臍血間充質(zhì)干細(xì)胞及其在新生兒缺氧缺血性腦病治療中的應(yīng)用研究

白小紅，張德雙 綜述，陳 娟審校

(四川大學(xué)華西第二醫(yī)院新生兒科，四川 成都 610041)

新生兒缺氧缺血性腦病(Hypoxic-Ischemia Encephalopathy，HIE)是新生兒期常見且危害嚴(yán)重的疾病。重度HIE可以導(dǎo)致新生兒死亡及兒童腦癱、智力落后、癲癇等神經(jīng)系統(tǒng)后遺癥［1］。HIE發(fā)病機(jī)制復(fù)雜，其治療及防治遠(yuǎn)期后遺癥已成為臨床一大難題。近年干細(xì)胞治療神經(jīng)系統(tǒng)疾病方面取得的進(jìn)展，使其可以成為HIE的新的治療模式［2］。臍血間充質(zhì)干細(xì)胞(Human umbilical cord blood-mesenchymal stem cells，HUCB-MSCs)在一定條件下可以分化為神經(jīng)元，利用HUCB-MSCs移植對已經(jīng)壞死的神經(jīng)元進(jìn)行替代，最大程度減少重度HIE患兒的遠(yuǎn)期后遺癥。本文對 HUCB-MSCs的基礎(chǔ)研究以及HUCB-MSCs治療HIE方面的進(jìn)展進(jìn)行綜述。

1 HUCB-MSCs的研究進(jìn)展

間充質(zhì)干細(xì)胞是一類具有多向分化潛能的組織干細(xì)胞，存在于骨髓、臍血、脂肪等組織。MSCs在體外誘導(dǎo)條件下不僅可以分化為中胚層來源的細(xì)胞如成骨細(xì)胞、脂肪細(xì)胞等，而且可以跨胚層分化為神經(jīng)細(xì)胞［3，4］。Erics等［5］于 2000 年報道，從臍帶血中分離出兩種貼壁細(xì)胞，一種為破骨細(xì)胞樣，另一種為成纖維細(xì)胞樣，后者表達(dá)細(xì)胞表面抗原 SH2、SH3、SH4、ASMA、MAB1470、CD13、CD29 和 CD49e，與骨髓來源的MSCs相同，因此這種細(xì)胞也屬于間充質(zhì)干細(xì)胞。實驗證明，臍血MSCs以及臍帶MSCs都可以分化為骨細(xì)胞、軟骨細(xì)胞、脂肪細(xì)胞、神經(jīng)細(xì)胞、肝細(xì)胞骨骼肌細(xì)胞［6，7］。骨髓和臍血是 MSCs的兩個主要來源組織。臍血又有以下優(yōu)點(diǎn):臍血的采集方便，采集臍帶血對產(chǎn)婦及新生兒不會造成危害;臍血中的干/祖細(xì)胞較成人骨髓中的干/祖細(xì)胞增殖分化能力更強(qiáng)［8］;臍血中的淋巴細(xì)胞幼稚，免疫功能不完全，移植物抗宿主病的發(fā)生率低［9］;臍血中不會有腫瘤細(xì)胞;臍帶血中潛伏性病毒和病原微生物的感染及傳播概率相對較低［10］。因此，臍血是較骨髓更為理想的MSCs的來源組織。

