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    自家苗治療連城白鴨漿膜炎的效果研究

    2012-08-15 00:47:43羅小華
    四川畜牧獸醫(yī) 2012年2期
    關(guān)鍵詞:鴨疫雛鴨病料

    羅小華

    (福建省連城縣畜牧獸醫(yī)水產(chǎn)局,福建 連成 366200)

    本文用當(dāng)?shù)伉唸龇蛛x的鴨疫里默氏菌株制備自家苗,對防治鴨傳染性漿膜炎的效果進(jìn)行了探討和研究,旨在為實際生產(chǎn)作指導(dǎo)。

    1 細(xì)菌分離與鑒定

    1.1 分離培養(yǎng) 選擇剛死亡且具有典型鴨傳染性漿膜炎病變的病死鴨,無菌采集肝組織,將采集的病料剁碎,除去結(jié)締組織和筋膜后稱重,加適量生理鹽水,用消毒好的組織勻漿機絞3~5min至勻漿狀。由于搗碎機高速運轉(zhuǎn),溫度上升很快,尤其是夏天溫度高時,容器中的病料很容易變質(zhì)而破壞病原的免疫原性,故夏天制苗時,在搗碎機中加入病料和生理鹽水時要用冷卻水冷卻。對于新采取的病料需反復(fù)凍融三次,將解凍的病料與生理鹽水按1kg:3500~4000mL的比例進(jìn)行稀釋,再用雙層無菌醫(yī)用紗布過濾,然后將濾液先后過一次八層和十二層的紗布。再取樣分別接種于普通培養(yǎng)基、馬丁肉湯、麥康凱瓊脂平板、巧克力瓊脂平板,分別作純培養(yǎng)。

    1.2 形態(tài)觀察 將分離的10株細(xì)菌在馬丁肉湯中(37℃)作、24h純培養(yǎng),再分別用革蘭氏染色和瑞氏染色進(jìn)行鑒定。

    1.3 生化試驗 分離菌經(jīng)純化后,用其48h馬丁肉湯培養(yǎng)物進(jìn)行生化反應(yīng)測定,置37℃燭缸中觀察15 d。

    1.4 血清學(xué)鑒定 將分離細(xì)菌接種在葡萄糖淀粉瓊脂平皿上培養(yǎng)24h,然后將每個平皿上的細(xì)菌懸浮于8.5%氯化鈉(質(zhì)量百分比)、0.02mol/L磷酸鹽、0.3%福爾馬林(體積百分比)溶液中(pH=7.0,1mL),再在100℃水浴鍋上加熱1 h,然后1 500 r/min離心30min,取上清液,與1型鴨疫里默氏桿菌標(biāo)準(zhǔn)陽性血清進(jìn)行平板凝集試驗和瓊脂擴(kuò)散試驗。

    1.5 藥敏試驗 在巧克力瓊脂平板上采用藥敏片擴(kuò)散法進(jìn)行。在含5%~10%CO2的環(huán)境中37℃下培養(yǎng)24 h觀察,然后對照標(biāo)準(zhǔn)判斷結(jié)果。

    1.6 動物發(fā)病實驗 取10只健康雛鴨作動物實驗,皮下注射培養(yǎng)菌液后觀察雛鴨有無發(fā)病癥狀。

    2 分離鑒定結(jié)果

    2.1 分離培養(yǎng) 將病料接種于巧克力瓊脂平板上,經(jīng)37℃厭氧培養(yǎng)48h后,長出了灰白色、半透明、微凸起的圓形菌落;在馬丁肉湯中呈現(xiàn)均勻混濁狀態(tài);置于燭缸中的麥康凱瓊脂平板上未見有細(xì)菌生長;在37℃恒溫培養(yǎng)的麥康凱平板上培養(yǎng)3d后,亦無細(xì)菌生長;普通瓊脂平板上同樣無細(xì)菌生長。

    2.2 形態(tài)觀察 分離的10株細(xì)菌經(jīng)革蘭氏染色鏡檢,均為革蘭氏陰性小桿菌;經(jīng)瑞氏染色法染色鏡檢,可見7株細(xì)菌呈兩極濃染,符合鴨疫里默氏桿菌的染色特性。

    2.3 生化試驗 糖發(fā)酵試驗:對甘露醇、麥芽糖、葡萄糖、果糖、甘露糖、乳糖均不發(fā)酵;不還原硝酸鹽,MR試驗、VP試驗均為陰性;過氧化氫酶試驗呈陽性。以上反應(yīng)均符合鴨疫里默氏桿菌的生化特性。

    2.4 血清學(xué)鑒定 凝集試驗和瓊脂擴(kuò)散試驗證實,與1型鴨疫里默氏桿菌標(biāo)準(zhǔn)陽性血清發(fā)生陽性反應(yīng),說明7株瑞氏染色陽性細(xì)菌株均為鴨疫里默氏桿菌血清1型。

    2.5 藥敏試驗 分離菌對氟甲砜霉素、甲哌利福霉素、氨芐青霉素、先鋒霉素、林可霉素高度敏感;對青霉素、呋喃唑酮和氯霉素中高度敏感;對慶大霉素、新霉素、鏈霉素、卡那霉素、紅霉素不敏感。

    2.6 動物發(fā)病實驗 試驗鴨接種病料后48h,雛鴨相繼發(fā)病,眼、鼻流出漿液性分泌物。糞便稀薄呈綠色,嗜眠、縮頸或嘴抵地面,腿軟弱,不愿走動;瀕死前出現(xiàn)神經(jīng)癥狀,如痙攣、搖頭、點頭,背脖和兩腿伸張呈角弓反張。剖檢病死鴨,最明顯的病變是心包腔內(nèi)及肝表面有一層纖維素性滲出物;心外膜、氣囊壁混濁增厚,腹腔積水,有的脾臟腫大,表面有灰白色斑點。取典型病死鴨病料用瑞氏法染色,發(fā)現(xiàn)菌體兩端濃染,呈兩極染色特性。

