縣級結防機構開展結核桿菌檢測方法探討

賀瑜

結核病仍是嚴重威脅人類健康的重大疾病之一，結核患者的細菌學檢查不僅是發(fā)現(xiàn)傳染源的主要途徑和手段，也是結核病確診和考核療效的可靠標準。但是傳統(tǒng)方法涂片鏡檢檢出率低，培養(yǎng)法需時間長;提高痰菌陰性肺結核患者的診斷率并縮短確診時間是結核病防治工作面臨的主要問題，特別在縣級結核病防治機構急需一種快速、準確、經濟、易推廣的結核分枝桿菌檢測方法。

1 方法

目前主要實驗診斷方法有涂片鏡檢法、LJ培養(yǎng)法、快速培養(yǎng)法、免疫法、分子生物法、噬菌體法。

1.1 涂片鏡檢法 快速、便宜，但是檢出率低，漏診率高，無法鑒別死活菌。陳中秀，謝清波把痰標本先液化濃縮處理后涂片抗酸染色檢查抗酸桿菌，明顯提高抗酸桿菌陽性檢出率［1］。楊華林，譚云洪報道液基夾層杯技術檢測痰中抗酸桿菌，也是利用了離心集菌涂片的方法使涂片更均勻和痰標本陽性檢出率提高［2］。

1.2 LJ培養(yǎng)法 是結核菌檢驗的金標準 但是檢測周期超長:約8周;而且有一定比率假陽性，因各種分枝桿菌均能生長，需進一步鑒定。

1.3 快速培養(yǎng)檢測法 BACTEC 960自動培養(yǎng)儀是目前國內外常用的分枝桿菌快速檢測系統(tǒng)，有研究顯示陽性標本檢出時間最早是3～6 d［3］，該方法陽性率高，能快速檢測分枝桿菌，靈敏度高，但是需要專用儀器，專用試劑，價格高，需進一步鑒定分枝桿菌種類。翁繩鳳，劉威使用美國BD公司生產BACTECTMMicroMGITTM熒光判讀器開展分枝桿菌快速檢測，通過與羅氏法和BACTEC 960自動培養(yǎng)法的培養(yǎng)結果比較認為BACTECTMMicroMGITTM熒光判讀器分枝桿菌快速檢測法具有操作簡單快捷，陽性率高，敏感性強且經濟實用的特點［4］。

1.4 免疫學方法 優(yōu)點是快速;但是靈敏度低，有一定的假陽性和假陰性;特異性差;結果判斷帶有主觀性;缺乏有效的質控手段。韓敏，樂軍報道免疫層析法試劑盒快速鑒別結核與非結核分枝桿菌，特異性為100%;敏感性為98.9%;尤其在液體培養(yǎng)物鑒定方面具有優(yōu)勢，無需額外實驗室設備［9］。

1.5 結核桿菌DNA擴增法-PCR 診斷肺結核具有快速、特異、敏感的特點，但是需要昂貴的儀器設備，檢測成本較高，屠德華認為環(huán)介導等溫核酸擴增(LAMP)技術具有快速、敏感和特異性高的優(yōu)點［5］。

1.6 噬菌體法可檢測痰液、胸水、腹水、腦脊液、尿、骨髓等多種標本，葉佳慶，熊國亮等采用噬菌體生物擴增法技術對196例結核標本進行檢測，認為陽性率高于涂片和羅氏培養(yǎng)，該方法敏感性高、特異性強、操作簡便，對結核病臨床診斷有較高的應用價值［6］。也有文獻報道該技術敏感性、特異性不夠，且反應時間、溫度、噬菌體活性、殺菌劑濃度和混勻情況等均可影響檢測結果的準確性［7］。

1.7 目前其他新診斷技術如 超亮發(fā)光二極管(LED)熒光顯微鏡，價格較低，可提高敏感性，縮短鏡檢時間［5，8］。

2 討論

快速培養(yǎng)法和分子生物法檢測快速、靈敏度高，但是檢測成本較高;免疫學方法檢測結核抗體方便、簡單，但是靈敏度低，特異性差;涂片法直觀、簡便、價廉，仍將是結核病實驗診斷的重要手段;噬菌體法敏感性高、特異性強、操作簡便，在縣級結核病防治機構可以開展，同時檢測可從不同方面滿足臨床需要，提高肺結核的診斷水平。

［1］陳中秀，謝清波.聚集沉淀涂片與直接涂片抗酸染色法檢測抗酸桿菌的應用比較.中國防癆雜志，2009，31(4):225-226.

［2］楊華林，譚云洪，等.液基夾層杯技術檢測痰中抗酸桿菌.中國防癆雜志，2010，32(5):279-282.

［3］姚剛，張淑娟.幾種結核桿菌檢測方法的臨床應用評價.中國實驗診斷學，2007，12(11):1699-1700.

［4］翁繩鳳，劉威.分枝桿菌快速檢測方法及其應用.臨床肺科雜志，2012，17(1):73-74.

［5］屠德華.迎接結核病控制的創(chuàng)新時代.中國防癆雜志，2010，32(3):121-122.

［6］葉佳慶，熊國亮，等.噬菌體生物擴增法檢測不同標本對結核病臨床診斷的意義.實用臨床醫(yī)學，2009，10(6).

［7］唐神結，高文，主編.臨床結核病學.北京:人民衛(wèi)生出版社，2011:35-64.

［8］尚美，劉冠，趙雁林，等.發(fā)光二極管顯微鏡實驗室診斷效果評價.中國防癆雜志，2010，32(5):275-279.

［9］韓敏，樂軍.免疫層析法試劑盒快速鑒別結核與非結核分枝桿菌臨床菌株的應用價值.中國防癆雜志，2010，32(5):290-291.