翼狀胬肉組織VEGF、PCNA的表達(dá)及相關(guān)性研究

張靜輝 陳劍

翼狀胬肉是常見的眼表疾病之一。具體病因不明，可能與紫外線照射、煙塵等有一定關(guān)系［1］。大量研究工作表明，翼狀胬肉的發(fā)病與細(xì)胞增殖密切相關(guān)。本研究通過對(duì)翼狀胬肉組織中VEGF和PCNA的表達(dá)情況及VEGF、PCNA兩者的相關(guān)性研究，探討翼狀胬肉與細(xì)胞增殖之間的關(guān)系，為翼狀胬肉的病因和發(fā)病機(jī)制的研究提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 一般資料 35例翼狀胬肉組織標(biāo)本取自某大學(xué)附屬第一醫(yī)院眼科住院患者，單眼翼狀胬肉，病變部位均位于鼻側(cè)，其中進(jìn)行期患者16例，靜止期患者19例。其中男19例，女16例;年齡為31～74歲，平均年齡(55.80±11.80)歲。10例正常結(jié)膜組織做對(duì)照組，標(biāo)本取自角膜移植供體眼球結(jié)膜，其中男8例，女2例;年齡為35～65歲，平均年齡(55.30±8.39)歲。兩組間性別、年齡經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理無差異。所有病例均無其他角膜、結(jié)膜疾病。

1.2 方法 將切除后的翼狀胬肉組織標(biāo)本立即置于10%甲醛固定，分開頭部和體部，石蠟包埋，連續(xù)切片，切片厚度為4 μm，進(jìn)行常規(guī)HE染色結(jié)合病程鏡檢確定分期后行免疫組化檢查。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 在EXCEL中建立數(shù)據(jù)庫，應(yīng)用SPSS 13.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，年齡比較采用t-檢驗(yàn)，性別分析采用χ2-檢驗(yàn)，兩組中VEGF和PCNA的差異應(yīng)用Mann-Whitney秩和檢驗(yàn)，VEGF、PCNA兩者關(guān)系應(yīng)用Spearman等級(jí)相關(guān)分析。

2 結(jié)果

翼狀胬肉組織VEGF和PCNA的陽性表達(dá)率是88.5%，正常結(jié)膜組織中VEGF和PCNA的陽性表達(dá)率分別20%、40%;VEGF在翼狀胬肉和正常結(jié)膜中的表達(dá)差異存在統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);PCNA在翼狀胬肉和正常結(jié)膜中的表達(dá)差異存在統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。VEGF與PCNA在翼狀胬肉組織不同分期的表達(dá)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。VEGF與PCNA在翼狀胬肉組織中的表達(dá)呈正相關(guān) r=0.599，P=0.000。

3 討論

3.1 VEGF在翼狀胬肉中的表達(dá) 近年來，隨著多種腫瘤相關(guān)基因在胬肉中異常表達(dá)的發(fā)現(xiàn)，以及胬肉的某些與腫瘤類似的生物學(xué)行為，促使研究者更傾向于認(rèn)為翼狀胬肉是眼表的一種異常增生性疾病，由此更加關(guān)注對(duì)胬肉發(fā)病機(jī)制的研究［2］。VEGF是目前已知在新生血管形成過程中最重要的刺激因子［3］。本實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，翼狀胬肉組織上皮層及纖維組織均可見不同程度的增生。翼狀胬肉組織上皮細(xì)胞VEGF蛋白較正常結(jié)膜增多，陽性表達(dá)主要在上皮細(xì)胞胞漿及血管內(nèi)皮，呈棕黃色染色。VEGF在翼狀胬肉靜止期和進(jìn)行期組織中的表達(dá)有明顯差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)合本研究實(shí)驗(yàn)結(jié)果，認(rèn)為翼狀胬肉病變發(fā)展中可能由于VEGF活性受各種因素的影響，促進(jìn)了VEGF的表達(dá)，促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞的分裂增殖，從而促進(jìn)血管的增生，使正常結(jié)膜組織過度增殖及翼狀胬肉纖維血管組織向角膜的侵襲。李海燕等［4］研究報(bào)道，翼狀胬肉組織上皮中有Ki-67和VEGF的過度表達(dá)，提示翼狀胬肉組織上皮中存在增殖調(diào)控的異常，上皮細(xì)胞可能發(fā)生了轉(zhuǎn)化，上皮細(xì)胞在翼狀胬肉的發(fā)生發(fā)展中可能起著關(guān)鍵的作用。