    通過以上分離鑒定,確定從可疑鴨疫里默氏桿菌病鴨中分離的菌株為鴨疫里默氏桿菌。

    3 自家苗的制備與檢測

    3.1 增菌培養(yǎng) 將純培養(yǎng)物接種于馬丁肉湯培養(yǎng)液,37℃振搖培養(yǎng)24h,取少量菌液作細(xì)菌計數(shù),使?jié)舛冗_(dá)1010個/mL。

    3.2 甲醛滅活 加入體積百分比為0.4%的甲醛溶液,置37℃下滅活48h,滅活期間,每4~6h搖動一次,搖動時間約為半小時。滅活完畢后,按1500 IU/mL比例加入雙抗(青霉素和鏈霉素),還要加一定量的黃芪多糖,以增加抗體的生成。搖勻后進(jìn)行無菌分裝,置4℃下保存待用。

    3.3 無菌檢驗 取滅活后的菌液接種于普通營養(yǎng)瓊脂平板上,37℃培養(yǎng)24h,如果無任何細(xì)菌生長說明甲醛滅活完全,無菌檢驗合格;反之則自家苗制備失敗。

    3.4 安全性檢驗 取10只健康雛鴨,頸部皮下注射1mL菌液,連續(xù)觀察14 d,如果雛鴨無外觀癥狀,也無病理變化,則表示自家苗安全。

    3.5 效力檢驗 取20只健康雛鴨,其中只對10只雛鴨注射疫苗:將疫苗回溫且徹底搖勻后于頸部皮下或肌肉注射(0.2mL/只),另外10只作為對照組。注射前要對注射針具徹底消毒,注射時要勤換針頭。注射完疫苗后,有的鴨群略顯安靜,采食飲水略有下降,這均屬正常的機體反應(yīng),一般1~2d即可完全恢復(fù)。14d后對兩組雛鴨分別注射未滅活的鴨疫里默氏桿菌,然后進(jìn)行細(xì)致觀察。分開飼養(yǎng),以免交叉感染。共分4個批次進(jìn)行效力檢驗試驗,每次均分為試驗組和對照組兩組,免疫程序和劑量均相同。

    4 自家苗的制備與檢測結(jié)果

    4.1 純培養(yǎng)物作增菌培養(yǎng) 在馬丁肉湯培養(yǎng)液中經(jīng)37℃振搖培養(yǎng)24 h后,取少量菌液作細(xì)菌計數(shù),結(jié)果細(xì)菌濃度達(dá)了3.2×1010個/mL。

    4.2 無菌檢驗 經(jīng)普通營養(yǎng)瓊脂平板37℃培養(yǎng)24 h后,無任何細(xì)菌生長,說明甲醛滅活完全,無菌檢驗合格。

    4.3 安全性檢驗 連續(xù)觀察14d后,雛鴨無外觀癥狀,剖檢也未發(fā)現(xiàn)病理變化,說明粗制疫苗菌液是安全的。

    4.4 效力檢驗 經(jīng)觀察,對照組雛鴨過夜后即有發(fā)病者出現(xiàn),病初表現(xiàn)為眼流漿液性或黏性分泌物,常使眼周圍羽毛粘連或脫落;鼻孔流出漿液或黏液性分泌物,有時分泌物干涸,堵塞鼻孔;有輕度咳嗽和打噴嚏;糞便稀薄呈綠色或黃綠色;嗜睡,縮頸或嘴抵地面,腿軟,不愿走動、步態(tài)蹣跚;瀕死前出現(xiàn)神經(jīng)系統(tǒng)癥狀,如痙攣、背脖和兩腿伸直呈角弓反張狀,尾部搖擺等,不久抽搐而死,病程一般2~3d。經(jīng)剖檢證實為注射的鴨疫里默氏桿菌所引起,而試驗組(接種疫苗組)連續(xù)觀察14 d后,無病例出現(xiàn)。說明所制自家疫苗對鴨疫里默氏桿菌病有保護(hù)作用。

    經(jīng)過對4批共計80只雛鴨的防治試驗表明:使用以上方法制備的自家苗對鴨傳染性漿膜炎有明顯的防治效果。在鴨群發(fā)病時,使用疫苗1周后發(fā)病明顯減少,10~15 d病癥狀完全消除,未見復(fù)發(fā)情況。同時,用自家苗對未發(fā)病鴨群免疫接種也能起到良好的預(yù)防效果,未見該病發(fā)生。

    5 結(jié)論

    筆者用自制的疫苗對發(fā)生鴨漿膜炎的鴨群進(jìn)行緊急注射能很快控制疫情;對未發(fā)病的鴨群提前注射又 起到了有效預(yù)防控制的作用。因此該自家苗是防治鴨傳染性漿膜炎的一種有效疫苗。

    雖然自家苗具有免疫防治作用,但由于它屬于生物性產(chǎn)品,所以要絕對注意其生物安全性。首先,目前沒有什么辦法去測定自定苗中具體的病原含量,這是一種運用實踐來檢驗效果與質(zhì)量的治療方法。其次,自家苗本身就是滅活苗,無論細(xì)菌還是病毒等大多已經(jīng)被殺死,而且采集的有可能是幾種病混合感染的病料,所以病料成分及結(jié)構(gòu)更加復(fù)雜,產(chǎn)生抗原的蛋白質(zhì)種類也多。最后,雖然自家苗可以用,但是前提是發(fā)病比較厲害的情況下采用,不要動輒就用自家苗,那樣風(fēng)險會很大。

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