗室廣西植物研究所,廣西桂林541006;2.廣西師范大學,廣西桂林541004)
隨著社會經濟的發(fā)展、人們生活水平的提高和原有飲食習慣的改變,便秘已經成為現代社會中的常見病。便秘常引起人們情緒的改變,心煩意亂,注意力渙散,影響日常生活與工作,并能導致肛結直腸并發(fā)癥。長期的便秘可使腸道細菌發(fā)酵而產生的致癌物質刺激腸黏膜上皮細胞,導致異形增生,易誘發(fā)癌變[1-3]。蔗糖作為人們常用食品添加劑,被人食用后,在胃腸中由轉化酶轉化成葡萄糖和果糖,有著潤腸通便的效果。L-阿拉伯糖具有良好的生理活性與功能,目前,美國食品藥品監(jiān)督局(FDA)將L-阿拉伯糖列入抗肥胖的營養(yǎng)補充劑和非處方藥;日本厚生省將其列入專用特殊保健食品添加劑用于調節(jié)血糖;我國衛(wèi)生部于2008年批準L-阿拉伯糖作為新資源食品。L-阿拉伯糖的生理功能:a.抑制蔗糖的代謝與吸收,控制血糖升高:天然存在的阿拉伯糖為L-型,它在動物體內不能被代謝,有甜味但是無熱量。除此之外,它以非競爭方式抑制腸道內蔗糖酶,從而抑制蔗糖在小腸內的吸收。b.抑制脂肪生成:L-阿拉伯糖阻礙蔗糖消化吸收,使機體獲得的能量減少,從而使體重增加的可能性減少,有利于控制體重[4-6]。許多實驗研究結果表明L-阿拉伯糖有較好的減肥、降血糖等效果[7-9],通過動物實驗,本實驗組也發(fā)現阿拉伯糖具有較好的減肥作用[10]。另外通過人群服用L-阿拉伯糖實驗,本實驗組發(fā)現其對中老年便秘病人有較好的通便效果,本文擬通過嚴格的動物實驗來驗證L-阿拉伯糖和蔗糖復配物的潤腸通便的功能,并確定其最佳劑量。
昆明種小鼠 SPF級,體重18~22g,由湖南斯萊克景達實驗動物有限公司提供,生產許可證號:SCXK(湘)2009-0004;ZL-0601電子天平 湖南湘儀實驗儀器有限公司;L-阿拉伯糖(純度99%)唐傳生物科技(廈門)有限公司,批號1009081;麻仁丸武漢太福制藥有限公司,批號20110407;鹽酸洛哌丁胺 西安楊森制藥有限公司,批號20110407;羧甲基纖維素鈉 中國醫(yī)藥上海試劑公司,批號20100405;其余試劑 均為國產分析純。
1.2.1 小鼠小腸推進實驗 取健康昆明種小鼠80只,雌雄各半,體重18~22g,隨機分為8組,每組10只:即正常對照組、模型對照組、阿拉伯糖組(按1.62g/kg灌胃給藥,下同)、蔗糖組(1.38g/kg)、阿拉伯糖+蔗糖復配物Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ組(3.0g/kg,其中的配比分別為Ⅰ組:阿糖54%+蔗糖46%;Ⅱ組:阿糖18%+蔗糖82%;Ⅲ組:阿糖6%+蔗糖94%)、陽性對照組(麻仁丸4.5g/kg)。小鼠禁食不禁水12h后除正常對照組外的各給藥組分別灌胃給予鹽酸洛哌丁胺(3.0mg/kg),正常對照組給予相應體積的蒸餾水。30min后各劑量組分別灌胃給予含有墨汁混懸液(2%墨汁100mL+1g羧甲基纖維素鈉)相應劑量的藥物,正常對照組和模型對照組給予相應體積墨汁混懸液,灌胃體積均為0.2mL/10g。30min后頸椎脫臼法處死小鼠,打開腹腔分離腸系膜,剪取上端自幽門,下端至回盲部的腸管,測量腸管長度為“小腸總長度”,測量幽門至碳汁推進前沿的距離為“碳汁推進長度”,計算碳汁推進率。碳汁推進率(%)=碳汁推進長度(cm)/小腸總長度(cm)×100。
1.2.2 小鼠排便實驗 取健康昆明種小鼠60只,雌雄各半,體重18~22g,隨機分為6組,每組10只,即正常對照組、模型對照組、阿拉伯糖組(1.62g/kg)、蔗糖組(1.38g/kg)、阿拉伯糖+蔗糖復配物Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ組(3.0g/kg,其中的配比分別為Ⅰ組:阿糖54%+蔗糖46%;Ⅱ組:阿糖18%+蔗糖82%;Ⅲ組:阿糖6%+蔗糖94%)、陽性對照組(麻仁丸4.5g/kg)。小鼠隔夜禁食12h(飲水不限)后除正常對照組外的各給藥組分別灌胃給予鹽酸洛哌丁胺(3.0mg/kg),正常對照組給予相應體積的蒸餾水。30min后各劑量組分別灌胃給予含有墨汁混懸液相應劑量的藥物,正常對照組和模型對照組給予相應體積墨汁混懸液,灌胃體積均為0.2mL/10g。從給予墨汁混懸液開始計時,每只小鼠單獨放入帶隔層小鼠籠(籠底鋪上吸水紙),正常飲水、進食,分別觀察記錄每只小鼠首次排出黑便的時間,6h內排便次數、重量及糞便性狀。
1.2.3 統(tǒng)計學處理 采用SPSS13.0統(tǒng)計軟件進行數據分析,實驗數據均以±s表示,兩個獨立樣本均數比較采用t檢驗,多個樣本之間的兩兩比較采用單因素方差分析,p<0.05為具有統(tǒng)計學意義。
