B7－1和B7－2協(xié)同刺激通道在復發(fā)性生殖器皰疹患者中的表達

趙曉嵐 龔業(yè)清 李仰琪 李嘉彥

復發(fā)性生殖器皰疹(recurrent genital herpes，RGH)是生殖器部位皮膚粘膜感染單純皰疹病毒(herpes simplex virus，HSV)引起的性傳播疾病。該病的易復發(fā)性與患者細胞免疫功能紊亂有關［1］，為闡明RGH患者免疫異常的機制，我們采用流式細胞數(shù)檢測RGH患者外周血淋巴細胞CD80/86及CD4+/CD8+T淋巴細胞中B7－CD28/CTLA－4(CD152)的表達，探討T淋巴細胞活化協(xié)同刺激通路在RGH發(fā)病機制中的作用。

材料與方法

1.臨床資料

50例RGH患者均符合RGH的診斷標準，設為患者組。年齡22～66歲，平均(37.76±12.20)歲;所有患者均未接受免疫抑制劑治療，且排除自身免疫性及其他感染性疾病。正常對照組20例為健康體檢者，與患者組年齡，性別差異無統(tǒng)計學意義。

2.試劑及儀器

熒光標記單克隆抗體CD80－FITC、CD86－PE、CD4－FITC、CD8－FITC、CD28－PE、CD152－PE，同型對照鼠抗人IgG1－FITC、IgG1－PE雙色標記抗體均購自美國eBioscience公司，流式細胞儀為美國BD公司出品。

3.方法

(1)標本：分別抽取50例RGH患者和20例健康體檢者外周血2ml，15%EDTA抗凝，6h內(nèi)送檢。

(2)直接免疫熒光標記：取抗凝全血100μL，加人熒光抗體(CD4－FITC/CD28－PE;CD8－FITC/CD28－PE;CD4－FITC/CD152－PE;CD8－FITC/CD152－PE;CD8y0－FITC/CD86－PE)各20μL。每份血標本設同型對照，對照管中加人抗凝血100μL，加人熒光抗體IgG1－FITC、IgG1－PE20Ul.室溫避光孵育30min，溶血，上機檢測。

(3)流式細胞儀檢測：經(jīng)Fs/ss設定淋巴細胞群為A門，依次上機檢測標本，每份標本測定10000個以上淋巴細胞。

4.統(tǒng)計學處理

統(tǒng)計學方法：本數(shù)據(jù)采用SPSS11.0統(tǒng)計軟件包進行分析，患病組與對照組間比較采用SNK－q方差分析法進行檢驗。

結 果

1.外周血淋巴細胞CD80、CD86陽性表達

RGH患者組與對照組比較，CD80、CD86的陽性表達較對照組明顯升高，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。見表1。

2.外周血CD4+/CD8+T淋巴細胞CD28/CD152的陽性表達

對照組CD8+/CD28陽性表達顯著高于患者組，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)，患者組的CD4+/CD152、CD8+/CD152的陽性表達顯著高于對照組，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。見表1。

表1 RGH患者外周血淋巴細胞CD80/86及CD4+/CD8+T淋巴細胞CD28/CD152的陽性表達(±s)%

表1 RGH患者外周血淋巴細胞CD80/86及CD4+/CD8+T淋巴細胞CD28/CD152的陽性表達(±s)%

分組 例數(shù) CD80 CD86 CD4+/CD28 CD8+/CD28 CD4+/CD152 CD8+/CD152對照組 20 3.26±0.11 3.92±0.20 27.89±9.39 13.36±3.0 8 0.34±0.47 0.98±1.52患者組 50 1.01±0.22 1.98±0.83 28.02±5.66 9.78±4.70 7.31±0.77 4.95±1.29

討 論

誘導T淋巴細胞活化、增殖、分化為效應細胞需要兩種信號刺激(即雙信號作用)。第一信號來自抗原與T細胞受體的結合，第二信號是由抗原呈遞細胞(APC)上的協(xié)同刺激分子與T淋巴細胞表面的相應受體結合而產(chǎn)生，T淋巴細胞識別抗原后才能充分活化表現(xiàn)效應功能。APC表面最具代表的協(xié)同刺激分子為B7家族，B7家族基本成員：B7－1(CD80)、B7－2(CD86)結合到T淋巴細胞表面的CD28或CD152，產(chǎn)生協(xié)同刺激效應發(fā)揮相應的生物學功能［2］。當CD80、CD86與CD28結合，可有效地刺激T淋巴細胞活化、增殖和分泌許多細胞因子，尤其是白介素－2上調(diào)［3］。當CD80、CD86與CD152結合，可抑制T淋巴細胞增殖，提高抗原特異性凋亡，并抑制TH1、TH2細胞因子產(chǎn)生，起負調(diào)節(jié)作用［2，4］。