3.2 PCNA在翼狀胬肉中的表達(dá) 本實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果顯示，PCNA在翼狀胬肉組織中的陽性表達(dá)主要在細(xì)胞核，呈淺黃色或深棕色顆粒，明顯高于正常結(jié)膜組織;PCNA在翼狀胬肉靜止期和進(jìn)行期組織中的表達(dá)有明顯差異，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，提示翼狀胬肉內(nèi)存在明顯的細(xì)胞增殖，細(xì)胞的高增殖狀態(tài)是組織增生性疾病的生物學(xué)標(biāo)志，因此可將翼狀胬肉視為一種增生性疾病，研究結(jié)果提示PCNA可能與翼狀胬肉的發(fā)生發(fā)展有關(guān)。Ueda等［5］用免疫組化方法了解 P53、P21、PCNA 在日本人及突尼斯人翼狀胬肉中的表達(dá)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)PCNA在日本人翼狀胬肉陽性率為76.2%，在突尼斯人翼狀胬肉中陽性率為63.1%，兩者差別不明顯。顏美榮等［6］研究發(fā)現(xiàn)PCNA在翼狀胬肉中的高表達(dá)和Caspase-3在翼狀胬肉中的低表達(dá)，提示細(xì)胞凋亡和增殖異常，可能與翼狀胬肉的發(fā)生、發(fā)展有關(guān)。

3.3 VEGF和PCNA在翼狀胬肉表達(dá)的相關(guān)性 本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，VEGF和PCNA在翼狀胬肉組織中都有陽性表達(dá)，明顯高于正常結(jié)膜組織，兩者之間的表達(dá)呈正相關(guān)性。隨著研究的進(jìn)展，VEGF和PCNA的陽性表達(dá)成為判斷腫瘤診斷、惡性程度、預(yù)后的重要指標(biāo)及輔助指標(biāo)，VEGF和PCNA在其他疾病中的表達(dá)已經(jīng)有較多的報(bào)道。周祥榮等［7］發(fā)現(xiàn)胃癌組織中 PCNA、VEGF的陽性表達(dá)率分別為85.0%、68.3%，VEGF和PCNA在胃癌中的表達(dá)呈正相關(guān)。楊宏剛等［8］用免疫組化SP法檢測(cè)了40例非小細(xì)胞肺癌的VEGF陽性表達(dá)率為72.5%，PCNA在非小細(xì)胞肺癌中的陽性表達(dá)率為62.5%，認(rèn)為VEGF和PCNA可以作為評(píng)價(jià)非小細(xì)胞肺癌預(yù)后的重要指標(biāo)。鄭琦等［9］用免疫組化法檢測(cè)30例翼狀胬肉組織和30例正常結(jié)膜中VEGF與PCNA的表達(dá)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)翼狀胬肉中VEGF和PCNA的陽性表達(dá)均高于正常結(jié)膜，VEGF、PCNA在翼狀胬肉中的高表達(dá)，提示翼狀胬肉組織血管活性、增殖活性增強(qiáng)。與本研究結(jié)果一致，由此可見，翼狀胬肉的形成與腫瘤組織的形成有相似之處，可能是VEGF和PCNA共同作用的結(jié)果。

4 小結(jié)

本實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果顯示，VEGF和PCNA在翼狀胬肉組織中均有陽性表達(dá)，明顯高于正常結(jié)膜組織;VEGF和PCNA在翼狀胬肉中的表達(dá)呈正相關(guān)，PCNA隨著VEGF表達(dá)強(qiáng)度的升高而升高，提示VEGF和PCNA可能通過不同的途徑共同參與了翼狀胬肉的發(fā)病過程。

［1］ 惠延年．眼科學(xué)．第6版．人民衛(wèi)生出版社，2004:89．

［2］ Tsai YY，Chang KC，Lee H，et al.Effect of p53 codon 72 polymorphism on p53 protein expression in pterygium．Clin Experiment Ophthalmology，2005，33(1):60-62．

［3］ 朱華鋒，汪春蘭，趙宇.VEGF和FGF-2在血管生成中的協(xié)同作用研究進(jìn)展.中華整形外科雜志，2006，22(1):72-75．

［4］ 李海燕，劉克蘭，袁志剛，等．翼狀胬肉中Ki-67和VEGF的表達(dá)．中國(guó)實(shí)用眼科雜志，2006，24(9):946-948．

［5］ Ueda Y，Kanazawa S，Kitaoka T，etal．Immunohistochemical study of p53，p21 and PCNA in pterygium.Acta Histochem，2001，103(2):159-65．

［6］ 顏美榮，李正賢，劉庚勛，等．PCNA、Caspase23在翼狀胬肉中的表達(dá)與細(xì)胞增殖的關(guān)系．湖南師范大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版)，2007，4(2):20-22．

［7］ 周祥榮，李忠音，楊小東，等．PCNA和VEGF在胃癌組織中表達(dá)的關(guān)系及意義 華西醫(yī)學(xué)，2009，24(10):2585-2587．

［8］ 楊宏剛劉建軍，楊敏．VEGF、PCNA在非小細(xì)胞肺癌組織中的表達(dá)及意義．新疆醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，2009，32(2):159-164．

［9］ 鄭琦，王偉剛，鄭根主．VEGF與PCNA在翼狀胬肉中的表達(dá)．中國(guó)中醫(yī)眼科雜志，2010，20(3):159-161．