1.1 HUCB-MSCs的分離 目前，HUCB-MSCs分離常使用的方法有以下幾種:①密度梯度離心法及貼壁細(xì)胞分離法:首先從臍帶血中分理處單個核的細(xì)胞，再根據(jù)其體外培養(yǎng)中貼壁生長的特性，使用貼壁篩選法將其從造血系統(tǒng)中分離出來。此法簡單有效，成本低廉，對細(xì)胞的損傷小，能較好的保持細(xì)胞活性，其缺點(diǎn)則是分離出來的細(xì)胞成分復(fù)雜，純度不高。②免疫磁珠分離法:其原理是利用表面附有特異性抗體的磁珠與間充質(zhì)干細(xì)胞結(jié)合，再用永久磁鐵吸引出間充質(zhì)干細(xì)胞，這樣分離出來的細(xì)胞純度較高，而且分離過程中不會影響細(xì)胞的活性。③流式細(xì)胞儀法:根據(jù)干細(xì)胞體積大小的不同或是細(xì)胞表面的特殊標(biāo)志將臍血中的各種細(xì)胞分離，采用此法分離，可以獲得純度很高的干細(xì)胞，但是對干細(xì)胞活性影響很大，并且實驗條件要求高，所需的標(biāo)本量大這也限制了此種方法的廣泛運(yùn)用于干細(xì)胞的分離，但是其對間充質(zhì)干細(xì)胞的鑒定有很大的作用。國外還有人運(yùn)用單克隆的方法獲得純的MSCs細(xì)胞株，但是該方法不便于大量獲得MSCs［11］。

1.2 HUCB-MSCs的培養(yǎng) HUCB-MSCs的培養(yǎng)具有一定的難度，培養(yǎng)成功率僅在25%左右［12］，且在培養(yǎng)方面目前還有很多爭議，尚無統(tǒng)一的方案。影響臍血MSCs培養(yǎng)效率的因素很多，除了臍血中所含MSCs數(shù)量較少的原因外，不同的培養(yǎng)基、pH值、胎物血清濃度和種植濃度都會影響MSCs的生長。Romanov等［13］用含10% 胎牛血清的LG-DMEM 培養(yǎng)基養(yǎng)出優(yōu)質(zhì)生長良好的間充質(zhì)干細(xì)胞。Lee［6］用含20%牛血清、L-谷氨酰胺的IMDM培養(yǎng)基，并加入堿性成纖維生長因子(bFGF)，也培養(yǎng)出生長良好的干細(xì)胞。Ramasamy等也發(fā)現(xiàn)在培養(yǎng)基中加入bFGF可以提高干細(xì)胞的增殖，使更多的細(xì)胞停留在S期，并且不會改變臍血MSCs的免疫表型及免疫調(diào)節(jié)蛋白的功能［14］。有研究發(fā)現(xiàn)，運(yùn)用人自體血小板裂解物(humanplatelet lysates，HPL)培養(yǎng)的MSCs的免疫表型以及所在生物特性與用10%胎牛血清所培養(yǎng)的一致，7.5%HPL可以促進(jìn) MSCs的增殖［15，16］。Zhu等對比不同培養(yǎng)基對 MSCs增殖分化的影響，發(fā)現(xiàn)低濃度的胎牛血清(2%)加上EGF，血小板衍生生長因子(PDGF)所構(gòu)成的培養(yǎng)基可促使MSCs增殖，而15%的胎牛血清加上β-巰基乙醇則可以增加MSCs向成骨細(xì)胞的分化［17］。

1.3 HUCB-MSCs誘導(dǎo)分化成為神經(jīng)細(xì)胞 大量實驗證明，在不同誘導(dǎo)條件之下，臍血MSCs可以向神經(jīng)細(xì)胞分化。Lim等［18］證實，用腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子(BDNF)可以刺激人臍血MSCs向神經(jīng)元分化，且分化的細(xì)胞依賴MAPK/ERK和P13k/Akt的信號途徑生存。有人發(fā)現(xiàn)，激活蛋白激酶(PKA)信號途徑增加環(huán)磷酸腺苷(cAMP)的含量，可以增加臍血MSCs神經(jīng)突樣結(jié)構(gòu)和神經(jīng)標(biāo)志基因的表達(dá)［19］。也有實驗［20］證明，HUCB-MSCs經(jīng)誘導(dǎo)可以在形態(tài)學(xué)、表型及功能上都能分化進(jìn)入到施萬細(xì)胞。侯玲玲等［21］采用抗氧化劑誘導(dǎo)發(fā)現(xiàn)，MSCs經(jīng)經(jīng)誘導(dǎo)后可以表達(dá)神經(jīng)元特異性烯醇化酶(NSE)和神經(jīng)絲蛋白(NF)。Kang等［22］發(fā)現(xiàn)，雌激素也具有誘導(dǎo)臍血MSCs向神經(jīng)元分化的功能。Ma等發(fā)現(xiàn)運(yùn)用β-巰基乙醇或者丹參都可以體外誘導(dǎo)人臍帶Wharton's Jelly來源的MSCs像神經(jīng)元分化，并且所分化的細(xì)胞表達(dá)β-tubulinⅢ、NF和GFAP等成熟神經(jīng)元標(biāo)志蛋白［23］。雖然臍血MSCs可以向神經(jīng)細(xì)胞分化，但是所分化的神經(jīng)細(xì)胞是否具有正常神經(jīng)元一樣的生理生化功能以及分化成的神經(jīng)細(xì)胞是否能夠長期存活，這些問題仍需要進(jìn)一步研究。