近幾年有文獻報道，在自身免疫性疾病(如系統(tǒng)性紅斑狼瘡，銀屑病，變態(tài)反應性脊髓炎等)、腫瘤、炎癥等疾病和器官移植排斥等方面的研究發(fā)現(xiàn)，B7－CD28/CTLA－4共刺激途徑都起著重要作用，但卻較少有文獻報道這種共刺激途徑在RGH的發(fā)病機制中的作用。本研究發(fā)現(xiàn)，RGH患者組與對照組比較，CD80、CD86的陽性表達較對照組明顯升高，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。提示HSV的感染及相關治療誘導活化淋巴細胞，刺激活化了淋巴細胞表面CD80和CD86，使CD80、CD86的陽性表達增加。研究中對照組CD8+/CD28陽性表達顯著高于患者組，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。表明CD80、CD86與CD28結合增多，有效地刺激T淋巴細胞活化、增殖和分泌效應的細胞因子，抗病毒能力逐漸增強。與國內(nèi)吳健等檢測30例RGH患者外周血CD8+/CD28陽性表達顯著高于對照組的結果一致［4］。但本研究增加了CD8+/CD152的檢測，兩個共刺激分子對維持機體內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定，免疫調(diào)節(jié)等方面發(fā)揮了重要的作用。患者組的CD4+/CD152、CD8+/CD152的陽性表達顯著高于對照組，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。表明負性刺激分子CD152在患者組陽性表達比對照組增多，提示CD152與CD80、CD86有高度親和力，并在體內(nèi)抑制CD80、CD86依賴的免疫反應，抑制T淋巴細胞增殖，提高抗原特異性的凋亡，并抑制Thl和Th2細胞因子的產(chǎn)生，導致了疾病的復發(fā)［5，6］。國內(nèi)畢超等檢測了GH患者CD4+、CD8+的表達［7］，本研究增加了第二信號的檢測，對RGH的發(fā)病機制有了更深入的探討。

本文研究提示RGH患者存在明顯細胞免疫功能失調(diào)及免疫抑制現(xiàn)象。因此，在治療RGH患者時，除了抗病毒治療外，還應增強機體免疫功能，特別是細胞免疫功能，如提高B7－CD28的表達或封閉B7－CTLA－4的相互作用增強T淋巴細胞反應，針對這些環(huán)節(jié)的調(diào)節(jié)深入探索可能為防治RGH提供新思路。

1 范妙玲，劉煉慶，李科倫.復發(fā)性生殖器皰疹細胞免疫與治療的相關性研究［J］.國際醫(yī)學衛(wèi)生導報，2011，9(17)：1051－1052.

2 Alegre ML，F(xiàn)rauwirth KA，Thompson CB.T－cell regulation by CD28 and CTLA－4［J］.Nat Rev Immunol，2001，1(3)：220－228.

3 Harandi AM，Svennerholmb B，Holmgren I，et al.Interleukin－12(IL－12)and IL－18 are important in innate defense against genital herpes simplex virustype2 interferon－mediated Cunn protective immunity［J］.Jvirol，2007，75(14)：6705－6709.

4 吳健，賈國泉，吳瑞斌.復發(fā)性生殖器皰疹患者外周血T淋巴細胞和共刺激分子的檢測［J］.中國皮膚性病學雜志，2010，24(12)：1113－1114.

5 李萍，邵路平.復發(fā)性生殖器皰疹患者血清細胞因子的表達及機體細胞免疫功能的研究［J］.內(nèi)蒙古中醫(yī)藥，2010，(15)：106－107.

6 幸彩梅，李振華，吳意.生殖器皰疹患者HSVⅡ抗原CD8+細胞毒性T細胞檢測［J］.中國熱帶醫(yī)學.2009，9(6)：1032－1033.

7 畢超，曹文苓，黃平.生殖器皰疹初發(fā)患者外周血淋巴細胞檢測結果分析［J］.中國微生態(tài)學雜志，2008，20(1)：69－70.