靈芝多糖的急性毒性和抗腫瘤作用

崔永偉

江蘇省溧水縣中醫(yī)院藥劑科，江蘇溧水 211200

靈芝多糖的急性毒性和抗腫瘤作用

崔永偉

江蘇省溧水縣中醫(yī)院藥劑科，江蘇溧水 211200

目的：探討靈芝多糖的急性毒性和抗腫瘤作用。方法：觀察靈芝多糖的LD50及對(duì)S180小鼠肉瘤細(xì)胞的抑制作用。結(jié)果：靈芝多糖的LD50遠(yuǎn)大于國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)15 g/kg，屬無(wú)毒級(jí)別。同時(shí)當(dāng)靈芝多糖的劑量為250 mg/kg時(shí)，對(duì)S180小鼠肉瘤細(xì)胞的抑瘤率為43.44%。結(jié)論：靈芝多糖有很好的抗腫瘤作用，同時(shí)無(wú)急性毒性，值得推廣應(yīng)用。

靈芝多糖；急性毒性；抗腫瘤作用；中藥

靈芝又稱靈芝草、神芝、芝草、仙草、瑞草，是多孔菌科植物赤芝或紫芝的全株。靈芝主要分布在中國(guó)、朝鮮半島和日本[1-2]。靈芝一般生長(zhǎng)在濕度高且光線昏暗的山林中，主要生長(zhǎng)在腐樹(shù)或其樹(shù)木的根部。靈芝的主要成分為靈芝多糖，它有希望作為腫瘤化學(xué)治療或放射治療的輔助治療藥，可增強(qiáng)機(jī)體免疫功能，提高腫瘤化學(xué)治療或放射治療的療效，并因其抗放射作用，改善骨髓造血功能，從而減輕化學(xué)治療或放射治療的副作用。此外，其“扶正固本”作用尚可全面提高患者的體質(zhì)，有利于治療[3-4]。本實(shí)驗(yàn)旨在探討靈芝多糖的急性毒性級(jí)別，對(duì)S180小鼠肉瘤細(xì)胞的體內(nèi)抑制作用。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 供試動(dòng)物與瘤株 SPF級(jí)昆明小鼠 （安徽醫(yī)科大學(xué)）；S180小鼠肉瘤細(xì)胞（中科院上海細(xì)胞生物學(xué)研究所）。

1.1.2 主要試劑 靈芝多糖（人工栽培靈芝子實(shí)體，廣州市白云區(qū)大藥房）；RPMI-1640培養(yǎng)液（Gibco公司產(chǎn)品）；MTT（Amresco 公司產(chǎn)品）；ConA（Sigma公司產(chǎn)品）；光學(xué)顯微鏡（日本 Olympus Bx51）；全自動(dòng)血球分析（日本 Sysmex Kx21）；其他試劑為市售分析純。

1.2 方法

1.2.1 靈芝多糖提取 人工培養(yǎng)靈芝子實(shí)體，粉碎，蒸餾水回流4次，每次40 min，合并回流液過(guò)濾，濾液經(jīng)60℃減壓濃縮，離心（6 000 r/min），去除沉淀，取上清液經(jīng)95%乙醇沉淀，離心（6 000 r/min）收集沉淀物，再由Sevag法去蛋白，透析，真空干燥得靈芝總多糖[5]。

1.2.2 小鼠急性毒性試驗(yàn)設(shè)計(jì) 將小鼠分為6組，每組8只，雌雄各半。將靈芝多糖按劑量分為5組，分別為：L1，30 g/kg；L2，32 g/kg；L3，34 g/kg；L4，36 g/kg；L5，40 g/kg。 CN1 為對(duì)照組，溶劑采用蒸餾水。小鼠灌胃，每只每天1.5 ml，分兩次灌服，間隔0.5 h，記錄小鼠毒性情況與死亡情況，確定靈芝多糖的LD50。

1.2.3 小鼠抗腫瘤試驗(yàn)設(shè)計(jì) 取生長(zhǎng)最佳狀態(tài)的S180腹水瘤傳代細(xì)胞，小鼠右前肢腋下接種。將接種后小鼠隨機(jī)分為3組，每組6只，雌雄各半。分別為：靈芝多糖組（編號(hào)LZ），樣品劑量為250 mg/kg；陰性對(duì)照組（溶劑用蒸餾水，編號(hào)CN）；陽(yáng)性對(duì)照（CTX），劑量為 100 mg/kg。24 h后開(kāi)始灌胃，每只 0.2 ml/d，連續(xù)給藥12 d。停藥24 h后，小鼠脫頸處死后稱重解剖，計(jì)算抑瘤率，公式為：抑瘤率（%）=（陰性對(duì)照組－試驗(yàn)組）/陰性對(duì)照組×100%。

1.2.4 統(tǒng)計(jì)方法 采用 SPSS 19.0軟件分析，兩個(gè)樣本的qtest比較，用t檢驗(yàn)，結(jié)果以x±s表示。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 靈芝多糖的急性毒性實(shí)驗(yàn)

靈芝多糖的LD50遠(yuǎn)大于國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)15 g/kg，屬無(wú)毒級(jí)別。

2.2 小鼠體內(nèi)抗腫瘤試驗(yàn)

