蛋白質(zhì)巰基亞硝基化與神經(jīng)退行性疾病

齊孟和，胡金鳳，寧 娜，云彩麟，陳乃宏

(1.天然藥物活性物質(zhì)與功能國家重點實驗室，中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院藥物研究所，北京 100050;2.內(nèi)蒙古醫(yī)學(xué)院藥學(xué)院藥理學(xué)教研室，內(nèi)蒙古呼和浩特 010059)

一氧化氮(nitric oxide，NO)是一種重要的生物信使分子，最早發(fā)現(xiàn)它的作用是作為心血管系統(tǒng)中的內(nèi)皮細胞舒血管因子。后來研究逐漸發(fā)現(xiàn)它在中樞神經(jīng)系統(tǒng)中可作為一種神經(jīng)遞質(zhì)和信號分子來發(fā)揮效能，參與多種生理、病理過程。Stamler等［1］發(fā)現(xiàn)NO及其衍生物可以通過修飾蛋白質(zhì)巰基的方式而穩(wěn)定發(fā)揮其生物活性，由此明確了蛋白質(zhì)巰基亞硝基化(S-nitrosylation，SNO):NO及其衍生物作用于蛋白質(zhì)半胱氨酸殘基(cysteine，Cys)的巰基(-SH)，使之生成-SNO。后續(xù)研究陸續(xù)發(fā)現(xiàn)了超過100種可發(fā)生SNO的底物［2］。近年來，由NO介導(dǎo)的蛋白質(zhì)SNO導(dǎo)致神經(jīng)退行性疾病發(fā)生已經(jīng)成為一個重要假說，成為研究神經(jīng)退行性疾病關(guān)注的熱點。

內(nèi)源性NO是由其前體物質(zhì)左旋精氨酸(L-arginine，LArg)與O2在一氧化氮合酶(nitric oxide synthase，NOS)催化作用下生成的:L-Arg接受還原氫(NADPH)提供的電子，并在Ca2+/CaM的協(xié)助下，發(fā)生羥化反應(yīng)生成中間產(chǎn)物N-ω-羥精氨酸，然后在NADPH和四氫生物蝶呤(BH4)的協(xié)助下，經(jīng)NOS作用，進一步氧化生成NO和L-胍氨酸(L-citrulline)［3］。體內(nèi)眾多組織都可以生成NO，這是因為組織細胞內(nèi)均存在NOS，并且大腦中NOS的活性要高于其它任何組織。目前發(fā)現(xiàn)的 NOS有 3 種亞型［4］:神經(jīng)元型(nNOS/NOS1)、誘導(dǎo)型(iNOS/NOS2)、內(nèi)皮細胞型(eNOS/NOS3)，雖然3種亞型的NOS均參與NO的產(chǎn)生，但是由于特定的細胞分布和轉(zhuǎn)錄調(diào)控，它們在病理和生理情況下的作用也是不同的。目前認為，eNOS產(chǎn)生的NO具有神經(jīng)保護作用，而nNOS和iNOS激活產(chǎn)生過量的NO則具有神經(jīng)毒性作用。

內(nèi)源性NO發(fā)揮功能途徑之一是通過蛋白質(zhì)巰基亞硝基化的方式。在神經(jīng)系統(tǒng)中，NO可促使一些特殊靶蛋白發(fā)生巰基亞硝基化，從而影響神經(jīng)元的活性和功能［5］。其中大部分蛋白質(zhì)的巰基亞硝基化會誘導(dǎo)神經(jīng)元凋亡或死亡，但是也有部分蛋白如p21Ras、Bcl-2、Caspase-3等巰基亞硝基化可阻止細胞死亡而起到神經(jīng)保護作用［6］。因此，蛋白質(zhì)巰基亞硝基化對神經(jīng)細胞存活起到損傷作用還是保護作用，需要考慮其在腦組織中的功能水平、分布位置和形成階段等綜合效應(yīng)。

