冷沉淀凝血因子制備方法的改進(jìn)

張湘 段逢時(shí)

冷沉淀凝血因子制備方法的改進(jìn)

張湘 段逢時(shí)

目的通過(guò)冷沉淀凝血因子制備方法的改變提高了產(chǎn)品質(zhì)量。方法1將新鮮冰凍血漿置于4±2攝氏度水浴箱內(nèi)融化后，虹吸出血漿，袋內(nèi)剩余40～50 ml冷沉淀凝血因子2將新鮮冰凍血漿置于(4±2)℃冰箱中過(guò)夜融化，經(jīng)離心后分離出冷沉淀凝血因子20～30 ml。結(jié)果離心法優(yōu)于虹吸法。結(jié)論本文對(duì)比離心法和虹吸法兩種方法制備冷沉淀凝血酶因子，得出離心法制備冷沉淀凝血因子質(zhì)量?jī)?yōu)于虹吸法，將冷沉淀凝血因子制備方法進(jìn)行改進(jìn)。

新鮮冰凍血漿;離心法;制備;冷沉淀凝血因子

冷沉淀是由保存期內(nèi)的新鮮冰凍血漿(FFP)。在1℃～6℃的條件下融化后，分離出沉淀在血漿中的冷不溶解物質(zhì)，凍結(jié)而成的制品。其中主要含有豐富的凝血因子Ⅷ(FⅧ)、纖維蛋白原(Fib)、血管性假血友病因子(vWF)纖維結(jié)合蛋白(Fn)等。臨床上主要用于甲型血友病，纖維蛋白原及凝血因子缺乏所致的出血性疾病的治療，以及手術(shù)、創(chuàng)傷引起的凝血機(jī)制障礙的治療。近年來(lái)，冷沉淀在深度燒傷、腫瘤手術(shù)、皮膚、黏膜疾病、角膜疾病、彌散性血管內(nèi)凝血、多發(fā)傷和手術(shù)創(chuàng)傷、自發(fā)性氣胸等醫(yī)學(xué)領(lǐng)域里得到廣泛應(yīng)用［1］。

1 制備方法

多年來(lái)，我站沿用虹吸法制備方法如下:留取200 ml全血采集時(shí)間小于7 min，400 ml全血采集時(shí)間小于13 min的血液，采集后6 h內(nèi)分離出帶有聯(lián)袋的新鮮冰凍血漿，并且即刻放入-50℃冰箱快速冰凍后，放入-20℃以下冰箱保存。冷凍24 h以上的新鮮冰凍血漿用于制備冷沉淀凝血因子。將新鮮冰凍血漿袋置于(4±2)℃水浴裝置中，另一空袋懸于水浴箱外，位置低于血漿袋，兩袋之間形成一定的高度落差。血漿融化后，隨時(shí)被虹吸至空袋中，當(dāng)融化至剩下40～50 ml血漿與沉淀物時(shí)，閉合導(dǎo)管，阻斷虹吸。將血漿與沉淀物混合，制成冷沉淀凝成凝血因子［2］。將其快速置于低溫速凍冰箱中凍結(jié)。制備過(guò)程中，由于我站沒(méi)有專(zhuān)用的水浴裝置，需要用冰塊將水浴箱內(nèi)水溫降至4℃左右，而后將新鮮冰凍血漿放入水浴箱，制備過(guò)程中水溫調(diào)控不恒定。血漿融化速度慢，導(dǎo)致制備時(shí)間長(zhǎng)。水浴虹吸法在FFP溶解的過(guò)程中，冷沉淀凝血因子有時(shí)不能形成大的凝聚團(tuán)塊，或成絮狀，不能聚集吸附在中央未融化的冰塊上或袋壁上，有部分往往由于虹吸作用而流到另一轉(zhuǎn)移空袋中，降低了FⅧ的含量［3］。

