同時測定鹽酸馬尼地平中5種有機溶劑方法研究

馬桂霞，曹悅興，王希信，母銳敏

(1.山東建筑大學(xué)市政與環(huán)境工程學(xué)院，山東 濟(jì)南 250101;2.濟(jì)南利民制藥有限責(zé)任公司，山東 濟(jì)南 250200)

0 引言

鹽酸馬尼地平屬于二氫吡啶類鈣離子拮抗劑，作用持久，有良好的抗高血壓效果，本品由日本武田藥品工業(yè)株式會社開發(fā)，于1990年在日本上市，在其生產(chǎn)工藝中，使用了甲醇、乙醇、異丙醇、三氯甲烷和甲苯，按照人用藥品注冊技術(shù)要求國際協(xié)調(diào)會(ICH) 規(guī)定[1－2]，甲醇、三氯甲烷、甲苯為二類溶劑，其限度分別為 0.3%、0.006%、0.089%，乙醇、異丙醇為三類溶劑，其限度分別為0.5%、0.5%，因此對該原料藥進(jìn)行有機溶劑殘留檢測就顯得尤為重要。目前，國內(nèi)外對鹽酸馬尼地平中有機殘留的具體檢測方法鮮有報道。本文通過實驗比較了直接進(jìn)樣和頂空進(jìn)樣時有機溶劑的檢出情況及不同溶劑對檢測的影響，實驗表明，采用頂空進(jìn)樣法并以50%N，N-二甲基甲酰胺水溶液為溶劑時，能同時滿足5種有機溶劑的檢測要求，且該方法靈敏、可靠，結(jié)果準(zhǔn)確，可有效用于本品的質(zhì)量控制。

1 實驗部分

1.1 主要實驗儀器與試劑

氣相色譜儀:Trace GC Ultra(美國熱電);頂空進(jìn)樣器(DJ-200型，上海金凱德分析儀器有限公司);鹽酸馬尼地平樣品(濟(jì)南利民制藥有限責(zé)任公司);甲醇、乙醇、異丙醇、三氯甲烷、甲苯、N，N-二甲基甲酰胺(均為分析純)。

1.2 實驗方法

1.2.1 色譜條件

色譜條件:色譜柱:SE-54(30m×0.25mm×0.33μm)。載氣:氦氣，流速:0.8mL/min。進(jìn)樣口溫度:250℃;柱溫:40℃保持15min，以60℃/min升至250℃，保持5min。檢測器:FID，檢測器溫度:250℃;H2:35mL/min，空氣:350mL/min，尾吹氣(N2)35mL/min。

1.2.2 進(jìn)樣方法的選擇

(1)直接進(jìn)樣法

鹽酸馬尼地平在一般的溶劑中溶解性較小，選擇對鹽酸馬尼地平溶解性較大的N，N-二甲基甲酰胺為溶劑，進(jìn)行相應(yīng)實驗如下:

圖1 以N，N-二甲基甲酰胺為溶劑直接進(jìn)樣法氣相色譜圖

以N，N-二甲基甲酰胺為溶劑分別制得每1mL中含甲醇 0.3mg、乙醇 0.5mg、異丙醇 0.5mg、三氯甲烷0.006mg、甲苯0.089mg的溶液，作為對照品溶液，準(zhǔn)確量取1μL，進(jìn)樣，記錄色譜圖，色譜圖見圖1。由色譜圖可知，甲醇、乙醇、異丙醇、甲苯均可順利檢出(S/N＞400，S/N為信噪比，指被測定物能夠準(zhǔn)確定量的最小濃度為定量限度，一般取信噪比為10∶1[1－2]。)，分離度良好，三氯甲烷峰面積較小(S/N=8.202)，達(dá)不到定量限水平，所以直接進(jìn)樣方法不符合要求。因此，擬采用頂空氣相色譜法進(jìn)行本品有機溶劑的檢測。