神經(jīng)退行性疾病(neurodegenerative diseases)是一種以神經(jīng)元退行性變?yōu)榛A(chǔ)的慢性進行性神經(jīng)系統(tǒng)疾病，主要包括阿爾采末病(Alzheimer's disease，AD)、帕金森病(Parkinson's disease，PD)、肌萎縮性脊髓側(cè)索硬化癥(amyotrophic lateral sclerosis，ALS)及亨廷頓病(Huntington's disease，HD)等疾病?，F(xiàn)研究已發(fā)現(xiàn)在多種神經(jīng)退行性疾病患者的腦組織中可以普遍觀察到硝化蛋白的聚集，蛋白質(zhì)巰基亞硝基化修飾究竟是如何參與了這些疾病的發(fā)生、發(fā)展?這成為學(xué)者們研究的熱點，現(xiàn)將近年來研究進展概述如下。

1 蛋白質(zhì)巰基亞硝基化與AD

AD是一種以記憶力減退、認知障礙為主要特征，多發(fā)于中老年人的神經(jīng)退行性疾病，其主要的病理學(xué)特點是:β-淀粉樣肽(β-amyloid peptide，Aβ)沉積形成的老年斑(senile plaques，SP)，神經(jīng)元纖維纏結(jié)(neurofibrillary tangles，NFTs)以及特定腦區(qū)膽堿能神經(jīng)元與突觸的缺失。近期發(fā)現(xiàn)，蛋白質(zhì)巰基亞硝基化與AD的病理機制存在諸多廣泛的聯(lián)系。

1.1 發(fā)動蛋白相關(guān)蛋白1巰基亞硝基化與AD 發(fā)動蛋白相關(guān)蛋白1(dynamin-related protein 1，Drp1)是一個可以調(diào)解線粒體分裂的重要蛋白質(zhì)。Cho等［7］研究發(fā)現(xiàn)，Drp1氨基酸序列644位點的半胱氨酸殘基是發(fā)生SNO的位置，SNODrp1增加其二聚體形成和促進Drp1的GTP酶活性，這些都是線粒體裂變必須的，從而導(dǎo)致線粒體過度分裂。另外還發(fā)現(xiàn)，暴露于Aβ寡聚體的Drp1會形成SNO-Drp1而導(dǎo)致突觸丟失，這證明Aβ寡聚體也可促進Drp1的巰基亞硝基化，從而促進線粒體裂變和神經(jīng)元損傷。最近報道［8］，nNOS在Aβ的形成過程中起到淀粉樣催化劑的作用。這些研究都表明，在AD的發(fā)生發(fā)展過程中，nNOS-NO-SNO-Drp1-Aβ這個復(fù)雜的相互影響的網(wǎng)絡(luò)調(diào)控體系是對AD腦神經(jīng)毒性作用的重要機制之一。

1.2 載脂蛋白E巰基亞硝基化與AD 載脂蛋白E(apolipoprotein E，ApoE)對于遲發(fā)型AD是一個非常明顯的遺傳易感因子，同時也是對中樞神經(jīng)元結(jié)構(gòu)的維持和重建有不可替代的作用。其在腦內(nèi)有3種不同的亞型:ApoE2、ApoE3和ApoE4，3者的差異只是在氨基酸序列112與158位點上的半胱氨酸(Cys)與精氨酸(Arg)的區(qū)別，ApoE2的兩個位點均是Cys，ApoE3的兩個位點各有一個Cys和 Arg，ApoE4的兩個位點均是Arg。Abrams等［9］研究發(fā)現(xiàn)，在nNOS穩(wěn)定過表達的HEK-293細胞模型中，ApoE2與ApoE3可被巰基亞硝基化，而ApoE4不能被巰基亞硝基化。又因ApoE2純合子在人腦中罕見，所以AD患者腦內(nèi)的SNO-ApoE主要是nNOS催化ApoE3氨基酸序列112位點的半胱氨酸殘基形成的，SNO-ApoE3可降低ApoE與低密度脂蛋白受體的結(jié)合而造成低密度脂蛋白受體丟失，從而增加患遲發(fā)型AD的風(fēng)險。另外，ApoE除了脂質(zhì)代謝與神經(jīng)系統(tǒng)聯(lián)系外，還可直接促進神經(jīng)突起的延伸，這在重建受損神經(jīng)纖維中起到重要作用，當(dāng)ApoE發(fā)生巰基亞硝基化后，可能會影響其重建功能。這些提示SNO-ApoE可能在AD的病理機制中起到重要作用。