依據(jù)《血站技術(shù)操作規(guī)范》(2012版)將制備方法改進(jìn)為離心法，現(xiàn)將方法介紹如下:1.取出待制備冷沉淀的新鮮冰凍血漿，置(4±2)℃冰箱中過(guò)夜融化(時(shí)間約為12～15 h);次日，當(dāng)血漿中尚有部分冰核時(shí)即從冰箱中取出。2.將帶有冰核的血漿配平后放入溫度已調(diào)至(4±2)℃的離心機(jī)中，3000 g，離心8 min。3.離心后取出血漿放入分漿夾上擠出上清血漿部分。底部可見(jiàn)白色冷不溶物質(zhì)即為冷沉淀凝血因子。將袋內(nèi)留有20～30 ml血漿與沉淀物混合，制成冷沉淀凝血因子。將其快速置于低溫速凍冰箱中凍結(jié)。制備后經(jīng)質(zhì)控科檢驗(yàn)，由200 ml新鮮冰凍血漿制備的冷沉淀凝血因子1u:FⅧ含量＞80IU/袋，F(xiàn)ib＞150 mg/袋，容量:20～30 ml。符合GB18469-2001《全血及成分血質(zhì)量要求》。應(yīng)用此方法制備過(guò)程中，血漿在(4±2)℃冰箱中過(guò)夜融化，溫度控制恒定。同時(shí)血漿過(guò)夜融化節(jié)約了人為加速其融化時(shí)間。帶有冰核的血漿經(jīng)離心后血袋底部附著有白色片狀沉淀物質(zhì)。經(jīng)分漿夾分離血漿過(guò)程中，冷沉淀流失少，大大提高了產(chǎn)品質(zhì)量。

2 討論

《血站技術(shù)操作規(guī)程》(2012版)中規(guī)定出冷沉淀凝血因子制備方法分為虹吸法和離心法。兩種方法都能制備出符合國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)的冷沉淀凝血因子。結(jié)合我站實(shí)際，使用新鮮冰凍血漿置于(4±2)℃冰箱中過(guò)夜融化，離心法制備冷沉淀凝血因子優(yōu)于虹吸法。離心法制備提高了冷沉淀凝血因子的含量，新鮮冰凍血漿置于(4±2)℃冰箱中過(guò)夜融化節(jié)省了手工融化血漿的時(shí)間。同時(shí)也避免了購(gòu)置專(zhuān)用的水浴裝置，符合我站目前經(jīng)濟(jì)狀況。在提高冷沉淀凝血因子產(chǎn)品質(zhì)量上，除了選擇合適的制備方法外，還應(yīng)嚴(yán)格控制血液采集到成分制備的整個(gè)過(guò)程，200 ml全血采集時(shí)間＞7 min，或400 ml全血采集時(shí)間＞13 min，所采集的全血不可用于制備新鮮冰凍血漿。采集后的血液應(yīng)加強(qiáng)整個(gè)過(guò)程的冷鏈控制，改進(jìn)從采集到制備成成品的流程，盡量縮短其時(shí)間，確保在采集全血后6 h內(nèi)分離出新鮮冰凍血漿。應(yīng)當(dāng)將新鮮冰凍血漿和冷沉淀凝血因子快速凍結(jié)，最好在60 min內(nèi)將血漿中心溫度將至-30℃以下等，才能保證冷沉淀凝血因子的質(zhì)量。

［1］雷千紅，葉東，欒建鳳.冷沉淀臨床應(yīng)用的新進(jìn)展.醫(yī)學(xué)研究生學(xué)報(bào)，2004，17(1):81-82．

［2］中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部.血站技術(shù)操作規(guī)程，2012．

［3］楊文萍，關(guān)亮.淺談冷沉淀制備有效性的質(zhì)量保證.中國(guó)預(yù)防醫(yī)學(xué)雜志，2009，10(8):774-775．

136200 遼源市中心血站(張湘);遼源市婦嬰醫(yī)院(段逢時(shí))