復(fù)合微生態(tài)制劑與氟苯尼考對(duì)肉雛雞免疫器官指數(shù)和組織變化的影響

張建梅 李 丹 徐海燕 辛國(guó)芹 汪官保 谷 巍

(山東寶來(lái)利來(lái)生物工程股份有限公司，山東泰安271000)

飼用抗生素的濫用嚴(yán)重干擾了整個(gè)養(yǎng)殖業(yè)的健康可持續(xù)發(fā)展。據(jù)統(tǒng)計(jì)，2007年美國(guó)有占生產(chǎn)總量70%的抗生素作為添加劑添加到飼料中。由于濫用飼用抗生素所造成的細(xì)菌耐藥性、農(nóng)產(chǎn)品藥物殘留、疾病難防難控、大規(guī)模疫病群發(fā)和動(dòng)物免疫力下降、疾病易感性上升等一系列問(wèn)題引起了全球公共衛(wèi)生組織的高度關(guān)注。2010年，世界衛(wèi)生組織發(fā)出了“combat with drug resistance，no action today，no cure tomorrow”的呼吁，越來(lái)越多的發(fā)達(dá)國(guó)家和地區(qū)全面禁止了飼用抗生素的使用。然而在中國(guó)，由于現(xiàn)代畜牧業(yè)發(fā)展相對(duì)落后、養(yǎng)殖模式比較復(fù)雜、養(yǎng)殖戶(hù)認(rèn)識(shí)不到位以及相關(guān)的立法和規(guī)章制度不成熟，導(dǎo)致中國(guó)廣大養(yǎng)殖戶(hù)對(duì)飼用抗生素的弊端缺少正確的認(rèn)識(shí)，認(rèn)為養(yǎng)殖離不開(kāi)飼用抗生素，認(rèn)為抗生素不但具有防病功能，還具有促生長(zhǎng)的功效，忽視了飼用抗生素所帶來(lái)的弊端，導(dǎo)致疫病越來(lái)越嚴(yán)重，越來(lái)越難防控，結(jié)果進(jìn)入“越用藥越厲害、越厲害越用藥”的惡性循環(huán)。

而今，越來(lái)越多的人錯(cuò)誤地認(rèn)為，預(yù)防疾病應(yīng)該從幼齡動(dòng)物開(kāi)始,動(dòng)物一出生就給它用開(kāi)口藥清理凈化，這樣可以讓動(dòng)物以后少得病，其實(shí)不然。幼齡動(dòng)物一出生正是快速建立腸道菌群平衡、建立自身免疫系統(tǒng)的重要階段,而抗生素在這時(shí)使用,正是殺滅有益菌的元兇,會(huì)嚴(yán)重干擾幼齡動(dòng)物腸道菌群平衡的建立。而越來(lái)越多的研究表明,抗生素的使用會(huì)抑制免疫器官的發(fā)育,降低免疫細(xì)胞的活性。因此，抗生素作為開(kāi)口藥是不科學(xué)的。預(yù)防動(dòng)物得病，必須從幼齡動(dòng)物的生理特點(diǎn)出發(fā)，而增強(qiáng)幼齡動(dòng)物的免疫力，提高其抗病力，通過(guò)啟動(dòng)幼齡動(dòng)物自身的免疫系統(tǒng)達(dá)到防病抗病的目的是首選。研究表明，益生素不僅具有促進(jìn)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)消化吸收的功能，還具有增強(qiáng)免疫力和抗感染的功效。本研究以復(fù)合微生態(tài)制劑與飼用抗生素氟苯尼考在肉雛雞上進(jìn)行試驗(yàn)，以期為健康養(yǎng)殖業(yè)提供參考。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

飼用抗生素為市售氟苯尼考。

復(fù)合微生態(tài)制劑是由益生菌及其代謝產(chǎn)物、維生素A、維生素C、多種電解質(zhì)、載體等成分組成。其中益生菌由乳酸菌和芽孢桿菌組成，活菌總數(shù)≥5×108cfu/g。