1.3 細胞周期依賴蛋白激酶巰基亞硝基化與AD 細胞周期依賴蛋白激酶(cyclin-dependent kinase，Cdk)是主要參與腫瘤細胞增殖和死亡的蛋白激酶家族，但Cdk5與其它家族成員不同，它在神經(jīng)系統(tǒng)中大量表達。目前認為，Cdk5的活性對于正常腦功能和神經(jīng)退行性疾病的發(fā)病機制都具有重要作用，Cdk5的過度興奮可使其具有神經(jīng)毒性而損傷神經(jīng)元。Qu等［10］研究發(fā)現(xiàn)，Cdk5氨基酸序列83和157位點的半胱氨酸殘基是其發(fā)生SNO的位置。此外，他們還觀察到尸檢AD患者腦內(nèi)的SNO-Cdk5水平明顯升高，但正常人的腦組織中卻沒有這種現(xiàn)象。進一步研究發(fā)現(xiàn)，SNO-Cdk5的形成會增強Aβ毒性，致使樹突棘損傷甚至缺失。因此，Cdk5的巰基亞硝基化通過使其活性增加而使Cdk5具備神經(jīng)毒性作用，提示這種異常的酶活性調(diào)節(jié)機制可能參與了AD的病理過程。

1.4 10號染色體缺失的磷酸酶及張力蛋白同源基因巰基亞硝基化與AD 10號染色體缺失的磷酸酶及張力蛋白同源基因(phosphatase and tensin homolog deleted on chromosome ten，PTEN)是新發(fā)現(xiàn)的一種抑癌基因，它支配磷酸肌醇3激酶(PI3K)/Akt信號通路，在幾乎所有神經(jīng)元中都表達，對中樞神經(jīng)系統(tǒng)的多種功能都有至關(guān)重要的作用。已經(jīng)發(fā)現(xiàn)AD患者的腦組織中p-Akt升高而PTEN減少。Kwak等［11］研究發(fā)現(xiàn)，PTEN氨基酸序列的83位點半胱氨酸殘基是SNO的主要位置，并首次發(fā)現(xiàn)NO介導(dǎo)的PTEN的巰基亞硝基化可導(dǎo)致一系列翻譯后修飾，而調(diào)節(jié)PTEN的降解。PTEN的下調(diào)會導(dǎo)致tau蛋白的過度磷酸化和聚集，表明SNO-PTEN可以間接促進AD的病理過程。

1.5 熱休克蛋白90巰基亞硝基化與AD 熱休克蛋白90(heat shock protein90，Hsp90)作為分子伴侶對細胞中眾多信號蛋白的構(gòu)象成熟和功能穩(wěn)定進行調(diào)控。以往研究發(fā)現(xiàn)，Hsp90的水平升高可以維持tau蛋白與Aβ處于溶解狀態(tài)而防止它們的聚集。最近 Martínez-Ruiz等［12］研究發(fā)現(xiàn)，內(nèi)皮細胞中的Hsp90可以被巰基亞硝基化，其氨基酸序列597位點的半胱氨酸殘基是發(fā)生SNO的位置，SNO-Hsp90抑制了它的ATP酶活性，取消了Hsp90作為分子伴侶的調(diào)控作用。因此，SNO-Hsp90可能會導(dǎo)致tau蛋白與Aβ的聚集而促使AD的發(fā)病。

目前對于AD發(fā)病有很多假說，越來越多的證據(jù)表明，一些AD相關(guān)重要蛋白質(zhì)的巰基亞硝基化參與AD的發(fā)生、發(fā)展，所以蛋白質(zhì)巰基亞硝基化可能是導(dǎo)致AD患者神經(jīng)元損傷的重要原因，但其具體機制尚不完全清楚，有待進一步明確。

