清潔級成年SD 大鼠肝臟自發(fā)病變的組織病理學(xué)研究

黃佳寧，陳秀錦，林 澍

（1.福建省疾病預(yù)防控制中心，福建福州350001；2.福建省實驗動物質(zhì)量檢測中心，福建福州350001；3.福州出入境檢驗檢疫局，福建福州350003）

SD大鼠常用于毒理學(xué)、營養(yǎng)學(xué)、內(nèi)分泌學(xué)、傳染病、心血管疾病、神經(jīng)病學(xué)、腫瘤等醫(yī)學(xué)研究［1-2］。肝臟是大鼠重要的代謝器官，也是許多化學(xué)、物理、生物致病因素的靶器官之一，大鼠肝臟病理變化的觀察是許多醫(yī)學(xué)研究觀察指標(biāo)之一。自發(fā)性疾病指實驗動物未經(jīng)任何有意識的人工處理，在自然情況下所發(fā)生的疾?。?］。對大鼠肝臟自發(fā)病理變化的了解，可以幫助我們更好地識別醫(yī)學(xué)研究中各種肝臟病理變化的成因，對研究結(jié)果評價起到了重要作用。目前對SD大鼠肝臟自發(fā)病理的研究報告幾乎沒有，此項研究對本實驗室2007年-2010年3 000只清潔級SD大鼠肝臟自發(fā)病理變化資料進(jìn)行了分析總結(jié)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 實驗動物 上海斯萊克實驗動物有限責(zé)任公司提供的清潔級SD大鼠3 000只，雌雄各半，4周齡，許可證號：SCXK（滬）2007-0005。

1.1.2 飼養(yǎng)環(huán)境 福建省疾病預(yù)防控制中心SPF級動物實驗室，許可證號：SYXK（閩）2007-0006。

1.1.3 儀器 SHANDON EXCELSIOR全自動密封脫水機，BM-VI生物組織冷凍包埋機，SHANDON Finesse325石臘切片機，CS-IV攤片烤片機，電熱鼓風(fēng)干燥箱，OLYMPUS BX-51研究型生物顯微鏡。

1.1.4 試劑 100mL／L甲醛溶液，二甲苯，無水乙醇，蘇木素，伊紅，硫酸鋁鉀，碘酸鈉，丙三醇，冰醋酸，濃鹽酸，石蠟。

1.2 方法

1.2.1 實驗動物的處理 試驗期間動物單籠喂養(yǎng)，自由進(jìn)食飲水，喂養(yǎng)30d（8周齡）后，頸椎脫臼處死，取出肝臟，100mL／L甲醛溶液固定，常規(guī)石蠟切片，HE染色，顯微鏡觀察。

1.2.2 試驗數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析 試驗數(shù)據(jù)用SPSS軟件進(jìn)行卡方檢驗，當(dāng)T＜5時，選用Fisher精確檢驗。

2 結(jié)果

2.1 肝臟病理變化鏡檢特點

2.1.1 細(xì)胞水腫 包括細(xì)胞腫脹、顆粒變性及氣球變性，肝細(xì)胞腫大，胞質(zhì)疏松，可出現(xiàn)紅染顆粒狀物質(zhì)，隨著肝細(xì)胞水腫程度增大，細(xì)胞體積增大明顯，胞質(zhì)幾乎完全透明，細(xì)胞由多角形變?yōu)閳A形（圖1）。