實驗結果見表1。L-阿拉伯糖組、蔗糖組、糖復配物Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ組與便秘模型對照組比較,小鼠小腸內碳汁的推進率均明顯提高,其中以糖復配物Ⅰ組效果最為明顯。L-阿拉伯糖能夠抑制蔗糖的代謝,在糖復配物組中可能充分抑制了蔗糖在小腸的消化吸收,而L-阿拉伯糖本身很難被消化道吸收,在小腸不被吸收的L-阿拉伯糖和蔗糖可通過減少鹽酸洛哌丁胺的吸收來拮抗其抑制小腸蠕動。從表1中可以知道阿拉伯糖、蔗糖都有促進便秘模型小鼠小腸蠕動的功能,其中L-阿拉伯糖組小腸內容物推進率高于正常組,說明L-阿拉伯糖本身有很好的促進小鼠腸道蠕動的功能。實驗中還發(fā)現促進便秘模型小鼠腸道蠕動以糖復配物Ⅰ組效果最好,原因可能是阿拉伯糖、蔗糖促進便秘模型小鼠小腸蠕動功能產生了相加或協同的功效。
表1 L-阿拉伯糖和蔗糖復配物對便秘模型小鼠小腸推進的影響(±s,n=10)Table 1 Effect of L-arabinose and sucrose mixture on small intestinal propelling in constipation mice(±s,n=10)
表1 L-阿拉伯糖和蔗糖復配物對便秘模型小鼠小腸推進的影響(±s,n=10)Table 1 Effect of L-arabinose and sucrose mixture on small intestinal propelling in constipation mice(±s,n=10)
注:與正常組相比,*p<0.05,**p<0.01;與模型組相比,Δp<0.05,ΔΔp<0.01;與糖復配物Ⅰ組相比,#p<0.05,##p<0.01;表2同。
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從表2中可以得到,L-阿拉伯糖組、蔗糖組、糖復配物Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ組與便秘模型對照組比較,小鼠首次排便時間均明顯縮短,排便次數和排便重量均明顯增加,其中以糖復配物Ⅰ組效果最為明顯,其機制可能是糖復配物能夠促進小鼠腸道蠕動,縮短腸內容物的通過時間,從而縮短便秘模型小鼠首次排便時間;糖復配物通過縮短食物在小腸中的停留時間,減少水、電解質及葡萄糖等物質的吸收,L-阿拉伯糖能夠抑制蔗糖的代謝,在糖復配物中,被抑制分解的蔗糖組分在大腸里被微生物分解產生出大量的有機酸和CO2、H2等氣體,在腸內導致滲透壓升高、發(fā)酵顯著亢進、腸蠕動增強等,所以會加快糞便的排放,增加排便次數及重量。
從表3中可以得到,L-阿拉伯糖組、蔗糖組、糖復配物Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ組與便秘模型對照組比較,小鼠排出的糞便性狀明顯變軟變稀,其中以糖復配物Ⅰ組效果最為明顯,其原因可能是在糖復配物中,被抑制分解的蔗糖組分在大腸里被微生物分解產生出大量的有機酸和CO2、H2等氣體,有濕潤及軟化糞便的作用。
表2 L-阿拉伯糖和蔗糖復配物對小鼠排便的影響(±s,n=10)Table 2 Effect of L-arabinose and sucrose mixture on defecation in constipation mice(±s,n=10)
表2 L-阿拉伯糖和蔗糖復配物對小鼠排便的影響(±s,n=10)Table 2 Effect of L-arabinose and sucrose mixture on defecation in constipation mice(±s,n=10)
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表3 L-阿拉伯糖和蔗糖復配物對便秘模型小鼠糞便性狀的影響(n=10)Table 3 Effect of L-arabinose and sucrose mixture on stool shape in constipation mice(±s,n=10)
表3 L-阿拉伯糖和蔗糖復配物對便秘模型小鼠糞便性狀的影響(n=10)Table 3 Effect of L-arabinose and sucrose mixture on stool shape in constipation mice(±s,n=10)
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本實驗通過鹽酸洛哌丁胺成功建立了便秘模型小鼠。鹽酸洛哌丁胺是一種極強的長效止瀉藥,其造成便秘的作用機制為直接作用于腸壁的阿片受體,阻止納洛酮及其他配體與阿片受體結合,阻止乙酰膽堿和前列腺素的釋放,抑制腸道縱行和環(huán)行平滑肌收縮,從而抑制腸蠕動,延長腸內容物的通過時間,并通過延長食物在小腸中的停留時間,促進水、電解質及葡萄糖的吸收[11]。本實驗陽性藥采用麻仁丸,麻仁丸為治療便秘的傳統(tǒng)中藥,為黃褐色的水蜜丸,可以潤腸通便,用于腸熱津虧所致的便秘。本文在糖復配物對小鼠小腸推進實驗中發(fā)現糖復配物能有效促進便秘模型小鼠腸道的蠕動;在糖復配物對小鼠排便影響的實驗中發(fā)現糖復配物有明顯縮短便秘模型小鼠首次排便時間、增加6小時內排便次數和重量、軟化糞便的作用,其中都以糖復配物Ⅰ組效果最好,所以糖復配物Ⅰ組可做為一種有效的潤腸通便保健食品。
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