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    芪黃明目膠囊對糖尿病小鼠視網膜病變及生長因子表達的影響

    2012-09-06 03:04:22朱慧明張會欣何奇龍高學東齊曉琳王宏濤
    中國全科醫(yī)學 2012年30期
    關鍵詞:明目生長因子視網膜

    朱慧明,魏 剛,張會欣,何奇龍,高學東,齊曉琳,王宏濤

    糖尿病性視網膜病變 (DR)是糖尿病微血管病變中最重要的表現,同時也是糖尿病并發(fā)癥在眼部的主要表現[1]。研究表明,高糖狀態(tài)下生長因子在眼內新生血管形成過程中起關鍵性作用,并且能夠引起視網膜微血管滲透性的改變,造成視網膜屏障的破壞,同時能夠誘導血管生成素生成增加,造成視力損壞。芪黃明目膠囊在DR臨床研究中取得了很好的療效[2],但其機制尚不明確。故本研究以自發(fā)性2型糖尿病KK/Upj-Ay小鼠為模型,觀察芪黃明目膠囊對DR小鼠視網膜生長因子表達的影響,探討其機制,為臨床用藥提供參考。

    1 材料與方法

    1.1 材料

    1.1.1 實驗動物 KK/Upj-Ay小鼠 (自發(fā)性2型糖尿病小鼠,用專用飼料喂養(yǎng)3個月即可造模成DR小鼠)36只,體質量30~40 g;C57BL/6小鼠9只,體質量25~30 g。均為SPF級,雄性,12周齡,購于北京華阜康生物科技股份有限公司,動物合格證號:0225144。飼養(yǎng)于SPF級動物屏障系統(tǒng)。

    1.1.2 試劑與儀器 芪黃明目膠囊,由石家莊以嶺藥業(yè)股份有限公司提供;血管內皮生長因子 (VEGF)、堿性成纖維細胞生長因子 (bFGF)、色素上皮衍生因子 (PEDF)、轉化生長因子-β(TGF-β)、胰島素樣生長因子-Ⅰ (IGF-Ⅰ)引物由上海生工生物技術公司合成;VEGF、bFGF、PEDF、TGF-β、IGF-Ⅰ一抗購自Santa Cruz公司。熒光定量 PCR儀,ABI公司產品;凝膠成像分析儀,Biorad公司產品。

    1.2 方法

    1.2.1 動物分組與給藥 36只KK/Upj-Ay小鼠按空腹血糖(FBG)水平隨機分為模型組、芪黃明目膠囊高劑量組 (8.32 g生藥/kg)、芪黃明目膠囊中劑量組 (4.16 g生藥/kg)、芪黃明目膠囊低劑量組 (2.08 g生藥/kg),另設C57BL/6小鼠為對照組,每組9只。采用灌胃給藥,芪黃明目膠囊各組按照相應的劑量給予芪黃明目膠囊,對照組和模型組給予等體積的蒸餾水,1次/d,連續(xù)3個月。

    1.2.2 小鼠視網膜消化鋪片標本制備 連續(xù)給藥3個月后,把小鼠麻醉,取眼球,固定于10%甲醛液中48 h,分離視網膜,自來水漂洗,放入3%胰蛋白酶消化液37℃孵箱中消化振蕩約3 h,僅剩下一層透明的視網膜血管網,進行HE-PAS染色。

    1.2.3 Real Time PCR(qPCR)方法測定 VEGF、bFGF、PEDF、TGF-β、IGF-Ⅰ mRNA的表達 取視網膜組織,常規(guī)方法提取RNA,進行Real Time PCR擴增,以GAPDH作為內參照。VEGF引物:上游:5'-TGTCTATCAAGGGAGTGTGTGC-3',下游:5'-TGGAGTATTTCCGTGACCG -3',產物片段150 bp;bFGF引物:上游:5'-CGTCAAACTACAACTCCAAGCA -3',下游:5'-CGTCCATCTTCCTTCATAGCA -3',產物片段 93 bp;PEDF引物:上游:5'-TGGGTAACCAAGTTTGACTCG -3',下游:5'-AAGCCGTATCGTAAGATGGC-3',產物片段116 bp;TGF-β引物:上游:5'-CCGCAACAACGCCATCTATG -3',下游:5'-TGCTTCCCGAATGTCTGACG-3',產物片段85 bp;IGF-Ⅰ引物:上游:5'-CTCTTCAGTTCGTGTGTGGAC-3',下游:5'-AATGCTGGAGCCATAGCCT-3',產物片段68 bp;GAPDH引物:上游:5'-TGCTGAGTATGTCGTGGAGTC -3',下游:5'-TGCTGAGTATGTCG TGGAGTC-3',產物片段143 bp。最終結果計為與對照組進行比較后的相對定量值,對照組設置為1。

