常見白細(xì)胞五分類技術(shù)簡介

田亮 陳玲艷

(1.山東省萊蕪市人民醫(yī)院設(shè)備科; 2.山東省萊蕪市人民醫(yī)院招標(biāo)辦公室 山東萊蕪 271100)

血球計(jì)數(shù)儀是醫(yī)院最為常見的檢驗(yàn)設(shè)備。自上世紀(jì)90年代中期以來,國外許多廠家逐步開始研制和推出具有五分類或更多項(xiàng)白細(xì)胞分析技術(shù)的全自動型血液計(jì)數(shù)儀。2000年以來隨著國內(nèi)經(jīng)濟(jì)發(fā)展,各級醫(yī)院也開始普及五分類的血球計(jì)數(shù)儀。各廠家實(shí)現(xiàn)白細(xì)胞五分類的技術(shù)各不相同,各有特色。大體有以下幾種分類技術(shù):

1 采用VCS探針技術(shù)進(jìn)行白細(xì)胞的五分類

這種技術(shù)集合3種測定方法于一體,同時(shí)對一個細(xì)胞進(jìn)行多參數(shù)分析的方法,是庫爾特公司的專利技術(shù)。其中V探針進(jìn)行體積測量,采用的是傳統(tǒng)的電阻法原理,可將體積大小差異明顯的淋巴和粒細(xì)胞分開;S探針是檢測細(xì)胞的高頻電導(dǎo)性,該技術(shù)可檢測細(xì)胞內(nèi)容物的復(fù)雜程度,辨別細(xì)胞體積相同而內(nèi)部性質(zhì)不同的細(xì)胞,可將體積大小類似的淋巴細(xì)胞和嗜堿性細(xì)胞區(qū)分開。S探針是采用激光照射細(xì)胞。激光可穿透細(xì)胞,探測細(xì)胞內(nèi)核分葉狀況和顆粒情況,通過分析光散射信息對細(xì)胞內(nèi)顆粒性進(jìn)行分析,用于單核細(xì)胞和3種粒細(xì)胞的區(qū)分。通過綜合處理3個探針檢測到的數(shù)據(jù),得到白細(xì)胞的五分類結(jié)果。

2 綜合采用阻抗法、激光散射法和熒光染色法進(jìn)行五分類

這是日本希森美康公司常用的檢測方法。直流電阻抗法用于測量細(xì)胞體積大小。激光照射產(chǎn)生的前向散射光、側(cè)向散射光和側(cè)向熒光可用于探測測白細(xì)胞體積大小、細(xì)胞內(nèi)容物的復(fù)雜情況,側(cè)向熒光可以反映細(xì)胞內(nèi)部顆粒的復(fù)雜性。試劑中增加了針對DNA/RNA染色的熒光染料,激光照射后產(chǎn)生熒光信號,和側(cè)向散射光一道繪制成二維散點(diǎn)圖進(jìn)行白細(xì)胞分類。

3 激光散射和細(xì)胞化學(xué)染色技術(shù)

采用該技術(shù)的儀器在白細(xì)胞分類上采用了雙通道設(shè)計(jì),白細(xì)胞過氧化酶通道和嗜堿細(xì)胞通道。在過氧化酶通道內(nèi)不同的粒細(xì)胞過氧化物酶含量不同,嗜酸性細(xì)胞具有最強(qiáng)的過氧化物酶,中性粒細(xì)胞含有較強(qiáng)的過氧化物酶,嗜堿粒細(xì)胞不含此酶。單核細(xì)胞含有較弱的過氧化物酶。淋巴細(xì)胞不含過氧化物酶。根據(jù)激光法散射光強(qiáng)度進(jìn)行的細(xì)胞體積的測量同時(shí)也獲得了細(xì)胞大小的信息,除了嗜堿細(xì)胞外每個類型的細(xì)胞根據(jù)它們的大小及含過氧化酶的強(qiáng)度在散點(diǎn)圖上形成分類。在嗜堿細(xì)胞通道,采用嗜堿細(xì)胞試劑可將除嗜堿細(xì)胞以外的其他白細(xì)胞膜破壞,僅剩裸核。被激光照射后就可以區(qū)分不含過氧化物酶的淋巴細(xì)胞與嗜堿粒細(xì)胞。

目前各級醫(yī)院對五分類的血球計(jì)數(shù)儀要求逐步在提高,保證正常白細(xì)胞5項(xiàng)分類結(jié)果準(zhǔn)確計(jì)數(shù)、全自動分析網(wǎng)織紅細(xì)胞等已經(jīng)成為醫(yī)院檢驗(yàn)科的基本需求。目前在血細(xì)胞形態(tài)學(xué)方面,無論是五分類還是更多的分類,甚至是具有專門幼稚細(xì)胞分析通道的儀器,仍然不能根本解決血液細(xì)胞形態(tài)學(xué)的問題,仍然不能完全以儀器分類結(jié)果徹底取代人工分類。檢驗(yàn)人員在熟練掌握儀器的性能的前提下,仍需要掌握扎實(shí)的的顯微鏡下對血細(xì)胞形態(tài)學(xué)認(rèn)知的基本功。