2 蛋白質(zhì)巰基亞硝基化與PD

PD是另一種發(fā)病率較高的的慢性進展性神經(jīng)退行性疾病，其主要的病理特征是黑質(zhì)紋狀體的多巴胺能神經(jīng)元發(fā)生退行性病變，尸檢可見PD患者、PD動物模型腦組織中存在路易小體(Lewy body)，殘存的神經(jīng)元中出現(xiàn)較多的α-突觸核蛋白(α-synuclein)聚集［13］。硝化應(yīng)激通過使蛋白質(zhì)巰基亞硝基化的方式參與PD病理發(fā)展過程已經(jīng)成為一個重要的假說。

2.1 甘油醛-3-磷酸脫氫酶巰基亞硝基化與PD 甘油醛-3-磷酸脫氫酶(glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase，GAPDH)是一種糖酵解途徑中的酶，在細胞死亡中發(fā)揮重要作用;Siah1是一個以多種核蛋白、胞質(zhì)蛋白及膜蛋白為底物的E3泛素連接酶。Hara等［14］研究發(fā)現(xiàn)，GAPDH氨基酸序列150位點的半胱氨酸殘基是發(fā)生SNO的位置，SNO-GAPDH的形成抑制其脫氫酶活性和抑制誘導(dǎo)?；姿崦傅幕钚?，進而引發(fā)與E3泛素連接酶Siahl的相互作用，形成GAPDH-Siah1復(fù)合體，利于與SNO-GAPDH易位入核，并在Siah1定位下造成泛素化介導(dǎo)的核靶蛋白降解，最終導(dǎo)致細胞死亡。在Hara等［15］另一項研究中發(fā)現(xiàn)，經(jīng)MPTP處理的小鼠腦組織中SNO-GAPDH明顯增加，地普雷尼爾(丙炔苯丙胺)可以對抗MPTP誘導(dǎo)的毒性，同時減少紋狀體內(nèi)多巴胺能神經(jīng)元的SNO-GAPDH增加，其機制可能是通過阻止GAPDH與Siah結(jié)合，而使SNO-GAPDH不能發(fā)生核易位，進而阻止細胞死亡。由此可見，SNO-GAPDH直接參與PD發(fā)生、發(fā)展的病理過程，可以是調(diào)控PD治療的一個潛在靶點。

2.2 parkin蛋白巰基亞硝基化與PD parkin蛋白是一種E3泛素連接酶，在維持多巴胺能神經(jīng)元正常功能中發(fā)揮重要作用。它可催化特定的底物與泛素結(jié)合，即蛋白泛素化，這一過程有助于細胞移除和恢復(fù)異常折疊或破壞的蛋白質(zhì)。Chung等［16］研究發(fā)現(xiàn)，parkin蛋白氨基酸序列241和260位點半胱氨酸殘基是其發(fā)生SNO的位置，SNO-parkin失去其E3泛素連接酶的活性。另外，在缺乏線粒體復(fù)合物Ⅰ的動物模型與散發(fā)性PD及彌漫性路易小體病患者的腦組織中均出現(xiàn)SNO-parkin，這說明parkin發(fā)生巰基亞硝基化，破壞了其泛素化異常蛋白及修復(fù)受損蛋白的功能，最終導(dǎo)致神經(jīng)細胞死亡。SNO-parkin可能是導(dǎo)致PD發(fā)生的重要因素。

2.3 過氧化氧化還原蛋白巰基亞硝基化與PD 過氧化氧化還原蛋白(peroxiredoxin，Prx)是一個利用硫氧還蛋白系統(tǒng)清除胞內(nèi)過氧化物的過氧化物酶類大家族，其家族成員Prx2在神經(jīng)元中大量存在。Prx2可以將H2O2轉(zhuǎn)化為H2O和O2。Fang等［17］研究發(fā)現(xiàn)，Prx2氨基酸序列51和172位點的半胱氨酸殘基是發(fā)生SNO的位置，SNO-Prx2的形成抑制了Prx2對H2O2的清除作用，說明Prx2的巰基亞硝基化損害了它的抗氧化功能。暴露于魚藤酮和MPP+的PD細胞模型會導(dǎo)致SNO-Prx2的產(chǎn)生，加入NO抑制劑后，Prx2的巰基亞硝基化明顯降低。另外，在形成路易小體的PD患者腦組織中發(fā)現(xiàn)SNO-Prx2明顯增加，而在AD患者和正常人的腦組織中卻沒有出現(xiàn)。這些研究均提示，SNO-Prx2使其對神經(jīng)元的保護作用受到損傷，進而參與PD的病變過程。

