某保健酒對(duì)老齡小鼠抗氧化作用的實(shí)驗(yàn)研究

向芳 張國(guó)豪 張信江

“壽星寶”保健酒是由淫羊霍、丹參、黃精等中藥和貴州茅臺(tái)酒經(jīng)現(xiàn)代工藝研制而成的一種藥酒。具有益氣活血、補(bǔ)腎防衰的功效。藥酒是中藥的一種劑型，包含有“酒的作用和藥物功效”的雙重作用。近年來(lái)中醫(yī)中藥在抗氧化方面做了大量研究，取得了較好的成果，其在抗衰老方面的作用也得到了全世界的公認(rèn)。本實(shí)驗(yàn)從衰老生化指標(biāo)的角度來(lái)探討“壽星寶”保健酒對(duì)老齡小鼠的抗氧化作用，為進(jìn)一步開(kāi)發(fā)利用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 一般材料 SPF級(jí)12月齡的昆明種小鼠，，雌雄兼用，體重45～55 g，由第三軍醫(yī)大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。

1.2 受試藥物 藥酒系以淫羊霍、丹參、黃精、葛根、紅花5種優(yōu)質(zhì)中藥材為主要原料，以貴州茅臺(tái)酒廠生產(chǎn)的酒度為53%醬香型的茅臺(tái)酒作為基酒，經(jīng)浸泡、過(guò)濾、提取制成。經(jīng)毒理學(xué)安全性評(píng)價(jià)后，作為本實(shí)驗(yàn)的受試藥物。

1.3 主要試劑與儀器 超氧化物歧化酶(SOD)試劑盒、谷胱甘肽過(guò)氧化物酶(GSH-Px)試劑盒、丙二醛(MDA)試劑盒均由南京建成生物工程研究所提供。SHHW21.420A電熱恒溫水箱、Multiskan Spectrum全波長(zhǎng)酶標(biāo)儀、FC104電子分析天平、Soniprep150超聲波分解器、Thermo Heraeus Multifuge X1R冷凍離心機(jī)，實(shí)驗(yàn)儀器均由學(xué)院中心實(shí)驗(yàn)室提供。

1.4 實(shí)驗(yàn)方法

1.4.1 實(shí)驗(yàn)步驟 80只昆明種老齡小鼠隨機(jī)分成4組:即老齡對(duì)照組，保健酒低劑量組，保健酒中劑量組及保健酒高劑量組，每組20只。保健酒樣品按人體(60kg)推薦劑量為每人每天 60 ml，設(shè)計(jì)為 5、10、20 ml/(kg·d)三個(gè)劑量組，其中 10 ml/(kg·d)相當(dāng)于人體推薦用量。老齡對(duì)照組給予等量生理鹽水。各組均采用灌胃法，2次/d，連續(xù)3個(gè)月。給藥期間各組每周重新稱重1次，按體重的變化重新計(jì)算藥酒的劑量。實(shí)驗(yàn)結(jié)束后眼眶取血并分離血清，按試劑盒測(cè)定方法測(cè)血清中SOD、GSH-Px活力和MDA含量。

1.4.2 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)軟件處理，實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以表示，各組間比較用單因素方差分析進(jìn)行檢驗(yàn)。

2 結(jié)果

保健酒對(duì)老齡小鼠血清SOD活力、GSH-Px活力、MDA含量的影響見(jiàn)表1。表1顯示:與老齡對(duì)照組相比，保健酒低、中、高劑量組SOD、GSH-Px活力均明顯升高及MDA含量明顯降低，差異具有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)，其中中、高劑量組SOD、GSH-Px活力均明顯高于低劑量組，MDA含量明顯低于低劑量組，差異有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)，而高劑量組SOD、GSH-Px活力亦高于中劑量組，MDA含量低于中劑量組，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。結(jié)果提示:“壽星寶”保健酒低、中、高劑量組均能明顯提高小鼠血清SOD活力、GSHPx活力及降低MDA含量。其中高劑量組和中劑量組功效明顯強(qiáng)于低劑量組，而高劑量組和中劑量組功效相當(dāng)。