2.1.2 脂肪變性 肝細(xì)胞胞質(zhì)中出現(xiàn)大小不等的球形脂滴，呈空泡狀，大者可充滿整個細(xì)胞而將胞核擠至一側(cè)（圖2）。

2.1.3 炎癥細(xì)胞浸潤 在肝小葉和或匯管區(qū)出現(xiàn)以慢性炎癥細(xì)胞為主的小灶性炎癥細(xì)胞浸潤（圖3）。

2.1.4 肝竇擴張 肝臟充血，肝竇呈現(xiàn)輕到中度擴張（圖4）。

2.1.5 灶性壞死 肝細(xì)胞呈小灶性凝固性壞死，可伴或不伴炎細(xì)胞浸潤（圖5）。

2.1.6 肝內(nèi)膽管增生 肝內(nèi)膽管輕到中度增生，排列整齊，細(xì)胞無明顯異型性（圖6）。

2.1.7 囊腫 為孤立性肝囊腫，囊內(nèi)含少量液體（圖7）。

2.1.8 肝細(xì)胞癌 癌細(xì)胞條索狀排列紊亂，核異型明顯，核增大，深染，核仁突出，胞漿嗜酸性較弱（圖8）。

圖1 細(xì)胞水腫（HE，200×）Fig.1 Cell edema（HE，200×）

圖2 脂肪變性（HE，200×）Fig.2 Fat degeneration（HE，200×）

圖3 炎癥細(xì)胞浸潤（HE，200×）Fig.3 Inflammatory cell infiltration（HE，200×）

圖4 肝竇擴張（HE，200×）Fig.4 Sinus hepaticus expansion（HE，200×）

圖5 灶性壞死（HE，200×）Fig.5 Focal necrosis（HE，200×）

圖6 肝內(nèi)膽管增生（HE，200×）Fig.6 Intrahepatic bile duct hyperplasia（HE，200×）

圖7 囊腫（HE，200×）Fig.7 Cyst（HE，200×）

圖8 肝細(xì)胞癌（HE，200×）Fig.8 Hepatocellular carcinoma（HE，200×）

2.2 肝臟病理變化的發(fā)生率

8周齡SD大鼠肝細(xì)胞水腫發(fā)生率為4.20%，脂肪變性發(fā)生率為9.77%，炎細(xì)胞浸潤發(fā)生率為12.30%，肝竇擴張發(fā)生率為3.07%，灶性壞死發(fā)生率為0.23%，肝內(nèi)膽管增生發(fā)生率為0.07%，肝囊腫發(fā)生率為0.10%，肝細(xì)胞癌發(fā)生率為0.03%（表1）。

2.3 肝臟病理變化的無性別差異

由表2可見，肝臟病理變化的性別差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。

表1 SD大鼠肝臟自發(fā)病理變化Table 1 The spontaneous histopathological lesions in livers of SD rats

表2 不同性別SD大鼠肝臟自發(fā)病理變化Table 2 The spontaneous histopathological lesions in livers of SD rats between different gender

3 討論

SD大鼠作為醫(yī)學(xué)研究最常應(yīng)用的實驗動物之一，對SD大鼠肝臟自發(fā)病理變化的總結(jié)可以幫助我們更好地判別醫(yī)學(xué)研究中大鼠肝臟病理變化是自發(fā)還是某醫(yī)學(xué)研究過程引起的，對正確評價研究結(jié)果起到了重要作用［4-6］。大鼠壽命為2.5年～3年，一般20d～21d斷奶，6周齡～8周齡性成熟，本研究采用8周齡大鼠即為成年大鼠［7-8］。

本研究觀察到的成年SD大鼠肝臟的自發(fā)病理變化包括細(xì)胞水腫、脂肪變性、炎細(xì)胞浸潤、肝竇擴張、灶性壞死、肝內(nèi)膽管增生、囊腫、肝細(xì)胞癌等。其中炎細(xì)胞浸潤、脂肪變性、細(xì)胞水腫、肝竇擴張發(fā)生率較高。細(xì)胞水腫是細(xì)胞損傷中最早出現(xiàn)的改變，系因線粒體受損，ATP生成減少，細(xì)胞膜Na＋-K＋泵功能障礙，導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)鈉離子和水過多聚積。細(xì)胞水腫常由感染、缺氧、中毒引起［9］。本研究中考慮到飼養(yǎng)條件，缺氧、中毒可能性小，肝細(xì)胞水腫可能主要由感染引起。本研究中脂肪變性可能由營養(yǎng)過?；驙I養(yǎng)不良引起。發(fā)生機制可能是：①肝細(xì)胞質(zhì)內(nèi)脂肪酸增多，如高脂飲食或營養(yǎng)不良時，體內(nèi)脂肪組織分解，過多的游離脂肪酸經(jīng)由血液入肝；②脂蛋白、載脂蛋白減少：營養(yǎng)不良時，肝細(xì)胞中脂蛋白、載脂蛋白合成減少，細(xì)胞輸出脂肪受阻而堆積于細(xì)胞內(nèi)［9］。慢性炎癥細(xì)胞浸潤考慮為病源微生物的持續(xù)存在，灶性壞死也是感染的表現(xiàn)。肝竇擴張各例基本未伴有明顯炎癥細(xì)胞浸潤及纖維組織增生，慢性右心衰可排除，經(jīng)分析與處死過程中動物掙扎有關(guān)。肝內(nèi)膽管增生、囊腫、肝細(xì)胞癌發(fā)生率極低，考慮為動物基因突變等原發(fā)因素的可能性較大。

肝臟常見自發(fā)病理變化的性別差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），說明成年SD大鼠肝臟自發(fā)病理變化不隨性別改變。本文為以成年SD大鼠為實驗動物的醫(yī)學(xué)研究提供了一定基礎(chǔ)資料。

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