雞大腸桿菌O26為實(shí)驗(yàn)室試驗(yàn)自行分離鑒定后保存的菌株。

160只1日齡的黃羽肉雞，購(gòu)自泰安市東岳種禽公司。全價(jià)飼料采用玉米-豆粕型飼糧，其配制參照NRC（1994），基礎(chǔ)飼糧組成及營(yíng)養(yǎng)水平見(jiàn)表1。

1.2 試驗(yàn)設(shè)計(jì)及飼養(yǎng)管理

將體重均勻、健康狀況基本相同的160只1日齡黃羽肉雞隨機(jī)分成4個(gè)組，每組2個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)20只，分別為對(duì)照組（CK）、復(fù)合微生態(tài)制劑組（717）、氟苯尼考正常劑量組（FB1×組，氟苯尼考的添加量為3 g/20 kg水）、氟苯尼考10倍劑量組（FB 10×組，氟苯尼考的添加量為3 g/kg水），以不含抗生素的全價(jià)飼料為基礎(chǔ)日糧。717組按使用說(shuō)明飲用產(chǎn)品，即：第1～4 d按0.1 g/只的量飲水添加，第5～7 d按0.2 g/只的量飲水添加；抗生素組每天分兩次飲用，每次3 h，連飲5 d。對(duì)照組自由飲水，各組皆自由采食，其它飼養(yǎng)條件相同。試驗(yàn)期為9 d。

表1 基礎(chǔ)飼糧組成及營(yíng)養(yǎng)水平（干物質(zhì)基礎(chǔ)）

1.3 雞大腸桿菌O26的接種方法

雞大腸桿菌O26于肉湯培養(yǎng)基中，37℃、180 r/min，培養(yǎng)24 h，各組于出生后24 h口腔灌服接種雞大腸桿菌 O26（1×108cfu/只）。

1.4 樣品采集及檢測(cè)指標(biāo)

1.4.1 免疫器官指數(shù)的測(cè)定

分別于3、6、9 d隨機(jī)選取各試驗(yàn)組肉雛雞10只，心臟打氣法處死，立即解剖并分離脾臟和法氏囊，稱(chēng)重，計(jì)算免疫器官指數(shù)。

免疫器官指數(shù)（mg/g）=免疫器官重量/活體重。

1.4.2 組織切片觀(guān)察病理變化

各組分別于9 d隨機(jī)選取肉仔雞10只，心臟打氣法處死，無(wú)菌分離小腸（回盲竇前后5 cm）、脾臟和法氏囊，bouin's液中保存，石蠟切片法，顯微照相法觀(guān)察組織病理變化。

1.5 數(shù)據(jù)處理

試驗(yàn)數(shù)據(jù)采用SPSS13.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，采用One-way ANOVA進(jìn)行方差分析，LSD法進(jìn)行組間多重比較，結(jié)果均以“平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差”表示。

2 結(jié)果與分析

2.1 益生菌開(kāi)口制劑和抗生素開(kāi)口藥對(duì)肉雛雞免疫器官指數(shù)的影響

2.1.1 益生菌開(kāi)口制劑和抗生素開(kāi)口藥對(duì)肉雛雞脾臟指數(shù)的影響（見(jiàn)表2）

表2 復(fù)合微生態(tài)制劑和抗生素對(duì)肉雛雞脾臟指數(shù)的影響(mg/g)

由表2可知，3日齡717組脾臟指數(shù)最高，F(xiàn)B 1×組和FB 10×組均低于對(duì)照組和717組，但各組脾臟指數(shù)差異不顯著（P＞0.05）。隨著肉雛雞日齡的增加，脾臟迅速發(fā)育，6日齡時(shí),各組脾臟指數(shù)均較3日齡時(shí)明顯提高，但各組之間仍然沒(méi)有表現(xiàn)出顯著差異(P＞0.05)。隨著抗生素和益生菌的不斷使用，9日齡時(shí)，F(xiàn)B 1×組和FB 10×組脾臟指數(shù)較6日齡分別降低27.4%和40%；對(duì)照組和717組脾臟指數(shù)較6日齡分別提高5.9%和5.4%，9日齡對(duì)照組和717組脾臟指數(shù)顯著高于 FB 1×組和 FB 10×組（P＜0.05），其中 717組脾臟指數(shù)最高，F(xiàn)B 10×組最低。