3 討論

自由基學(xué)說(shuō)是具有代表性的衰老學(xué)說(shuō)之一。該理論認(rèn)為:機(jī)體內(nèi)時(shí)刻產(chǎn)生著自由基，但同時(shí)又存在有效的自由基清除系統(tǒng)，正常情況下機(jī)體內(nèi)自由基的產(chǎn)生和清除是處在一種動(dòng)態(tài)平衡狀態(tài)的。隨著年齡的增長(zhǎng)，機(jī)體內(nèi)抗氧化防御系統(tǒng)機(jī)能減退，造成自由基堆積而產(chǎn)生氧化應(yīng)激損傷，最終導(dǎo)致機(jī)體的衰老［1］。SOD作為機(jī)體清除自由基的主要酶類，是抗衰老研究中公認(rèn)的參考指標(biāo)之一。由于各種原因引起SOD活性降低，會(huì)使自由基過(guò)度的攻擊正常細(xì)胞，破壞各種生物膜，使細(xì)胞發(fā)生衰老、功能喪失。GSH-Px是機(jī)體內(nèi)廣泛存在的一種重要的催化過(guò)氧化氫分解的酶。它特異性催化還原型谷胱甘肽(GSH)對(duì)過(guò)氧化氫的還原反應(yīng)，能清除有害的過(guò)氧化物代謝產(chǎn)物，起到保護(hù)細(xì)胞結(jié)構(gòu)和功能完整的作用。MDA是體內(nèi)多價(jià)不飽和脂肪酸組分受活性氧作用后過(guò)氧化反應(yīng)的產(chǎn)物，由其含量可推斷體內(nèi)自由基生成的多少及自由基對(duì)機(jī)體的損傷程度。

表1 “壽星寶”保健酒對(duì)老齡小鼠血清SOD活力、GSH-Px活力、MDA含量的影響(，n=20)

表1 “壽星寶”保健酒對(duì)老齡小鼠血清SOD活力、GSH-Px活力、MDA含量的影響(，n=20)

注:與老齡對(duì)照組比較，★P＜0.01;與保健酒低劑量組比較，▲P＜0.01

組別 劑量［ml/(kg·d)］SOD活力(U/ml) GSH-Px活力(U/ml) MDA含量(nmol/ml)125.56±10.77 1126.42±75.47 69.60±10.39保健酒低劑量組 5 139.74±15.02★ 1261.80±121.95★ 57.86±11.69★保健酒中劑量組 10 160.71±14.30★▲ 1478.16±142.25★▲ 38.03±8.93★▲保健酒高劑量組 20 167.16±12.77★▲ 1546.09±129.22★▲ 32.63±6.74老齡對(duì)照組-★▲

“壽星寶”保健酒主要是選取淫羊霍、丹參、黃精、葛根、紅花幾種中藥材，加入貴州茅臺(tái)酒制成。現(xiàn)代藥理學(xué)研究表明:淫羊霍中所含的黃酮及苷類具有清除自由基的能力，其抗氧化活性較強(qiáng)［2］。丹參中的丹參酮可減少自由基的產(chǎn)生，提高抗氧化酶活性［3］。黃精中的黃精多糖可顯著提高抗氧化酶活性，增強(qiáng)機(jī)體的抗氧化能力［4］。葛根所含的葛根黃酮可提高抗氧化酶活性，增強(qiáng)其對(duì)自由基的清除能力，抑制脂質(zhì)過(guò)氧化，降低體內(nèi)MDA的生成，從而起到保護(hù)機(jī)體組織的作用［5］。紅花中有效成分紅花黃色素有抗氧化活性，具有較強(qiáng)的清除羥自由基和超氧陰離子自由基的能力，尤其對(duì)羥自由基的清除效果很好，清除率達(dá)98.31%［6］。貴州茅臺(tái)酒具有獨(dú)特的釀造工藝，除含有豐富的氨基酸和維生素外，還含有SOD及各種人體必需的微量元素，具有清除自由基、抗氧化、保護(hù)細(xì)胞的作用［7］。將上述各種具有協(xié)同作用的中藥與酒溶于一體制成藥酒，不僅配制方便、藥性穩(wěn)定、安全有效，而且酒精是一種良好的半極性有機(jī)溶劑，中藥的各種有效成分都易溶于其中，藥借酒力、酒助藥勢(shì)而充分發(fā)揮其效力，提高療效。

本實(shí)驗(yàn)采用自然衰老動(dòng)物模型，能夠很好的反應(yīng)衰老的病理生理狀態(tài)。從本實(shí)驗(yàn)結(jié)果來(lái)看，“壽星寶”保健酒能顯著提高老齡小鼠血清中的SOD、GSH-PX活力，同時(shí)亦明顯降低MDA的含量，提示“壽星寶”保健酒具有提高抗氧化酶的活性，增強(qiáng)機(jī)體抗氧化和清除自由基的能力，從而起到預(yù)防和延緩衰老的作用。

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