2 HUCB-MSCs在新生兒HIE治療中的應(yīng)用

缺氧缺血所致的腦損傷分為兩個階段:原發(fā)性損傷階段(4～6 h)和繼發(fā)性損傷階段(6～72 h)。原發(fā)性損傷階段主要是由于缺氧，細(xì)胞能量代謝失衡，酸中毒，谷氨酸鹽釋放，細(xì)胞內(nèi)Ca積累，脂質(zhì)過氧化作用和NO的神經(jīng)毒性破壞細(xì)胞的平衡，最終導(dǎo)致的細(xì)胞死亡。繼發(fā)性損傷則是由于興奮性中毒、神經(jīng)元的凋亡、以及星形膠質(zhì)細(xì)胞的反應(yīng)性激活所引起。據(jù)其發(fā)病的特點(diǎn)，目前主張在“三項支持，三項對癥”的基礎(chǔ)上加亞低溫療法，可以降低大腦和機(jī)體的代謝率，節(jié)省大腦能量消耗，以挽救瀕死神經(jīng)元，減少神經(jīng)元的凋亡。此外，還有運(yùn)用氧自由基清除劑、鈣通道阻滯劑以及重組人促紅細(xì)胞生成素進(jìn)行治療［24～25］，但這些治療措施卻對促進(jìn)神經(jīng)元的再生無效，HUCB-MSCs的移植治療則能使所移植的細(xì)胞向腦組織移植并定向誘導(dǎo)分化為神經(jīng)細(xì)胞，抑制或取代壞死和凋亡神經(jīng)細(xì)胞，激發(fā)內(nèi)源性神經(jīng)組織修復(fù)系統(tǒng)，實現(xiàn)HIE后腦功能的康復(fù)。

2.1 HUCB-MSCs移植—有效促進(jìn)神經(jīng)元再生大量運(yùn)用臍血移植治療神經(jīng)系統(tǒng)疾病的研究結(jié)果表明其治療效果良好。Chen等［26］從尾靜脈給予卒中模型的大鼠輸入人的臍血，觀察到移植入大鼠體內(nèi)的臍血MSCs可在體內(nèi)存活并遷移到損傷大腦半球，并整合到損傷的腦組織，促進(jìn)損傷腦組織的恢復(fù)減輕大鼠的運(yùn)動功能障礙。Borlongan等［27］在大鼠卒中模型建立后1小時即給大鼠臍血MSCs聯(lián)合甘露醇移植，發(fā)現(xiàn)移植后第3天，在損傷的大腦的區(qū)域沒有查見所移植干細(xì)胞，但移植組動物的腦組織損傷減輕以及神經(jīng)行為功能較對照組有改善。他們推測是移植入體內(nèi)的MSCs所釋放的神經(jīng)營養(yǎng)因子通過血腦屏障到達(dá)損傷腦區(qū)域促進(jìn)了腦功能恢復(fù)。Pedro等［28］在新生大鼠缺氧缺血腦損傷后3小時，通過腹腔注射的方式將臍血MSCs移植入大鼠的體內(nèi)，他們發(fā)現(xiàn)接受了干細(xì)胞移植的動物一周后的運(yùn)動感覺反射明顯改善，同時在移植后第3天，移植組的腦紋狀體和皮質(zhì)的壞死及凋亡的神經(jīng)元數(shù)量較對照組明顯減少。Xia等［29］也通過腦室內(nèi)注射的途徑對缺氧缺血性腦損傷(HIBI)新生大鼠進(jìn)行HUBCMSCs的移植，他們發(fā)現(xiàn)移植組的mNSS評分較對照組的明顯增高，而且腦組織的損傷也有所減輕，所移植的MSCs可以分化成為星形膠質(zhì)細(xì)胞。

