Nucleostemin基因在非小細(xì)胞肺癌組織中的檢測及意義

李向陽 錢如林 蔡祖勛 賈向波

肺癌是最常見的惡性腫瘤之一，我國發(fā)病率和死亡率有明顯增高的趨勢。NS是一個(gè)P53結(jié)合蛋白，表達(dá)于干細(xì)胞、變異細(xì)胞和腫瘤，對維持干細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞繼續(xù)增殖起了重要的作用［1，2］。NS表達(dá)量的增高與多種惡性腫瘤的惡性程度相關(guān)，而在NSCLC中的表達(dá)情況尚不清楚。本研究采免疫組織化學(xué)SP法檢測NS基因在NSCLC和癌旁正常組織中的表達(dá)水平及其臨床意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料 53例肺癌標(biāo)本選自河南省胸科醫(yī)院2009年3月至2010年6月手術(shù)切除并經(jīng)病理證實(shí)的組織標(biāo)本，鱗癌30例，腺癌23例。術(shù)前未行任何化療、放療。其中男31例，女22例，年齡37～76歲，平均年齡57歲。臨床分期標(biāo)準(zhǔn)按國際抗癌聯(lián)盟(UICC)TNM分期:Ⅰ期4例，Ⅱ期34例，Ⅲ期15例。按組織學(xué)分級為:高分化10，中分化25例，低分化18例;另取癌旁(＞4 cm)經(jīng)病理證實(shí)的正常肺組織作為對照。

1.2 免疫組織化學(xué) 兔抗人FHIT多克隆抗體及SP試劑盒購自北京中山生物技術(shù)有限公司。每例取原發(fā)灶癌組織、切緣正常組織，組織經(jīng)10%福爾馬林固定，石蠟包埋，4 μm連續(xù)切片，分別進(jìn)行HE染色和免疫組化SP法染色。免疫組化染色步驟嚴(yán)格按試劑盒說明進(jìn)行。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 11.0軟件包進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)，以P＜0.05具體統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

NS蛋白在NSCLC中的表達(dá)率為54.7%(29/53)顯著高于癌旁正常組織中的表達(dá)率0%(0/15)(P＜0.05)。NS蛋白腺癌組織的表達(dá)率為65.2%(15/23)明顯高于鱗癌組織的表達(dá)率46.7%(14/30)(P＜0.05);低分化組織的表達(dá)率77.8%(14/18)明顯高于高、中分化組織的表達(dá)率42.9%(15/35)(P＜0.05)，與患者TNM分期及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移無關(guān)(P＞0.05)。

3 討論

腫瘤是正常細(xì)胞經(jīng)過長時(shí)間、多階段演變而形成的一種疾病，許多基因及其蛋白質(zhì)產(chǎn)物參與了這個(gè)復(fù)雜的變化過程。研究發(fā)現(xiàn)NS通過對p53通路來調(diào)節(jié)細(xì)胞周期，進(jìn)而影響細(xì)胞的增殖分化，用RNA干擾和雜合子基因敲出實(shí)驗(yàn)使NS的表達(dá)降低，就減少了細(xì)胞的增殖，加快細(xì)胞的衰老［3］，因此被認(rèn)為是一個(gè)細(xì)胞增殖的重要調(diào)節(jié)因子。

最近一些研究已證實(shí)，在RNA和蛋白水平上，NS在多種腫瘤細(xì)胞系和原發(fā)癌上高表達(dá)，在定型終末分化細(xì)胞中不表達(dá)［4］。本研究顯示NS蛋白在NSCLC組織中的表達(dá)明顯高于癌旁正常組織。NS蛋白表達(dá)上調(diào)可能是NSCLC發(fā)生的早期事件，NS蛋白在NSCLC組織中表達(dá)的升高，使正常組織細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化的能力增強(qiáng)，細(xì)胞發(fā)生癌變、增殖能力增強(qiáng)，導(dǎo)致腫瘤的發(fā)生。提示NS蛋白表達(dá)的減少在NSCLC的發(fā)生機(jī)制中可能起一定的作用，采用纖維支氣管鏡活檢結(jié)合免疫組化技術(shù)檢測NS蛋白有助于NSCLC的早期發(fā)現(xiàn)，從而提高NSCLC的早期診斷率。

本研究結(jié)果顯示，NS蛋白的表達(dá)與NSCLC的分化程度相關(guān)，分化越低的組織，NS蛋白的表達(dá)率越高，低分化組織中NS蛋白高表達(dá)率明顯高于高、中分化組織。由于腫瘤細(xì)胞中NS蛋白的高表達(dá)，使得腫瘤細(xì)胞在細(xì)胞周期G1/S、G2/M兩個(gè)重要階段躍遷，腫瘤細(xì)胞一直處在細(xì)胞周期的循環(huán)當(dāng)中，促進(jìn)了細(xì)胞的有絲分裂，細(xì)胞不斷增殖，阻斷細(xì)胞的進(jìn)一步分化，研究發(fā)現(xiàn)NS蛋白表達(dá)率與腫瘤的分化程度呈負(fù)相關(guān)［5］?？膳c推測NS基因?qū)?xì)胞的惡性增殖發(fā)揮了重要作用，NS的高表達(dá)可作為腫瘤惡性程度的一個(gè)新指標(biāo)。有研究［6］顯示，在乳腺腫瘤組織中，TNM分期提高，NS基因表達(dá)量也提高，而我們的研究發(fā)現(xiàn)NS的表達(dá)與TNM分期無關(guān)，這一點(diǎn)還需要進(jìn)一步研究。我們發(fā)現(xiàn)，NSCLC分化低的組織，NS的表達(dá)高，提示NS在腫瘤分化過程中起重要作用，很可能與患者的預(yù)后有關(guān)，關(guān)于患者的預(yù)后情況我們正在跟蹤調(diào)查之中。

［1］劉冉錄，徐勇，張志宏，等.核干因子在前列腺癌中的表達(dá)及其臨床意義.中華男科學(xué)雜志，2008，5(14):418-422.

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［4］童秀珍，鄒外一，珊珊，等.急性白血病患者骨髓細(xì)胞 nucleostemin基因的表達(dá)與其類型、療效的關(guān)系.中國病理生理雜志，2008，24(11):2171-2174.

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