紅花水提物對急性心肌缺血模型大鼠的保護(hù)作用研究

陳俊萍，李向陽（1.西寧市第二人民醫(yī)院，西寧810003；.青海大學(xué)醫(yī)學(xué)院，西寧810001）

缺血性心臟病是嚴(yán)重危害人類健康的疾病，如冠心病、心絞痛等。其發(fā)病率逐年上升，尋求抗心肌缺血的天然藥物已成為近年來的研究熱點(diǎn)。紅花為菊科植物Carthamus tinctoriusL.的干燥花，又稱草紅花，性溫、味辛，歸心、肝經(jīng)。其氣香行散，入血具有活血通經(jīng)、祛瘀止痛的功效，對于痛經(jīng)、經(jīng)閉、產(chǎn)后血暈、瘀滯腹痛、胸痹心痛、血積、跌打瘀腫、關(guān)節(jié)疼痛、中風(fēng)癱瘓、斑疹紫暗有一定作用[1]。臨床常以復(fù)方制劑形式用于心腦血管類疾病的治療，如芪丹通脈片（由黃芪、丹參、當(dāng)歸、紅花、桂枝組成）、心舒口服液（由當(dāng)歸、川芎、紅花組成）、回天再造丸（由山羊血、穿山甲、紅花等60味中藥組成）。但紅花單獨(dú)使用對心肌缺血的保護(hù)作用究竟如何則少見報道。本文就紅花水提物對垂體后葉素（Pit）復(fù)制急性心肌缺血模型大鼠保護(hù)作用進(jìn)行研究，為其臨床用藥提供理論依據(jù)。

1 儀器與材料

1.1 儀器

RM-6280型多道生理記錄儀、TDL-5型離心機(jī)（上海安亭醫(yī)療器械有限公司）；UV 755B型分光光度計（上海分析儀器總廠）；恒溫水浴箱（上海榮計達(dá)實(shí)驗(yàn)儀器有限公司）。

1.2 試藥

紅花購自西寧市第二人民醫(yī)院中藥房，由筆者鑒定為真品；硝酸異山梨酯片（山東魯南貝特制藥有限公司，批號：040925）；Pit注射液（南京新百藥業(yè)有限公司，批號：081101）；超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）、三磷酸腺苷（ATP）測試盒均購自南京建成生物工程研究所；水為雙蒸水。

1.3 動物

清潔級SD大鼠60只，♂，體重150～180g，由中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院實(shí)驗(yàn)動物研究所提供（動物使用合格證號：SCXK（京）11-00-0006）。

2 方法

2.1 紅花水提物的制備

取干燥至恒重紅花100g，置2000mL燒瓶中，加入10倍量水，加熱回流1.5h，重復(fù)3次，抽濾，合并濾液減壓濃縮成膏狀，再真空干燥，研磨成粉，貯藏，備用。實(shí)驗(yàn)時配成相應(yīng)濃度溶液。

2.2 復(fù)制模型與分組、給藥

實(shí)驗(yàn)分為6組，即正常對照（等容生理鹽水）、模型（等容生理鹽水）、硝酸異山梨酯（15mg·kg－1）和紅花水提物高、中、低劑量（100、50、25g（生藥）·kg－1）組。ig給藥，每天1次，連續(xù)15d，于末次給藥后1h ipPit（20u·kg－1）以復(fù)制急性心肌缺血大鼠模型。

2.3 指標(biāo)的測定

2.3.1 心電圖的測定 末次給藥1h后，ip 3%戊巴比妥鈉（1mL·kg－1）麻醉正常對照組大鼠，背位固定，多道生理記錄儀的針狀電極分別插入皮下，先連續(xù)觀察并記錄一段正常心電圖；復(fù)制模型后，檢測其余各組大鼠心電圖ST段與T波。

2.3.2 心肌SOD活性和MDA含量的檢測 取各組大鼠心室肌，冰水中勻漿，1000r·min－1離心5min，取上清液作為樣品。用TBA法測心肌MDA含量，用鄰苯三酚法測SOD活性。

2.3.3 心肌ATP的測定 取各組大鼠心室肌剪碎，氮冷卻下研成粉末，稱重后立即加1mL丙酮，室溫放置15min，90℃水浴中約4min 揮干丙酮，加入5mL 2mmol·L－1MgSO4，沸水煮15min 后冷卻，1000r·min－1離心10min，取上清液作為樣品。通過生物發(fā)光法測定樣品ATP的含量。

2.4 統(tǒng)計學(xué)方法

3 結(jié)果

3.1 紅花水提物對模型大鼠心電圖的影響

與正常對照組比較，模型組大鼠心電圖ST段明顯抬高，T波高尖明顯，表明急性心肌缺血模型復(fù)制成功；紅花水提物高、中劑量組大鼠心電圖ST段略有抬高，紅花水提物低劑量組大鼠心電圖ST段明顯抬高，表明高、中劑量紅花水提物對模型大鼠心電圖ST段有改善作用。

