肇東苜蓿田海正綠坊25%啶嘧磺隆WDG殘留高效液相色譜分析試驗研究

陳效杰 薛 勇孫 睿邵 紅 姜 成 朱德全

（1.黑龍江農(nóng)業(yè)職業(yè)技術(shù)學(xué)院 黑龍江 佳木斯 154007；2.佳木斯大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院 黑龍江 佳木斯 154007）

啶嘧磺隆屬磺酰脲類除草劑，主要抑制產(chǎn)生側(cè)鏈氨基酸、亮氨酸、異亮氨酸和纈氨酸的前驅(qū)物乙酰乳酸合成酶的反應(yīng)。海正綠坊25%啶嘧磺隆WDG為內(nèi)吸性傳導(dǎo)型除草劑，可被雜草莖葉和根部吸收，并傳導(dǎo)至整株雜草發(fā)揮作用[1]。

1 試劑與儀器

甲醇：色譜純甲醇（HPLC級試劑）；蒸餾水：新蒸二次蒸餾水；磷酸、磷酸二氫鉀：分析純；啶嘧磺隆標(biāo)準(zhǔn)品:≥98.8%；過濾器:濾膜孔徑為0.45μm；微量進(jìn)樣器:10μL；色譜工作站：N2000色譜工作站（浙江大學(xué)智達(dá)信息有限公司）；超聲波清洗器：超聲波清洗器（杭州賽智科技有限公司）；高效液相色譜儀：LC-10Tvp等度高效液相色譜儀（杭州賽智科技有限公司）；海正綠坊25%啶嘧磺隆WDG。

2 LC-10Tvp等度高效液相色譜儀操作條件

流動相：甲醇-水(pH值4.0，用磷酸二氫鉀、磷酸調(diào)節(jié))(體積比75：25)，流量：1.0mL/min，柱溫：室溫，檢測波長：228nm，進(jìn)樣體積：20mL，保留時間：海正綠坊25%啶嘧磺隆WDG 4.208min。

3 海正綠坊25%啶嘧磺隆WDG殘留高效液相色譜分析測定

3.1 高效液相色譜標(biāo)樣溶液的配制

稱海正綠坊25%啶嘧磺隆WDG0.07g(精確至0.0002g)，標(biāo)樣置于100mL容量瓶中，加入適量甲醇溶解，置此容量瓶于超聲波浴槽中約10min，取出降至室溫用甲醇定容，搖勻，再用0.45μm濾膜過濾,濾液待測[2]。

3.2 高效液相色譜試樣溶液的配制

稱海正綠坊25%啶嘧磺隆WDG0.02g(準(zhǔn)確至0.0002g)試樣置于50mL容量瓶中,加入適量甲醇溶解,容量瓶置于超聲波浴槽中約10min，取出降至室溫用甲醇定容，搖勻，再用0.45μm濾膜過濾,濾液待測。

3.3 高效液相色譜試樣溶液的測定

LC-10Tvp等度高效液相色譜儀操作條件下，LC-10Tvp等度高效液相色譜儀待基線穩(wěn)定后，連續(xù)注入數(shù)針標(biāo)準(zhǔn)溶液,計算各針相對響應(yīng)值，直至相鄰兩針海正綠坊25%啶嘧磺隆WDG的峰面積變化小于1.5%，按標(biāo)準(zhǔn)溶液、試樣溶液、試樣溶液、標(biāo)準(zhǔn)溶液的順序進(jìn)行測定[3]。

3.4 海正綠坊25%啶嘧磺隆WDG計算

海正綠坊25%啶嘧磺隆WDG殘留高效液相色譜分析測定，將測得的兩針試樣溶液和試樣溶液前后兩針標(biāo)準(zhǔn)溶液中的海正綠坊25%啶嘧磺隆WDG的峰面積分別進(jìn)行平均。以質(zhì)量分?jǐn)?shù)表示的海正綠坊25%啶嘧磺隆WDG的含量(X)按下式計算:

X（%）=(A2×m1×P)/(A1×m2) 式中：

A1—標(biāo)準(zhǔn)溶液中海正綠坊25%啶嘧磺隆WDG峰面積的平均值；

A2—試樣溶液中海正綠坊25%啶嘧磺隆WDG峰面積的平均值；

m1—海正綠坊25%啶嘧磺隆WDG標(biāo)樣的質(zhì)量（g）；

m2—海正綠坊25%啶嘧磺隆WDG試樣的質(zhì)量（g）；

P—標(biāo)準(zhǔn)品中海正綠坊25%啶嘧磺隆WDG的質(zhì)量分?jǐn)?shù)（%）[4]。

4 結(jié)果與討論

4.1 海正綠坊25%啶嘧磺隆WDG流動相的選擇

4.1.1 流動相的選擇原則

①由強到弱：一般先用90%的乙腈(或甲醇)/水(或緩沖溶液)進(jìn)行試驗，這樣可以很快地得到分離結(jié)果，然后根據(jù)出峰情況調(diào)整有機溶劑(乙腈或甲醇)的比例。②三倍規(guī)則：每減少10%的有機溶劑(甲醇或乙腈)的量，保留因子約增加3倍，此為三倍規(guī)則。這是一個聰明而又省力的辦法。調(diào)整的過程中，注意觀察各個峰的分離情況。③粗調(diào)轉(zhuǎn)微調(diào)：當(dāng)分離達(dá)到一定程度，應(yīng)將有機溶劑10%的改變量調(diào)整為5%，并據(jù)此規(guī)則逐漸降低調(diào)整率，直至各組分的分離情況不再改變[5]。

4.1.2 海正綠坊25%啶嘧磺隆WDG流動相的選擇

海正綠坊25%啶嘧磺隆WDG分析過程中，遵守流動相的選擇原則能得到好的峰形且簡便快捷，通過海正綠坊25%啶嘧磺隆WDG多次配比試驗，最后發(fā)現(xiàn)甲醇：水=70：30(V/V)的體積比為流動相，流速為1.0mL/min時,海正綠坊25%啶嘧磺隆WDG分析時間短，出峰尖銳對稱保留時間適合要求，樣品中加入磷酸二氫鉀、磷酸可使海正綠坊25%啶嘧磺隆WDG有效成分及其雜質(zhì)完全分開。

4.2 海正綠坊25%啶嘧磺隆WDG檢測波長的選擇

海正綠坊25%啶嘧磺隆WDG的判定，往往并不通過外標(biāo)法或內(nèi)標(biāo)法測定，而采用面積歸一化法結(jié)合其它測定結(jié)果。

4.2.1 海正綠坊25%啶嘧磺隆WDG樣品采用其它手段，確認(rèn)主體是所需化學(xué)結(jié)構(gòu)

4.2.2 海正綠坊25%啶嘧磺隆WDG樣品很純條件下，用頂空色譜法測定殘留溶劑

4.2.3 海正綠坊25%啶嘧磺隆WDG樣品中游離的水分，一般要求小于0.2%，在液相色譜中無法測定其含水量

4.2.4 海正綠坊25%啶嘧磺隆WDG樣品中灼燒殘渣或灰分，在液相中無法測定無機鹽類

4.2.5 海正綠坊25%啶嘧磺隆WDG樣品用離子色譜測定可能存在的一些小分子有機酸

4.2.6 海正綠坊25%啶嘧磺隆WDG樣品用其它輔助手段，如熔點、折光率、元素分析等[6]

海正綠坊25%啶嘧磺隆WDG經(jīng)全波長掃描，發(fā)現(xiàn)在228nm處海正綠坊25%啶嘧磺隆WDG有較強吸收峰，最終選定228 nm作為檢測波長。

4.3 海正綠坊25%啶嘧磺隆WDG檢測方法的線性相關(guān)性測定

海正綠坊25%啶嘧磺隆WDG在檢測波長228nm處，移取海正綠坊25%啶嘧磺隆WDG樣品質(zhì)量濃度0.750 g/L的標(biāo)樣溶液5、10、15、20、30mL稀釋至50mL，然后分別進(jìn)樣。測得海正綠坊25%啶嘧磺隆WDG的線性方程為y=668.22x+3408.8，相關(guān)系數(shù)為r=0.9998。

5 結(jié)論

海正綠坊25%啶嘧磺隆WDG的試驗分析方法，從試驗分析結(jié)果來看有定量準(zhǔn)確與重復(fù)性好及非常好的線性關(guān)系和非常高的準(zhǔn)確度及精密度，海正綠坊25%啶嘧磺隆WDG的試驗分析方法操作簡便及快速，是肇東苜蓿進(jìn)行質(zhì)量檢測理想的分析方法。

［1］http://www.yuanlin365.com/product/20621.shtml[OL].

［2］邵建果，楊俊柱.25%啶嘧磺隆水分散粒劑的反相高效液相色譜測定[J].安徽化工，2008，2:64-65.

［3］廖戎，吳軍.除草劑啶嘧磺隆原藥高效液相色譜分析[J].農(nóng)藥,2008,9:659-660.

［4］閆好民，張云楓.氟嘧磺隆高效液相色譜分析方法的研究[J].浙江化工，2012，7:33-34.

［5］http://bbs.antpedia.com/thread-21408-1-1.html[OL].

［6］http://www.360doc.com/content/11/0317/09/2867540_101863160.shtml[OL].