2.4 X-連鎖凋亡抑制蛋白巰基亞硝基化與PD X-連鎖凋亡抑制蛋白(X-linked inhibitor of apoptosis protein，XIAP)是凋亡抑制蛋白IAPs家族的重要成員，具有抑制細胞凋亡作用。它有兩個特征性的結(jié)構(gòu)域:一個是BIR結(jié)構(gòu)域，具有抗caspase的活性;另一個是Ring finger(環(huán)指結(jié)構(gòu)域)，具有E3泛素連接酶的作用。由于這兩個結(jié)構(gòu)域含有多個半胱氨酸殘基，有可能成為巰基亞硝基化的潛在靶點。Nakamura等［18］研究發(fā)現(xiàn)，硝化應(yīng)激的條件下，XIAP的 BIR2-3，RING片段被巰基亞硝基化，其抗凋亡功能和E3泛素連接酶功能受到抑制，使caspase激活從而促進神經(jīng)元死亡，進一步研究發(fā)現(xiàn)，XIAP氨基酸序列450位點的半胱氨酸殘基是發(fā)生SNO的位置。然而 Tsang等［19］研究認為，NO主要修飾了BIR結(jié)構(gòu)域的半胱氨酸殘基，其抗凋亡作用受到抑制，但并未影響其作為E3泛素連接酶的活性。雖然對SNO發(fā)生的位置存在不同觀點，但是已經(jīng)發(fā)現(xiàn)PD患者和MPTP所致PD動物模型腦組織中，SNO-XIAP水平明顯升高，這說明SNOXIAP可能對PD的病理過程起到促進作用。

PD是一種發(fā)病機制不清楚的神經(jīng)退行性疾病，目前的研究表明，許多蛋白質(zhì)的表達或活性異常與PD的發(fā)病相關(guān)，而這些蛋白質(zhì)中一部分會通過發(fā)生巰基亞硝基化誘導(dǎo)神經(jīng)元損傷或凋亡，從而直接或間接導(dǎo)致PD的發(fā)生;不過也有一些蛋白質(zhì)不會發(fā)生巰基亞硝基化，因其不具有半胱氨酸殘基結(jié)構(gòu)，例如α-突觸核蛋白。蛋白質(zhì)巰基亞硝基化參與PD的具體機制尚不十分清楚，這將成為研究PD發(fā)病機制及蛋白質(zhì)巰基亞硝基化的有趣課題，有待深入。

3 蛋白質(zhì)巰基亞硝基化與其它神經(jīng)退行性疾病

ALS是一種危及生命，病理過程發(fā)展迅速的神經(jīng)退行性疾病，主要影響運動神經(jīng)元。超氧化物歧化酶(SOD1)突變體對運動神經(jīng)元具有毒性，可誘導(dǎo)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激，其在散發(fā)性ALS中常見。

蛋白質(zhì)二硫鍵異構(gòu)酶(protein disulphide isomerase，PDI)主要在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)中起到催化新生肽鏈的氧化折疊的作用。Walker等［20］研究發(fā)現(xiàn)，PDI的高表達可以降低SOD1突變體誘導(dǎo)的細胞死亡和減少SOD1突變體的聚集，同時抑制內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激。同時他們檢測了散發(fā)性ALS患者腰脊髓，發(fā)現(xiàn)了SNO-PDI的存在，雖然PDI表達增多，但SNO-PDI占了總PDI很大一部分比例，而PDI發(fā)生巰基亞硝基化使其失去了對抗SOD1突變體聚集及其誘導(dǎo)細胞死亡的作用，不能有效抑制內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激，從而加重ALS的發(fā)病。同樣的結(jié)果在SOD1G93A轉(zhuǎn)基因小鼠脊髓中也被觀察到。提示PDI發(fā)生巰基亞硝基化對ALS發(fā)病具有重要作用，可能是導(dǎo)致病變的機制之一，可以以此為切入點深入研究。