    1.2.4 Western blot法檢測 VEGF、bFGF、PEDF、TGF - β、IGF-Ⅰ蛋白的表達 取視網膜組織,常規(guī)方法提取蛋白質,化學發(fā)光法顯色,對條帶進行吸光度積分掃描。GAPDH作為內參照。用目的蛋白吸光度值/內參照吸光度值的比值進行比較。

    1.3 統(tǒng)計學方法 計量資料以 (±s)表示,采用SPSS 11.5軟件進行ANOVA統(tǒng)計分析和Dunnet t檢驗。以P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

    2 結果

    2.1 視網膜消化鋪片形態(tài)學觀察 對照組正常小鼠視網膜毛細血管分布規(guī)則,走向較直,管徑粗細均勻一致;模型組小鼠視網膜毛細血管網排列紊亂,走向極不規(guī)則,多根毛細血管扭聚成叢,部分毛細血管擴張、管腔粗細不均;芪黃明目膠囊能明顯改善上述變化,以芪黃明目膠囊高劑組最為明顯。

    2.2 視網膜VEGF、bFGF、PEDF、TGF-β、IGF-Ⅰ mRNA表達的變化 模型組小鼠視網膜 VEGF、bFGF、PEDF、TGF-β、IGF-ⅠmRNA表達與對照組比較,差異均有統(tǒng)計學意義 (P<0.01)。與模型組比較,芪黃明目膠囊中、高劑量組小鼠VEGF、IGF-Ⅰ mRNA表達顯著減少,芪黃明目膠囊高劑量組小鼠TGF-β mRNA表達顯著減少,差異均有統(tǒng)計學意義 (P<0.05);而芪黃明目膠囊低、中、高劑量組小鼠bFGF、PEDF mRNA表達與模型組比較,差異均無統(tǒng)計學意義(P>0.05,見表1、圖1)。

    2.3 視網膜VEGF、bFGF、PEDF、TGF-β、IGF-Ⅰ蛋白表達的變化 Western blot結果顯示,模型組小鼠視網膜VEGF、bFGF、PEDF、TGF-β、IGF-Ⅰ蛋白表達量與對照組比較,差異均有統(tǒng)計學意義 (P<0.01)。與模型組比較,芪黃明目膠囊中、高劑組小鼠視網膜VEGF、TGF-β、IGF-Ⅰ蛋白表達量顯著減少,差異均有統(tǒng)計學意義 (P<0.05);而bFGF和PEDF蛋白表達量與模型組比較,差異均無統(tǒng)計學意義 (P>0.05,見表2、圖2)。

    表1 各組小鼠視網膜VEGF、bFGF、PEDF、TGF-β、IGF-ⅠmRNA表達比較 (±s)Table 1 Comparison of the mRNA expression of VEGF,bFGF,PEDF,TGF-β and IGF-Ⅰ in retina of each group

    表1 各組小鼠視網膜VEGF、bFGF、PEDF、TGF-β、IGF-ⅠmRNA表達比較 (±s)Table 1 Comparison of the mRNA expression of VEGF,bFGF,PEDF,TGF-β and IGF-Ⅰ in retina of each group

    注:與對照組比較,*P<0.05,△P<0.01;與模型組比較,☆P<0.05,★P<0.01;VEGF=血管內皮生長因子,bFGF=堿性成纖維細胞生長因子,PEDF=色素上皮洐生因子,TGF-β=轉化生長因子-β,IGF-Ⅰ=胰島素樣生長因子-Ⅰ