2.2.1 靈芝多糖對(duì)小鼠體重的影響 隨著灌胃天數(shù)增加，小鼠體重不斷變化，靈芝多糖組小鼠體重呈逐漸增加趨勢(shì)，而陽(yáng)性對(duì)照CTX組小鼠體重逐漸下降。具體情況見(jiàn)圖1。

2.2.2 靈芝多糖對(duì)小鼠采食量的影響 各樣品組小鼠采食量隨著飼養(yǎng)天數(shù)增多，變化較明顯，靈芝多糖組采食量穩(wěn)定增加，而陽(yáng)性對(duì)照CTX組由于副作用太大，陰性對(duì)照CN組在腫瘤的作用下，病情加重，食欲下降，采食量減少。具體情況見(jiàn)圖2。

圖1 靈芝多糖對(duì)S180肉瘤小鼠體重的影響

圖2 靈芝多糖對(duì)S180肉瘤小鼠采食量的影響

2.2.3 靈芝多糖對(duì)小鼠脾均重、瘤均重的影響 靈芝多糖實(shí)驗(yàn)組的小鼠脾臟指數(shù)高于CN和CTX，但方差分析差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。而小鼠的瘤均重測(cè)定結(jié)果顯示，靈芝多糖的抑瘤率為43.44%，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。具體情況見(jiàn)表1。

3 討論

靈芝所含的多糖、多肽等有著明顯的抗腫瘤功效，它可顯著提高機(jī)體的免疫功能，增強(qiáng)患者自身的抗癌能力[5]。靈芝可以促進(jìn)白細(xì)胞介素-2的生成，促進(jìn)單核巨噬細(xì)胞的吞噬功能，提升人體的造血能力尤其是白細(xì)胞的指標(biāo)水平以及其中某些有效成分對(duì)癌細(xì)胞的抑制作用，成為抗腫瘤、防癌以及癌癥輔助治療的優(yōu)選藥物[6-7]。靈芝對(duì)人體幾乎沒(méi)有任何毒副作用。這種無(wú)毒性的免疫活化劑的優(yōu)點(diǎn)，恰恰是許多腫瘤化療藥物和其他免疫促進(jìn)劑都不具有的[8]。本文結(jié)果顯示，靈芝多糖對(duì)S180小鼠肉瘤細(xì)胞的體內(nèi)抑制極顯著，對(duì)脾臟等免疫器官的功能有調(diào)節(jié)作用，效果明顯優(yōu)于化療藥物環(huán)磷酰胺，其抗腫瘤作用與文獻(xiàn)中確定的靈芝菌子實(shí)體來(lái)源的靈芝多糖對(duì)S180小鼠肉瘤細(xì)胞抑制效果相當(dāng)[6-7]。

表1 靈芝多糖對(duì)S180肉瘤小鼠脾臟及腫瘤的影響

[1]趙繼鼎，徐連旺，張小青.中國(guó)靈芝[M].北京：科學(xué)出版社，1981.

[2]林志彬，靈芝的現(xiàn)代研究[M].北京：北京大學(xué)中國(guó)協(xié)和醫(yī)科大學(xué)聯(lián)合出版社，1996.

[3]戴則林，蕫昌武.靈芝多糖的生物活性研究進(jìn)展[J].安徽中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2005，24（5）：60-62.

[4]LeiL S，Lin ZB.Effects of ganodem a polysaccharides on T cell subpopulations and production of interleukin 2 in mixed lymphocyte response[J].Acta Pham Sin，1992，27（5）：331-335.

[5]陳文星，陸茵，王愛(ài)云，等.不同提取工藝靈芝多糖抗腫瘤作用比較[J].南京中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2003,19（4）：227-228.

[6]寧安紅，曹婧，黃敏，等.靈芝多糖對(duì)小鼠腫瘤的抑制作用及免疫指標(biāo)的觀察[J].腫瘤研究與臨床，2004，16（3）：147-149.

[7]李建軍，雷林生，余傳林，等.靈芝多糖抗腫瘤作用的免疫學(xué)相關(guān)性研究[J].中藥材，2007，30（1）：71-73.

[8]張明軍.枸杞多糖對(duì)小鼠腹腔巨噬細(xì)胞作用的定量細(xì)胞化學(xué)研究[J].寧夏醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，1994，16（4）：307.

The acute toxicity and antitumor of ganoderma lucidum polysaccharides

CUI Yongwei

Pharmacy of Lishui County Hospital in Jiangsu Province,Lishui211200,China

Objective:To investigate the acute toxicity and antitumor of ganoderma lucidum polysaccharides.Methods:Observed the inhibition of the LD50 of ganoderma lucidum polysaccharides to the mouse sarcoma S180 cells.Results:The results showed that the LD50 of the ganoderma lucidum polysaccharides were greater than the national standard of 15 g/kg,it had non-toxic.At the same time,when the dose of Ganoderma lucidum polysaccharides was 250 mg/kg,the inhibition was 43.44%of S180 mouse sarcoma cells.Conclusion:Ganoderma lucidum polysaccharides has a good anti-tumor effect,and no acute toxicity,should be widely applied.

Ganoderma lucidum polysaccharides;Acute toxicity;Anti-tumor effect;Traditional Chinese medicine

R285.5

A

1674-4721（2012）01（b）-046-02

2011-11-01）