HD是一種常染色體顯性遺傳的神經(jīng)退行性疾病，主要是基底神經(jīng)節(jié)嚴重病變，表現(xiàn)為慢性不自覺的手舞足蹈。亨廷頓基因(Htt)的表達和線粒體功能障礙可能與HD的病理機制有關(guān)，突變型Htt直接損害線粒體膜電位、鈣穩(wěn)態(tài)以及軸突傳輸功能。

如前敘述，Drp1是一個可以調(diào)解線粒體分裂的重要蛋白質(zhì)，Drp1發(fā)生巰基亞硝基化后，會促進線粒體的分裂，已經(jīng)觀察到SNO-Drp1出現(xiàn)在HD患者體內(nèi)，Wang等［21］研究發(fā)現(xiàn)，突變型Htt通過抑制線粒體復(fù)合物融合來增加氧化應(yīng)激誘導(dǎo)的線粒體分裂和降低ATP水平。同時，Liot等［22］研究發(fā)現(xiàn)，融合蛋白Mfn2可降低突變型Htt誘導(dǎo)線粒體分裂以及ATP的損失和細胞死亡，這證明線粒體功能障礙對HD發(fā)病非常重要。SNO-Drp1形成后會加劇線粒體的過度分裂，提示可能是在突變型Htt和SNO-Drp1的多重作用下，線粒體嚴重受損而導(dǎo)致HD的發(fā)病。另外，GAPDH及PDI的巰基亞硝基化也與HD的發(fā)病機制密切相關(guān)，其分子機制可能與前述GAPDH及PDI參與PD或ALS的發(fā)病機制有相似之處。

4 展望

綜上所述，自從發(fā)現(xiàn)NO可以介導(dǎo)蛋白質(zhì)巰基亞硝基化修飾這一新的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑以來，其在細胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)調(diào)控中的作用逐漸為人們所重視。雖然蛋白質(zhì)巰基亞硝基化的反應(yīng)機制、調(diào)控機制及特異性還不清楚，但越來越多的證據(jù)表明，諸如 GAPDH、parkin、PDI、XIAP等特殊靶蛋白的巰基亞硝基化已經(jīng)成為神經(jīng)退行性疾病發(fā)生、發(fā)展的重要參與者，因此，對于蛋白質(zhì)巰基亞硝基化修飾的研究，將有助于確定治療神經(jīng)退行性疾病的新靶點，并為人們防治此類疾病提供新途徑，新思路。

［1］ Stamler J S，Simon D I，Osborne J A，et al.S-nitrosylation of proteins with nitric oxide:synthesis and characterization of biologically active compounds［J］.Proc Natl Acad Sci USA，1992，89(1):444-8.

［2］ Hess D T，Matsumoto A，Kim S O，et al.Protein s-nitrosylation:purview and parameters［J］.Nat Rev Mol Cell Biol，2005，6(2):150-66.

［3］ 駱慶峰，孫 蘭.神經(jīng)細胞氧化損傷與抗自由基藥物［M］//張均田，張慶柱，張永祥，主編.神經(jīng)藥理學(xué).北京:人民衛(wèi)生出版社，2008:240-1.

［3］ Luo Q F，Sun L.Nerve cells from oxidative damage and anti-radical drugs［M］//Zhang J T，Zhang Q Z，Zhang Y X.Editor-inchife.Neuropharmacology.Beijing:People's Medical Publishing House，2008:240-1.

［4］ Alderton W K，Cooper C E，Knowles R G.Nitric oxide synthases:structure，function and inhibition［J］.Biochem J，2001，357(Pt 3):593-615.