    組別 只數 VEGF bFGF PEDF TGF-β IGF-Ⅰ對照組 3 1.05±0.15 1.51±0.44 1.14±0.16 0.90±0.14 1.54±0.47模型組 3 5.89±1.04△ 4.69±0.56△ 0.28±0.06△ 4.32±0.81△ 5.13±0.58△芪黃明目膠囊低劑組 3 4.23±0.83△ 4.79±1.11* 0.23±0.06△ 3.71±0.40△ 3.44±0.95*芪黃明目膠囊中劑組 3 2.48±0.43★ 5.41±1.49△ 0.29±0.09△ 2.86±0.71△ 2.50±0.85☆芪黃明目膠囊高劑組 3 2.54±0.64★ 4.06±1.23* 0.25±0.09△ 1.96±0.47☆ 2.36±0.78★F 0.000 0.014 0.000 0.000 0.002 21.638 5.459 49.154 17.837 10.065 P值值

    表2 各組小鼠視網膜VEGF、bFGF、PEDF、TGF-β、IGF-Ⅰ 蛋白表達的比較 (±s)Table 2 Compariosn of the protein expression of VEGF,bFGF,PEDF,TGF-β and IGF-Ⅰ in retina of each group

    表2 各組小鼠視網膜VEGF、bFGF、PEDF、TGF-β、IGF-Ⅰ 蛋白表達的比較 (±s)Table 2 Compariosn of the protein expression of VEGF,bFGF,PEDF,TGF-β and IGF-Ⅰ in retina of each group

    注:與對照組比較,*P<0.05,△P<0.01;與模型組比較,☆P<0.05,★P<0.01

    組別 只數 VEGF bFGF PEDF TGF-β IGF-Ⅰ對照組 3 0.16±0.04 0.12±0.03 0.84±0.12 0.14±0.06 0.16±0.04模型組 3 0.79±0.12△ 0.61±0.08△ 0.34±0.05△ 0.71±0.11△ 0.69±0.11△芪黃明目膠囊低劑組 3 0.65±0.09△ 0.66±0.06△ 0.36±0.06△ 0.63±0.10△ 0.61±0.08△芪黃明目膠囊中劑組 3 0.48±0.07△★ 0.64±0.11△ 0.34±0.07△ 0.49±0.08△☆ 0.44±0.08△★芪黃明目膠囊高劑組 3 0.36±0.06*★ 0.59±0.09△ 0.32±0.06△ 0.42±0.07△★ 0.33±0.05△★F 值0.000 0.014 0.000 0.000 0.000 27.593 25.447 26.652 20.485 23.251 P值

    圖1 各組熒光定量PCR擴增曲線Figure 1 Amplification curve of real-time fluorescent quantitative PCR of each groups

    圖2 各組小鼠視網膜Western blot結果Figure 2 Results of Western blot of each group

    3 討論

    許多因素,如血糖、血壓等對DR的發(fā)生發(fā)展均有重要作用[3],其發(fā)病機制盡管尚未明確,但隨著細胞生物學和分子生物學技術在DR發(fā)病機制方面的深入研究,已證實VEGF、bFGF、TGF-β、IGF-Ⅰ、PEDF等細胞因子通過一個復雜的網絡系統(tǒng)共同參與了DR的發(fā)生發(fā)展。其中,正常情況下視網膜細胞可產生較低水平的VEGF,用以維持血管穩(wěn)定性和視網膜正常發(fā)育,高血糖狀態(tài)下視網膜局部缺氧導致VEGF表達上調,強力促進內皮細胞增殖,增加血管通透性及誘導新生血管生成,在DR的發(fā)生發(fā)展中起重要作用[4-5]。TGF-β眼內來源廣泛,DR患者血清中TGF-β水平明顯高于健康人群,并隨病程的延長及眼部病情的加重而增高[6],可能是促進內皮細胞的增生、黏附及細胞外基質的沉積、激活絲裂原活化蛋白激酶、增加纖維連接蛋白的合成而參與了DR的形成。IGF-Ⅰ是一種多功能細胞增生調控因子,是眼組織正常發(fā)育并完成其生理功能所必需的重要因子,但在糖尿病條件下,IGF網絡系統(tǒng)的作用明顯增強[7],可以促進視網膜新生血管的形成。本研究結果顯示,自發(fā)性2型糖尿病小鼠視網膜毛細血管網排列紊亂,走向極不規(guī)則,多根毛細血管扭聚成叢,部分毛細血管擴張、管腔粗細不均,提示6個月的KK/Upj-Ay小鼠發(fā)生了DR,采用qPCR和Western blot技術發(fā)現DR小鼠視網膜VEGF、TGF-β、IGF-ⅠmRNA和蛋白表達量均顯著升高,與文獻報道一致[4-7]。芪黃明目膠囊治療3個月后能明顯改善視網膜損傷,延緩視網膜病變的發(fā)展,顯著降低DR小鼠VEGF、TGF-β、IGF-Ⅰ mRNA和蛋白水平,提示芪黃明目膠囊治療DR與下調VEGF、TGF-β、IGF-Ⅰ表達有關。