2.2 HUCB-MSCs移植治療腦損傷的神經(jīng)修復(fù)機(jī)制 目前對于MSCs移植對于腦損傷的神經(jīng)修復(fù)和重塑的機(jī)制仍然不清楚，目前主要是傾向于以下四種機(jī)制:

2.2.1 直接細(xì)胞替代機(jī)制 所移植的干細(xì)胞向受損組織細(xì)胞分化并替代受損細(xì)胞，與周圍細(xì)胞建立聯(lián)系，促進(jìn)神經(jīng)功能恢復(fù)。Lu等［30］將HUCB-MSCs于外傷性腦損傷后24小時經(jīng)鼠尾靜脈注入大鼠體內(nèi)，發(fā)現(xiàn)所移植的細(xì)胞可以向腦損傷區(qū)域遷移，并且表達(dá)神經(jīng)元表面標(biāo)志蛋白、微管結(jié)合蛋白-2(microtubule associated protein-2，MAP-2)和膠質(zhì)纖維酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein，GFAP)。更多的實驗則是證明了只有很小一部分移植入體內(nèi)的干細(xì)胞能向神經(jīng)細(xì)胞分化，根本不足以達(dá)到改善神經(jīng)系統(tǒng)功能的作用［31～33］。因此，推測直接的細(xì)胞替代可能不是主要機(jī)制。

2.2.2 參與血管的形成 有研究［32］運(yùn)用人臍血MSCs移植治療大鼠局灶性腦缺血，結(jié)果發(fā)現(xiàn)腦缺血灶周邊區(qū)域的微血管分布較對照組密集，證明了人臍血MSCs可以促進(jìn)缺血灶邊緣區(qū)的微血管的增生。Chen等［33］用局灶性腦缺血大鼠的缺血腦組織提取液培養(yǎng)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞，發(fā)現(xiàn)其表達(dá)血管內(nèi)皮生長因子(vascular endothelial cell growth factor，VEGF)明顯增加。Hess等［34］還發(fā)現(xiàn) MSCs可以分化為血管內(nèi)皮細(xì)胞，參與腦血管的重建。腦損傷后，在腦損傷區(qū)域的趨化因子SDF-1(stromal cell-derived factor-1)的表達(dá)水平增高，臍血MSCs表面有CXCR4(CXC chemokine receptor-4)的表達(dá)，可以使移植的MSCs向受損腦組織定植并且接受臍血MSCs移植后，腦組織的SDF-1的表達(dá)水平較對照組明顯增高［35］，這些證據(jù)都提示所移植的MSCs對腦血管再生有重要作用。

2.2.3 提高多種神經(jīng)營養(yǎng)因子的水平 體外實驗和體內(nèi)實驗［36，37］均觀察到MSCs可以增加多種營養(yǎng)因子的產(chǎn)生。Zhang［38］和 Chen 等［39］均發(fā)現(xiàn) MSCs移植治療腦損傷，可以提高神經(jīng)生長因子(nerve growth factor，NGF)和腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因(brain-derived neurotrophic factor，BDNF)的水平，這些細(xì)胞因子可以調(diào)節(jié)細(xì)胞的增殖分化，對神經(jīng)細(xì)胞起支持營養(yǎng)作用，減少神經(jīng)損傷，并促進(jìn)自體神經(jīng)干細(xì)胞的分化從而恢復(fù)神經(jīng)功能。

2.2.4 控制炎癥反應(yīng) Vendrame等［40］的研究顯示卒中的大鼠模型接受臍血MSCs移植后，體內(nèi)炎癥反應(yīng)介質(zhì)TNF-α和 IL-1β的水平比對照組低，而具有抗炎作用的IL-10的水平則較對照組高，同時減少了脾釋放炎癥反應(yīng)細(xì)胞(如巨噬細(xì)胞)，調(diào)節(jié)腦缺氧缺血損傷之后的瀑布式的炎癥反應(yīng)。