2.1.2 復(fù)合微生態(tài)制劑和抗生素對(duì)肉雛雞法氏囊指數(shù)的影響（見(jiàn)表3）

表3 復(fù)合微生態(tài)制劑和抗生素對(duì)肉雛雞法氏囊指數(shù)的影響(mg/g)

從表3可以看出，3日齡對(duì)照組法氏囊指數(shù)最高，F(xiàn)B 10×組最低，但各組脾臟指數(shù)差異不顯著 (P＞0.05)。6日齡時(shí)各試驗(yàn)組法氏囊指數(shù)較3日齡均有所提高，對(duì)照組、717組、FB 1×組和FB 10×組較3日齡分別提高19.7%、27.6%、13.0%、21.2%，其中717組脾臟指數(shù)較3日齡提高最多，6日齡717組法氏囊指數(shù)分別高出對(duì)照組、FB 1×組和FB 10×組4.3%、23.0%和19.6%，其中717組與FB 1×組、FB 10×組相比差異顯著（P＜0.05）；9日齡時(shí)，717組法氏囊指數(shù)顯著高于其它 3 組(P＜0.05),分別高出對(duì)照組、FB 1×組和 FB 10×組14.4%、19.2%、25.9%，F(xiàn)B 10×組最低。

試驗(yàn)結(jié)果表明,復(fù)合微生態(tài)制劑對(duì)肉雛雞免疫器官的發(fā)育有促進(jìn)作用,尤其是對(duì)法氏囊指數(shù)的促進(jìn)效果最明顯,但復(fù)合微生態(tài)制劑組與對(duì)照組相比脾臟指數(shù)差異不顯著,這可能與生長(zhǎng)前期脾臟不是主要的免疫器官有關(guān)。飼用抗生素氟苯尼考作為開(kāi)口藥對(duì)免疫器官的影響結(jié)果表明,飼用抗生素氟苯尼考開(kāi)口藥對(duì)免疫器官的生長(zhǎng)具有明顯的抑制作用,并且隨著飼喂時(shí)間的延長(zhǎng)和飼喂劑量的增大,抑制效果越來(lái)越明顯。

2.2 益生菌開(kāi)口制劑和抗生素開(kāi)口藥對(duì)肉雛雞免疫器官組織變化的影響

2.2.1 益生菌開(kāi)口制劑和抗生素開(kāi)口藥對(duì)肉雛雞法氏囊組織的影響（見(jiàn)圖1）

法氏囊組織切片結(jié)果表明，空白對(duì)照組在感染大腸桿菌后，個(gè)別法氏囊小結(jié)髓質(zhì)內(nèi)的細(xì)胞有缺失和受損現(xiàn)象。與空白對(duì)照組相比，F(xiàn)B 1×組和FB 10×組對(duì)肉雛雞法氏囊的發(fā)育有明顯的抑制作用，使用氟苯尼考組法氏囊小結(jié)變得瘦長(zhǎng)，淋巴細(xì)胞數(shù)量少、細(xì)胞排列疏松，皮質(zhì)和髓質(zhì)空隙變大，呈現(xiàn)出明顯的萎縮現(xiàn)象，并且FB 10×組較FB 1×組法氏囊受損更嚴(yán)重。復(fù)合微生態(tài)制劑組法氏囊小結(jié)較對(duì)照組和氟苯尼考組發(fā)育好，法氏囊小結(jié)比較飽滿(mǎn)，淋巴細(xì)胞排列均勻，皮質(zhì)和髓質(zhì)結(jié)合緊密。

