糞便頂管毛蚴孵化法應(yīng)注意的問題

王文忠，李雪霞，丁福先

(1.洱源縣動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，云南 洱源 671200;2.大理州動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，云南 大理 671000)

隨著血防各項(xiàng)工作的順利進(jìn)行，大理州血吸蟲病已得到有效控制，原來(lái)的重疫區(qū)變?yōu)檩p疫區(qū)，輕疫區(qū)則達(dá)傳播控制或傳播阻斷。在此情況下，監(jiān)測(cè)工作顯得尤為重要，在家畜血吸蟲病監(jiān)測(cè)工作中，最有效且常用的方法為糞便頂管毛蚴孵化法。正確掌握、使用糞便頂管毛蚴孵化法，提高陽(yáng)性檢出率，對(duì)鞏固血防成果，防止疫情反彈具有重要意義，結(jié)合實(shí)際工作，談一談實(shí)際操作中應(yīng)注意的問題。

1 糞便的采集

要求新鮮，足量，無(wú)污染。

1.1 采糞量

因每條成蟲每天產(chǎn)卵及排到腸道內(nèi)的卵數(shù)量一定，故應(yīng)根據(jù)不同畜種每日排糞量確定采糞量，以保證所采糞量?jī)?nèi)蟲卵的數(shù)量。一般牛、馬屬等大家畜采300 g，豬采100 g，羊、犬采50 g(一糞三檢時(shí)的采糞量)。

1.2 采糞方法

最好于清晨采取新排出的糞便或從家畜直腸中采取。

1.2.1 拾糞

確認(rèn)糞畜后用竹筷采取最新鮮糞便，盡可能采取帶有腸黏液或帶血糞便，做到一畜一筷，用過的竹筷經(jīng)清洗消毒后再用。

1.2.2 掏糞

當(dāng)畜群混圈分不清糞便或其他需要的情況下，須逐頭掏糞采取，每采完一頭更換一次手套，如為徒手采取，每采完一頭應(yīng)徹底洗手。

1.3 包裝送檢

糞樣用塑料袋或塑料薄膜包裝，也可用紙張、寬闊的瓜葉、菜葉、樹葉包扎，但須包扎妥當(dāng)，以免相互污染。禁用農(nóng)藥、化肥或其他物質(zhì)污染過的材料或紙杯包裝，以免影響毛蚴孵化。包裝好后應(yīng)及時(shí)附上送糞卡，送糞卡要逐項(xiàng)填明，必須用記號(hào)筆、圓珠筆或鉛筆填寫，以免受潮后字跡不清。

采好糞樣后應(yīng)及時(shí)送檢，冬季防止結(jié)冰，夏季防止日曬，在化驗(yàn)地點(diǎn)應(yīng)有專人登記，以免發(fā)生差錯(cuò)。

2 化驗(yàn)用水的要求

pH值6.8～7.2，無(wú)水蟲和化學(xué)物質(zhì)污染(包括氯氣)的澄清水。

2.1 自來(lái)水

自來(lái)水為最佳化驗(yàn)用水，因其經(jīng)過沉淀、消毒等處理后水質(zhì)已澄清且不含水蟲，pH值亦符合要求，余氯的處理可按每100 kg水中加入硫代硫酸鈉0.4～0.8 g，0.5 h后備用或存放于容器中過20 h讓余氯逸出后備用。用水時(shí)，應(yīng)在水龍頭上套雙重尼龍絹篩以再次過濾。

2.2 井水或河水

無(wú)自來(lái)水時(shí)也可用井水或河水，但須做澄清和消毒處理。澄清水質(zhì)可按每100 kg水中加入明礬5～10 g充分?jǐn)嚢?，但?yīng)注意明礬不宜過量，每次用完水后的缸底應(yīng)清洗干凈;消毒可按每100 kg水中加入含30%有效氯的漂白粉0.7 g攪拌均勻，余氯處理同上。

2.3 高溫季節(jié)用水處理

水溫高時(shí)，毛蚴孵出速度較快，為防止在洗糞、換水過程中將毛蚴倒掉，影響陽(yáng)性檢出率，必須準(zhǔn)備1.0% ～1.2%的食鹽水，代替洗糞用水以抑制毛蚴過早孵出被倒掉，但是灌瓶的孵化用水應(yīng)改用清水。

2.4 低溫季節(jié)用水處理

水溫低于15℃時(shí)，灌瓶及頂管用水須加熱處理，水溫以33℃為宜，通過該處理，孵化瓶?jī)?nèi)水溫可達(dá)到28℃左右。

3 檢驗(yàn)