3 問題與展望

將臍血MSCs移植作為臨床上治療新生兒HIE的常規(guī)手段之一，還有許多問題亟需解決。①臍血MSCs分離的效率仍然很低，且缺乏特異性手段鑒定何種細(xì)胞分化為神經(jīng)元的潛能更大。②移植的時間窗和移植的途徑:關(guān)于移植時間窗目前有兩個觀點(diǎn)，有人認(rèn)為在缺氧缺血腦損傷之后的24～72小時是炎癥反應(yīng)的高峰期，腦的微環(huán)境不適于移植的MSCs的存活，應(yīng)該在缺氧缺血損傷后72小時之后進(jìn)行移植;另一觀點(diǎn)則認(rèn)為移植MSCs可以控制損傷腦組織炎癥介質(zhì)釋放，減少腦損傷程度，應(yīng)該盡早進(jìn)行MSCs移植。實驗中運(yùn)用腦室內(nèi)注射、腹膜內(nèi)注射，以及經(jīng)大鼠尾靜脈注射的途徑均有治療效果，但是何種移植途徑治療效果更好目前仍不確定。③促進(jìn)神經(jīng)修復(fù)的機(jī)制:臍血MSCs移植后可以從損傷部位觀察到MSCs分化的神經(jīng)細(xì)胞，且大鼠的癥狀有所緩解，但其作用的具體機(jī)制，以及何種機(jī)制起著主要作用，這都需要進(jìn)一步的研究。

臍血MSCs目前已初步應(yīng)用于臨床。在國內(nèi)外兒科領(lǐng)域，有學(xué)者［41，42］運(yùn)用臍血 MSCs治療腦性癱瘓患兒，結(jié)果顯示臍血MSCs移植能有效的改善腦癱患兒的運(yùn)動功能。有個案報道［43］運(yùn)用臍血MSCs治療1例兒童型脊肌萎縮癥之后，該患兒的肌力提高，神經(jīng)功能改善明顯。隨著研究的進(jìn)一步深入，臍血MSCs移植將有望成為新生兒HIE的常規(guī)治療方法之一，給危重HIE患兒的康復(fù)帶來希望。

［1］Lawn JE，Cousens S，Zupan J.Team LNSS.4 million neonataldeaths:when?Where?Why［J］.Lancet，2005，365:891-900.

［2］Dalous J，Larqhero J，Baud O.Transplantation of umbilical cord-derived mesenchymal stem cells as a novel strategy to protect the central nervous system:technical aspects，preclinical studies，and clinical perspectives［J］.Pediatr Res，2012，71(42):482-490.

［3］Choong PF，Mok PL，Cheong SK.Generating neuron-like cells from BM-derived mesenchymal stromal cells in vitro［J］.Cytotherapy，2007，9(2):170-183.

［4］Woodbury D，Reynclds K，Black IB.Adult bone marrow stromal stem cells:Express germline，ectodermal，endodermal，and mesodermal genes prior to neurogenesis［J］.J Neurosci Res，2002，96:908-917.

［5］Erices A，Conget PA，Mingue JJ.Mesenchymal progenitor cells in human umbilical cord blood［J］.Br J Haematology，2000，109:235-242.

［6］Lee OK，Kuo TK，Chen WM.Isolation of multipotent mensenchymal stem cells from umbilical cord blood［J］.Blood，2004，103:1675-1699.

［7］Latifpour M，Nematollahi-Mahani SN，Deilamy M，et al.Improvement in cardiac function following transplantation of human umbilical cord matrix-derived mesenchymal cells［J］.Cardiology，2011，120:9-18.

［8］Bobis S，Jarocha D，Majka M.Mesenchymal stem cells:characteristics and clincal applications［J］.Folia Histochem Cytobiol，2006，44:215-230.