［5］ Shahani N，Sawa A.Protein S-nitrosylation:Role for nitric oxide signaling in neuronal death［J］.Biochim Biophys Acta，2011.［Epub ahead of print］

［6］ Chung K K，David K K.Emerging roles of nitric oxide in neurodegeneration［J］.Nitric Oxide，2010，22(4):290-5.

［7］ Cho D H，Nakamura T，F(xiàn)ang J，et al.S-nitrosylation of Drp1 mediates beta-amyloid-related mitochondrial fission and neuronal injury［J］.Science，2009，324(5923):102-5.

［8］ Padayachee E，Ngqwala N，Whiteley C G.Association of β-amyloid peptide fragments with neuronal nitric oxide synthase:Implications in the etiology of Alzheimers disease［J］.J Enzyme Inhib Med Chem，2011.［Epub ahead of print］

［9］ Abrams A J，F(xiàn)arooq A，Wang G.S-nitrosylation of ApoE in Alzheimer’s disease［J］.Biochemistry，2011，50(17):3405-7.

［10］ Qu J，Nakamura T，Cao G，et al.S-nitrosylation activates Cdk5 and contributes to synaptic spine loss induced by beta-amyloid peptide［J］.Proc Natl Acad Sci USA，2011，108(34):14330-5.

［11］ Kwak Y D，Ma T，Diao S，et al.NO signaling and S-nitrosylation regulate PTEN inhibition in neurodegeneration［J］.Mol Neurodegener，2010，5:49.

［12］ Martínez-Ruiz A，Villanueva L，González de Ordu?a C，et al.S-nitrosylation of Hsp90 promotes the inhibition of its ATPase and endothelial nitric oxide synthase regulatory activities［J］.Proc Natl Acad Sci USA，2005，102(24):8525-30.

［13］孫建棟，苑玉和，劉 巖.帕金森病模型大鼠中腦α-突觸核蛋白增加［J］.中國藥理學(xué)通報，2010，26(1):73-7.

［13］ Sun J D，Yuan Y H，Liu Y.Increased protein level of α-synuclein in the midbrain of Parkinson's disease rat model［J］.Chin Pharmacol Bull，2010，26(1):73-7.

［14］ Hara M R，Agrawal N，Kim S F，et al.S-nitrosylated GAPDH initiates apoptotic cell death by nuclear translocation following Siah1 binding［J］.Nat Cell Biol，2005，7(7):665-74.

［15］ Hara M R，Thomas B，Cascio M B，et al.Neuroprotection by pharmacologic blockade of the GAPDH death cascade［J］.Proc Natl Acad Sci USA，2006，103(10):3887-9.

［16］ Chung K K，Thomas B，Li X，et al.S-Nitrosylation of parkin regulates ubiquitination and compromises parkin’s protective function［J］.Science，2004，304(5675):1328-31.

［17］ Fang J，Nakamura T，Cho D H，et al.S-nitrosylation of peroxiredoxin 2 promotes oxidative stress-induced neuronal cell death in Parkinson’s disease［J］.Proc Natl Acad Sci USA，2007，104(47):18742-7.

［18］ Nakamura T，Wang L，Wong C C，et al.Transnitrosylation of XIAP regulates caspase-dependent neuronal cell death［J］.Molecular Cell，2010，39(2):184-95.

［19］ Tsang A H，Lee Y I，Ko H S，et al.S-nitrosylation of XIAP compromises neuronal survival in Parkinson’s disease［J］.Proc Natl Acad Sci USA，2009，106(12):4900-5.

［20］ Walker A K，F(xiàn)arg M A，Bye C R，et al.Protein disulphide isomerase protects against protein aggregation and is S-nitrosylated in amyotrophic lateral sclerosis［J］.Brain，2010，133(Pt 1):105-16.

［21］ Wang H，Lim P J，Karbowski M，et al.Effects of overexpression of huntingtin proteins on mitochondrial integrity［J］.Hum Mol Genet，2009，18(4):737-52.

［22］ Liot G，Bossy B，Lubitz S，et al.ComplexⅡ inhibition by 3-NP causes mitochondrial fragmentation and neuronal cell death via an NMDA-and ROS-dependent pathway［J］.Cell Death Differ，2009，16(6):899-909.