大面積普查時(shí)應(yīng)做到一糞三檢，即1個(gè)糞樣取3個(gè)檢查量做3個(gè)同樣檢查，而不是把1個(gè)檢查量放在3個(gè)孵化瓶?jī)?nèi)，或者把洗好的1個(gè)檢查量分成3個(gè)瓶?jī)?nèi)觀察。在已達(dá)傳播控制或傳播阻斷地區(qū)，則應(yīng)用三糞六檢方法檢測(cè)。

所采樣品應(yīng)盡快檢完，最遲應(yīng)于當(dāng)天檢完，因糞便長(zhǎng)時(shí)間放置后易孵出其它小蟲或糞蟲而影響觀察(尤其在夏季氣溫高時(shí))。此外，在檢測(cè)過程中還應(yīng)注意以下環(huán)節(jié)。

3.1 洗糞

洗糞應(yīng)徹底，力求把血吸蟲卵清洗下來(lái)。以銅篩杯濾糞時(shí)，不能隨意一攪拌就把糞渣倒去，應(yīng)該是三上三下地進(jìn)行淘洗，即淘洗1次后，取出濾干，再淘洗，再取出濾干，這樣每個(gè)樣品上下反復(fù)3次，就比較徹底。以尼龍絹篩淘洗時(shí)，應(yīng)順篩口圓周形緩慢沖水，以把蟲卵集到篩底。

3.2 灌瓶

灌瓶時(shí)應(yīng)把尼龍絹篩內(nèi)蟲卵徹底沖洗下來(lái)灌入瓶中，加蓋時(shí)應(yīng)注意接口是否漏水并及時(shí)處理。

3.3 安頂管

頂管必須洗漂干凈以利觀察;頂管膠套老化松弛時(shí)應(yīng)及時(shí)更換，用膠布代替膠套時(shí)應(yīng)注意松緊適度，以免頂管水漏出;頂管水不宜太滿或過少，以4/5為宜，以利于觀察;安頂管前須在管口裝一層均勻薄的脫脂棉，以既能擋住糞渣又不影響毛蚴上游為宜。

3.4 孵化

血吸蟲卵的孵化須保持一定的溫度(22～26℃)及光線，故環(huán)境溫度低于20℃時(shí)須有保持20～25℃環(huán)境溫度的條件，最好采用恒溫光照培養(yǎng)箱，無(wú)培養(yǎng)箱時(shí)須在有取暖設(shè)備的房間內(nèi)孵化。

3.5 觀察毛蚴

毛蚴體小(長(zhǎng)0.078～1.120mm，寬0.03～0.04mm)，難以觀察，特別在輕流行區(qū)，大部分1個(gè)糞樣僅孵出1～2個(gè)毛蚴，故觀察毛蚴應(yīng)間隔一定時(shí)間，多次觀察，且每次每瓶的觀察時(shí)間至少在2min以上。

3.5.1 觀察時(shí)間

牛、馬、羊、犬糞在進(jìn)孵后1、3、5 h各觀察1次，豬糞在進(jìn)孵后5、8 h各觀察1次;陰性者8 h后再觀察1次;不能改為在第5個(gè)小時(shí)一次觀察。

3.5.2 觀察方法

觀察毛蚴時(shí)應(yīng)在光線充足的地方進(jìn)行，為便于觀察，可襯黑色背景并使用放大鏡。觀察時(shí)應(yīng)注意與糞蟲、水蟲等其它小蟲相區(qū)別，毛蚴呈梭形，針尖大小，灰白色，折光性強(qiáng)，和水中其它小蟲明顯不同處是多在近水面(頂管上1/3)作水平或斜向直線運(yùn)動(dòng)，且只有在觸到頂管壁后才會(huì)折返(不一定立即折返，有時(shí)在管壁稍作停留)?？梢蓵r(shí)可用滴管將蟲吸出置于載玻片上鏡檢鑒別。為便于觀察，可加一滴碘溶液將其殺死，10×10顯微鏡下可見毛蚴前部寬，中間有個(gè)頂突，兩側(cè)對(duì)稱，后漸窄，周身有纖毛。

綜上所述，在整個(gè)操作過程中，應(yīng)緊緊圍繞日本血吸蟲生活史蟲卵及毛蚴階段的生物學(xué)特性，充分把握好以上幾個(gè)環(huán)節(jié)，以提高陽(yáng)性檢出率。