［9］Keon Hee Yoo，IKeun Jang，Myoung Woo Lee，et al.Comparison of immunodulatory properties of mesenchymal stem cells derived from adult human tissues［J］.Cellular Immunology，2009，259(2):150-160.

［10］李晶，朱莉，趙春華.非病毒誘導(dǎo)體系高效誘導(dǎo)臍帶來源充質(zhì)干細(xì)胞向胰島素細(xì)胞分化［J］.中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院學(xué)報，2011，33(6):675-678.

［11］MohyeddinBonab MA，Alimoghaddam KA，Goliaei ZA，et al.Whichfactorscanaffect cordbloodvariables［J］.Transfusion，2004，44(5):690-693.

［12］Bieback K，Kern S，Kluter H.Criticalparametersfor theisolation of mesenchymal stemcells fromumbilical cord blood［J］.Stem Cells，2004，22(4):625-634.

［13］Romanov YA，Svintsitskaya VA，Smirnov VN.Searching for alternative sources of postnatal human mesenchymal stemcells:candidate MSC-like cells fromumbilical cord ［J］.Stem Cells，2003，(21):105-110.

［14］Ramasamy R，Tong CK，Yip WK，et al.Basic fibroblast growth factor modulates cell cycle of human umbilical cord–derived mesenchymal stem cells［J］.Cell Prolif，2012，45(2):132-139.

［15］許茹，夏文杰，戎霞，等.人血小板裂解液替代胎牛血清促進(jìn)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的增值［J］.南方醫(yī)科大學(xué)學(xué)報，2011，31(8):1396-1400.

［16］Horn P，Bokermann G，Cholewa D，et al.Impact of individual platelet lysates on isolation and growth of human mesenchymal stromal cells［J］.Cytotherapy，2010，12(7):888-898.

［17］Zhu H，Miosqe N，Schulz J，et al.Regulation of multilineage gene expression and apoptosis during in vitro expansion of human bone marrow stromal cells with different cell culture media［J］.Cells Tissues Organs，2010，192(4):211-220.

［18］Lim JY，Park SI，JiHyeon Oh.Brain-derived neuro trophicfactor stimulates the neural differentiation of human umbilical cord bloodderived mesenchymal stem cells and survival of differentiated cells through MAPK/ERK and PI3K/Akt-de-pendent signaling pathways［J］.Journal of Neuroscience Research，2008，86:2168-2178.

［19］Wang TT，Tio M，Lee W.Neural differentiation of mesenchymal-like stem cells from cord blood is mediated by PKA ［J］.Biochem Biophys Res Commun，2007，357(4):1021-1027.

［20］Zhang HT，Cheng HY，Zhang L.Umbilical cord blood cell-derived neurospheres differentiate into Schwann-like cells［J］.Neuroreport，2009，20(4):354-359.

［21］Hou Lingling，Cao Hua，Wei Guorang.Study of in vitro expansion and differentiation into neuron-like cells of human umbilical cord blood mesenchymal stem cells［J］.Chin J Hematol，2002，8(23):415-419.

［22］Kang JH，Lee CK，Kim JR，et al.Estrogen stimulates the neuronal differentiation of human umbilical cord blood mesenchymal stem cells(CD34)［J］.Neuroreport，2007，18(1):35-38.

［23］Ma Lian，F(xiàn)eng Xue Yong，Cui Binglin.Human umbilical cord Wharton's Jelly-derived mesenchymal stem cells differentiation into nerve-like cells［J］.Chin Med J，2005，118(23):1987-1993.

［24］Hoehn T，Hansmann G，Buhrer C.Therapeutic hypothermia in neonates.Review of current clinical data，ILCO Rrecommendations and suggestions for implementation in neonatal intensive care units［J］.Resuscitation，2008，78:7-12.

［25］Heba E，Abdel-Rahman E，Hoda E.Human recombinant erythropoietin in asphyxia neonatorum:Pilot trial［J］.Pediatrics，2010，125(5):1135-1142.

［26］Chen J，Sanberg PR，Li Y.Intravenous administration of human umbilical cord blood reduces behavioral deficits after stroke in rats［J］.Stroke，2001，32:2682-2688.