3.2 紅花水提物對模型大鼠心肌SOD活性和MDA含量的影響

與正常對照組比較，模型組大鼠心肌SOD活性顯著減弱，MDA含量顯著升高（P＜0.01），表明大鼠心肌抗氧化能力減弱。與模型組比較，紅花水提物高、中劑量組大鼠心肌SOD活性顯著增強(qiáng)，MDA含量顯著降低（P＜0.01或P＜0.05），而低劑量紅花水提物對大鼠心肌SOD活性和MDA含量有改善趨勢，但無顯著性差異（P＞0.05）。表明紅花水提物有一定的抗氧化作用，且呈量效關(guān)系。紅花水提物對模型大鼠心肌SOD活性和MDA含量的影響見表1。

3.3 紅花水提物對模型大鼠心肌ATP含量的影響

與正常對照組比較，模型組大鼠心肌ATP含量顯著降低（P＜0.01），表明大鼠心肌供能異常。與模型組比較，紅花水提物高、中劑量組大鼠心肌ATP含量顯著升高（P＜0.01或P＜0.05），而低劑量紅花水提物對大鼠心肌ATP含量有改善趨勢，但無顯著性差異（P＞0.05）。表明紅花水提物有一定改善心肌供能異常的作用，且呈量效關(guān)系。紅花水提物對模型大鼠心肌ATP含量的影響見表2。

表1 紅花水提物對模型大鼠心肌SOD活性和MDA含量的影響Tab 1 Effect of water extract from C.tinctorius on activity of SOD and content of MDAin model rats

表2 紅花水提物對模型大鼠心肌ATP含量的影響Tab 2Effect of water extract from C.tinctorius on content ofATPin model rats

4 討論

Pit是從動物腦垂體中提取的物質(zhì)，內(nèi)含有加壓素（抗利尿素）和催產(chǎn)素，加壓素能直接使血管，特別是毛細(xì)血管和小動脈收縮，可使冠狀動脈痙攣、收縮從而使心肌缺血缺氧。筆者ip Pit引起冠狀動脈痙攣以復(fù)制大鼠急性心肌缺血模型[2，3]。急性心肌缺血出現(xiàn)異常心電圖改變，主要反映在ST段、T波異常。本研究表明，紅花水提物可改善模型大鼠心電圖異常情況，以起到保護(hù)心肌作用。

在急性心肌缺血過程中，超氧陰離子自由基（·O2-）的大量形成和脂質(zhì)過氧化的增加是細(xì)胞損傷的主要病理過程之一。SOD廣泛存在于生物體內(nèi)與細(xì)胞氧代謝密切相關(guān)的蛋白質(zhì)，可高度專一性地催化對機(jī)體有害的·O2-的歧化反應(yīng)，而排除·O2-對機(jī)體細(xì)胞、組織的損害，對抗缺血缺氧性疾病的損傷、缺血缺氧再灌注組織損傷有重要的保護(hù)作用。MDA是脂質(zhì)過氧化反應(yīng)的穩(wěn)定代謝物，測定MDA含量可反映心肌組織中·O2-的含量及其引發(fā)的脂質(zhì)過氧化反應(yīng)程度，間接反映細(xì)胞受自由基氧化損傷的程度。本研究表明，高、中劑量紅花水提物可顯著增強(qiáng)模型大鼠心肌SOD活性，降低MDA含量，從而保護(hù)受損心肌。

ATP系一種輔酶，參與機(jī)體蛋白質(zhì)、脂肪、糖、核酸、核苷酸等代謝，又是機(jī)體能量的主要來源[4]，其代謝異?？煞从硻C(jī)體供能異常。本研究表明，高、中劑量紅花水提物可顯著增強(qiáng)模型大鼠心肌ATP含量，從而保證受損心肌的供能充足。

綜上所述，紅花水提物對急性心肌缺血模型大鼠可起到保護(hù)作用，其機(jī)制可能與改善心臟ST段、T波和抗氧化，增強(qiáng)機(jī)體供能有關(guān)。

[1] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典（二部）[S].2010年版.北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010：156.

[2] 尚正錄，尚 云，衛(wèi)洪昌.黃芪保心湯預(yù)防實(shí)驗(yàn)性大鼠急性心肌缺血的研究[J].上海中醫(yī)藥雜志，2004，38（11）：47.

[3] 王振宇，錢瑞琴，關(guān)樹宏，等.冠心Ⅱ號抗缺血性心肌損傷的自由基機(jī)理實(shí)驗(yàn)研究[J].中國中西醫(yī)結(jié)合雜志，2003，23（5）：363.

[4] 張俊武.新編實(shí)用醫(yī)學(xué)詞典[M].北京：北京醫(yī)科大學(xué)中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué)聯(lián)合出版社，1994：126.