    同時本研究檢測了DR小鼠bFGF和PEDF的表達。bFGF促進DR發(fā)展的具體機制尚不明確,目前認為bFGF可通過旁分泌途徑和自分泌途徑作用于視網膜的各層細胞,并促進其他生長因子的分泌,因而與DR密切相關[8]。PEDF被認為是最有效的天然血管抑制因子,在減少血管滲漏和新生血管形成等病理過程中發(fā)揮著重要作用,研究表明在DR的早、中、晚期PEDF的保護性作用持續(xù)存在[9]。本研究結果顯示,模型組小鼠視網膜bFGF表達較正常小鼠顯著升高,PEDF表達顯著降低,芪黃明目膠囊各組bFGF、PEDF表達與模型組比較無顯著差異,提示芪黃明目膠囊對DR的作用與bFGF、PEDF途徑無關。

    芪黃明目膠囊為中藥復方制劑,以化瘀通絡為前提,配合滋潤通補、補氣通絡、熄風解痙、解毒通絡諸法,從絡論治DR的復方中藥,在Ⅲ期臨床試驗中顯示了很好的效果,同時還具有降糖的作用[2]??傊吸S明目膠囊對2型糖尿病小鼠視網膜發(fā)揮保護作用,可能與其下調 VEGF、TGF-β、IGF-Ⅰ表達有關,但具體機制還需進一步深入研究。

    1 張楠,鄭遠遠,萬鋼,等.社區(qū)糖尿病視網膜病變及危險因素探討[J].中國全科醫(yī)學,2011,14(9):2949-2952.

    2 吳烈,晏飛,蘇航,等.芪黃明目膠囊治療非增殖期糖尿病視網膜病變的臨床研究[J].中國中醫(yī)眼科雜志,2009,19(2):74-78.

    3 韋旭,孫繼瑋.影響2型糖尿病患者視網膜病變的臨床因素分析[J].中國全科醫(yī)學,2008,11(8):1482-1484.

    4 Grant MB,Afzal A,Spoerri P,et al.The role of growth factors in the pathogenesis of diabetic retinopathy [J].Expert Opin Investig Drugs,2004,13(10):1275-1293.

    5 Montero JA,Ruiz-Moreno JM,Correa ME.Intravitreal anti-VEGF drugs as adjuvant therapy in diabetic retinopathy surgery [J].Curr Diabetes Rev,2011,7(3):176 -184.

    6 葉健華,林曉峰,馬承紅,等.轉化生長因子β1在非增殖型糖尿病視網膜病變中的變化 [J].眼科學報,2006,22(1):14-16.

    7 Bergman PB,Moravski CJ,Edmondson SR,et al.Expression of the IGF system in normal and diabetic transgenic(mRen-2)27 rat eye[J].Invest Ophthalmol Vis Sci,2005,46(8):2708 -2715.

    8 Yoshida S,Ishikawa K,Asato R,et al.Increased expression of periostin in vitreous and fibrovascular membranes obtained from patients with proliferative diabetic retinopathy [J].Invest Ophthalmol Vis Sci,2011,52(8):5670-5678.

    9 Yoshida Y,Yamagishi S,Matsui T,et al.Protective role of pigment epithelium-derived factor(PEDF)in early phase of experimental diabetic retinopathy [J].Diabetes Metab Res Rev,2009,25(7):678-686.

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