(2)頂空進(jìn)樣法

為試驗頂空進(jìn)樣法的適用性，本實驗采用頂空瓶溫度90℃，樣品瓶平衡時間30min的預(yù)試驗并進(jìn)行相應(yīng)的溶劑選擇試驗。

①取1.2.2(1)中對照品溶液 5.0mL，置 20mL頂空進(jìn)樣瓶中，密封后在90℃恒溫加熱30min，取1mL，進(jìn)樣，記錄色譜圖，由色譜圖可知，甲醇、乙醇、異丙醇、甲苯均可順利檢出(S/N＞100)，分離度良好，三氯甲烷峰面積較小(S/N=1.171)，達(dá)不到定量限水平，因此N，N-二甲基甲酰胺為溶劑不符合要求。

②擬在N，N-二甲基甲酰胺中加入適量水，可以減少有機物在有機相中的溶解度，增大其在頂空氣體中的含量，從而提高檢測限。通過相應(yīng)的溶解性試驗證明，鹽酸馬尼地平在50%的N，N-二甲基甲酰胺水溶液中溶解度可達(dá)到0.1g/mL，且放置至室溫不析出，因此本實驗采用50%的N，N-二甲基甲酰胺水溶液進(jìn)行相應(yīng)試驗。

圖2 以50%N，N-二甲基甲酰胺水溶液為溶劑頂空進(jìn)樣法氣相色譜圖

以50%的N，N-二甲基甲酰胺水溶液為溶劑分別制得每1mL中含甲醇0.3mg、乙醇0.5mg、異丙醇0.5mg、三氯甲烷 0.006mg、甲苯 0.089mg 的溶液，作為供試品溶液;精確量取5.0mL，置20mL頂空進(jìn)樣瓶中，密封后在90℃恒溫加熱30min，取1mL注入氣相色譜儀，記錄色譜圖，色譜圖見圖2。由色譜圖可知，甲醇、乙醇、異丙醇、甲苯均可順利檢出(S/N＞200)，分離度良好，三氯甲烷峰面積明顯增加(S/N=91.540)，可以順利檢出，因此 50%N，N-二甲基甲酰胺水溶液為溶劑符合要求。

1.2.3 進(jìn)樣條件的選擇

頂空瓶平衡溫度:溫度越高，蒸汽壓越高，頂空氣體的濃度越高，分析靈敏度越高，但會對樣品的穩(wěn)定性和頂空瓶的密封性產(chǎn)生不利的影響，因此在滿足靈敏度的條件下，選擇較低的平衡溫度?？紤]到本品采用50%N，N-二甲基甲酰胺水溶液為溶劑，沸點較高，因此擬采用80～90℃的平衡溫度，并進(jìn)行相應(yīng)的篩選。

分別取 1.2.2②中的供試品溶液 5.0mL置20mL頂空進(jìn)樣瓶中，密封后在 90℃恒溫加熱20min、30min、40min; 在 80℃ 恒 溫 加 熱 20min、30min、40min、50min、60min;在相應(yīng)的時間點處分別取1mL注入氣相色譜儀，記錄色譜圖，通過峰面積的大小來判斷是否達(dá)到平衡。結(jié)果表明，80℃恒溫加熱40min時即已達(dá)到平衡，90℃恒溫加熱20～40min時甲醇、乙醇、異丙醇面積基本穩(wěn)定，但三氯甲烷、甲苯面積一直在增加。因此最終選擇的恒溫加熱溫度為80℃，恒溫時間為45min。

1.2.4 線性關(guān)系實驗

精確量取三氯甲烷75.13mg置50mL量瓶中，加50%N，N-二甲基甲酰胺水溶液溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為儲備溶液a;分別精確稱取甲醇、乙醇、異丙醇、甲苯 151.6mg、250.1mg、246.8mg、43.48mg置 50mL 量瓶中，加 50%N，N-二甲基甲酰胺水溶液適量使溶解，加入儲備溶液a 2.0mL，以50%N，N-二甲基甲酰胺水溶液定容至刻度，搖勻，作為儲備溶液b;精確量取為儲備溶液 b 2.0、3.0、4.0、5.0、6.0、7.0mL 置 50mL 量瓶中，加 50%N，N-二甲基甲酰胺水溶液稀釋并定容至刻度，搖勻，作為線性關(guān)系用溶液。分別取上述溶液各5.0mL，置20mL頂空進(jìn)樣瓶中，密封后在 80℃恒溫加熱45min，取1mL注入氣相色譜儀，記錄色譜圖，以峰面積A對濃度C進(jìn)行線性回歸，得回歸方程如下:

表1 各溶劑的回歸方程及相關(guān)系數(shù)結(jié)果

1.2.5 精密度實驗

以50%N，N-二甲基甲酰胺水溶液為溶劑將線性關(guān)系試驗儲備溶液b稀釋10倍，作為供試品溶液。精確量取5.0mL，置20mL頂空進(jìn)樣瓶中，密封后在80℃恒溫加熱45min，取1mL注入氣相色譜儀，記錄色譜圖，連續(xù)測定6次，各有機溶劑測定的RSD分別為甲醇 2.29%、乙醇 2.04%、異丙醇2.17%、三氯甲烷 1.43%、甲苯 1.53%。

1.2.6 回收率測定

儲備溶液的制備:以50%的N，N-二甲基甲酰胺水溶液為溶劑分別制得每1mL中含甲醇3.0mg、乙醇5.0mg、異丙醇 5.0mg、三氯甲烷 0.060mg、甲苯0.89mg的溶液，作為儲備溶液;精確量取為儲備溶液 4.0、5.0、6.0mL 置50mL 量瓶中，加 50%N，N-二甲基甲酰胺水溶液稀釋并定容至刻度，搖勻，分別作為80%、100%、120%的儲備溶液。

測定法:稱取鹽酸馬尼地平3份各0.5g，分別置20mL頂空進(jìn)樣瓶中，分別加80%儲備溶液5mL置上述頂空進(jìn)樣瓶中，密封后在80℃恒溫加熱使溶解，放冷至室溫，然后在80℃恒溫加熱45min，取1mL注入氣相色譜儀，記錄色譜圖;另分別稱取鹽酸馬尼地平原料，分別取100%、120%儲備溶液及50%N，N-二甲基甲酰胺水溶液(空白試驗)同法操作，記錄色譜圖。

對照品溶液的測定:取100%的儲備溶液5mL置20mL頂空進(jìn)樣瓶中，密封后在80℃恒溫加熱45min，取1mL注入氣相色譜儀，記錄色譜圖。

按外標(biāo)法以峰面積分別計算各濃度條件下的測得量與回收率(計算時需扣除空白溶液中的測得量)。各溶劑的回收率數(shù)據(jù)如表2所示。

表2 各溶劑的準(zhǔn)確度試驗結(jié)果

1.2.7 最低檢測限

本方法最低檢測濃度分別為甲醇1.52μg/mL、乙醇 1.25μg/mL、異丙醇 0.62μg/mL、三氯甲烷0.30μg/mL、甲苯0.04μg/mL。

2 樣品測定

2.1 測定方法

色譜條件:見 1.2.1。

供試品溶液:精確稱取鹽酸馬尼地平0.5g，置20mL頂空進(jìn)樣瓶中，精確量取50%的N，N-二甲基甲酰胺水溶液5mL置上述頂空進(jìn)樣瓶中，密封后在80℃恒溫加熱使溶解，放冷至室溫，然后在80℃恒溫加熱45min。

對照品溶液:以50%的N，N-二甲基甲酰胺水溶液為溶劑溶解并制得每1mL含甲醇0.3mg、乙醇0.5mg、異丙醇 0.5mg、三氯甲烷 0.006mg、甲苯0.089mg的溶液，精確量取5mL置20mL頂空進(jìn)樣瓶中，密封后在80℃恒溫加熱45min。

分別取上述溶液各1μL注入氣相色譜儀，記錄色譜圖，按外標(biāo)法以峰面積計算其含量。

2.2 測定結(jié)果

稱取鹽酸馬尼地平樣品0.5g，按照2.1中方法進(jìn)行檢測，檢測結(jié)果見表3。

表3 樣品的測定

結(jié)果表明樣品中無上述溶劑的殘留。

3 結(jié)論

實驗表明，采用直接進(jìn)樣法及以N，N-二甲基甲酰胺為溶劑的頂空進(jìn)樣法三氯甲烷均不可有效檢出。通過采用50%的N，N-二甲基甲酰胺水溶液為溶劑，減少了有機物在有機相中的溶解度，增大了三氯甲烷在頂空氣體中的含量，從而提高檢測限，同時通過相應(yīng)的方法學(xué)實驗證明本方法可以有效地檢測本品的有機溶劑，達(dá)到控制本品質(zhì)量的目的。

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