［27］Borlongan CV，Hadman M，Sanberg CD，et al.Central nervous system entry of peripherally injected umbilical cord blood cells is not required for neuroprotection in stroke［J］.Stroke，2004，35:2385-2389.

［28］Pimentel-Coelho PM，Magalhes ES，Lopes LM，et al.Human cord blood transplantation in a neonatal rat model of hypoxic-ischemic brain damage:functional outcome related to neuroprotection in the striatum［J］.Stem Cells Dev，2010，19:351-358.

［29］Xia G，Hong X，Chen X，et al.Intracerebral transplanta tion of mesenchymal stem cells derived from human umbilical cord blood alleviates hypoxic-ischemic brain injury in rat neonates［J］.J Perinat Med，2010，38:215-221.

［30］Lu D，Sanberg PR，Mahmood A.Intravenous administration of human umbilical cord blood reduces neurological deficit in the rat after traumatic brain injury［J］.Cell Transplant，2002，11(3):275-281.

［31］Yasuhara T，Hara K，Maki M.Intravenous grafts recapitulate the neurorestoration afforded by intracerebrally delivered multipotent adult progenitor cells in neonatal hypoxic-ischemic rats［J］.J Cereb Blood Flow Metab，2008，28:1804-1810.

［32］Riess P，Zhang C，Saatman KE.Transplanted neural stem cells survive，differentiate，and improve neurological motor function after ex-perimental traumatic brain injury［J］.Neurosurgery，2002，51:1043-1052.

［33］Zhao LR，Duan WM，Reyes M，et al.Human bone marrow stem cells exhibit neural phenotypes and ameliorate neurological deficits after grafting into the ischemic brain of rats［J］.Exp Neurol，2002，174:11-20.

［34］Chen XL，Huang RB，Tang YJ.Study on the therapeutic effects of the intravenous administration of human umbilical cord blood mensenchymal stem cells for treating focal cerebral ischemia in rats［J］.Chinese Journal of Practical Nevous disease，2007，10(1):4-7.

［35］Chen X，Li Y，Wang L.Ischemic rat brain extracts induce human marrow stromal cell growth factor production ［J］.Neuropathology，2002，22:275-279.

［36］Hess DC，Hill WD，Martin-Studdard A.Bone marrow as a source of endothelial cells and NeuN-expressing cells after stroke［J］.Stroke，2002，33:1362-1368.

［37］Rosenkranz K，Kumbruch S，Lebermann K.The chemokine SDF-1/CXCL12 contributes to the‘homing'of umbilical cord blood cells to a hypoxic-ischemic lesion in the rat brain［J］.J Neurosci Res，2010，88:1223-1233.

［38］Chen，Q，Long Y，Yuan X，et al.Protective effects of bone marrow stromal cell transplantation in injured rodent brain:synthesis of neurotrophic factors［J］.J Neurosci Res，2005，1:611-619.

［39］Mahmood A，Lu D，Chopp M.Intravenous ad-ministration of marrow stromal cells(MSCs)increases the expression of growth factors in rat brain after traumatic brain injury［J］.Neuro trauma，2004，21:33-39.

［40］Zhang P，Li J，Liu Y，et al.Transplanted human embryonic neural stem cells survive，migrate，differentiate and increase endogenous nestin expression in adult rat cortical peri-infarction zone［J］.Neuropathology，2009，29:410-421.

［41］Chen J，Li Y，Wang L，et al.Therapeutic benefit of intravenous administration of bone marrow stromal cells after cerebral ischemia in rats［J］.J Neurol Sci，2001，189:49-57.

［42］Vendrame M，Gemma C，de Mesquita D.Anti-inflammatory effects of human cord blood cells in a rat model of stroke.［J］.Stem Cells Dev，2005，14:595-604.

［43］Du Ling，Yang Hua-qiang，Wang Na，et al.Umbilical cord blood mesenchymal stem cell transplantation for treatment of a child with spinal muscular atrophy［J］.J Clini Rehabilit Tissue Eng Res，2011，15(36):6837-6840.