圖1 益生菌開(kāi)口制劑和抗生素開(kāi)口藥對(duì)肉雛雞法氏囊組織的影響

2.2.2 益生菌開(kāi)口制劑和抗生素開(kāi)口藥對(duì)肉雛雞脾臟組織的影響（見(jiàn)圖2）

從脾臟的組織切片可以看出，對(duì)照組脾臟在感染大腸桿菌后，有一定的炎癥反應(yīng)和少量的紅細(xì)胞滲出現(xiàn)象，而飼喂復(fù)合微生態(tài)制劑之后，這種現(xiàn)象得到明顯改善，脾臟內(nèi)沒(méi)有明顯肉眼可見(jiàn)的散在紅細(xì)胞存在，淋巴細(xì)胞數(shù)量多且排列均勻。而飼喂氟苯尼考組，脾臟實(shí)質(zhì)受到明顯的影響。

圖2 益生菌開(kāi)口制劑和抗生素開(kāi)口藥對(duì)肉雛雞脾臟組織的影響

正常劑量的氟苯尼考可見(jiàn)淋巴細(xì)胞明顯減少現(xiàn)象，同時(shí)有紅細(xì)胞滲出，而飼喂高劑量即10倍的氟苯尼考，則不僅有細(xì)胞的減少，還呈現(xiàn)出有大量的紅細(xì)胞滲出現(xiàn)象。

試驗(yàn)結(jié)果表明，抗生素對(duì)肉雛雞免疫器官組織的影響比較明顯，能夠抑制法氏囊的正常發(fā)育，導(dǎo)致一些炎癥的發(fā)生，而復(fù)合微生態(tài)制劑與抗生素氟苯尼考相比，具有明顯的優(yōu)勢(shì)，能夠促進(jìn)免疫器官的正常發(fā)育。

3 討論

法氏囊是禽類(lèi)特有的中樞免疫器官，能產(chǎn)生大量的漿細(xì)胞和各種特異性的B細(xì)胞，脾臟則是禽類(lèi)最大的外周免疫器官，是產(chǎn)生抗體的主要器官，參與全身細(xì)胞免疫和體液免疫，免疫器官的發(fā)育狀況直接決定著機(jī)體的免疫水平。免疫器官指數(shù)相對(duì)增加，說(shuō)明機(jī)體的免疫水平增強(qiáng)。張春揚(yáng)等(2002)研究表明，益生菌制劑能顯著提高AA肉雞免疫器官的生長(zhǎng)發(fā)育，28 d可分別提高脾臟、法氏囊指數(shù)18.47%、6.42%。本試驗(yàn)中，9日齡時(shí)復(fù)合微生態(tài)制劑組的脾臟指數(shù)最高，與對(duì)照組相比差異不顯著，這可能與雛雞自身的免疫特點(diǎn)，即法氏囊在生長(zhǎng)前期發(fā)揮主要的免疫功能有關(guān)。復(fù)合微生態(tài)制劑組脾臟指數(shù)與氟苯尼考正常劑量組和氟苯尼考10倍劑量組差異顯著（P＜0.05）。9日齡時(shí)法氏囊指數(shù)的變化與脾臟指數(shù)變化一致，復(fù)合微生態(tài)制劑組法氏囊指數(shù)顯著高于其它3組（P＜0.05），分別高出對(duì)照組、FB 1×組和 FB 10×組 14.4%、19.2%、25.9%，F(xiàn)B 10×組最低?？股貙?duì)免疫系統(tǒng)的抑制作用也早已引起廣大學(xué)者的關(guān)注，本試驗(yàn)更加證實(shí)飼用抗生素氟苯尼考的添加能夠引起脾臟和法氏囊的發(fā)育不良，而抗生素的不規(guī)范高劑量使用更是嚴(yán)重抑制了對(duì)肉雛雞免疫器官的發(fā)育，F(xiàn)B 10×組脾臟指數(shù)從3日齡到9日齡表現(xiàn)為先驟增后驟減的變化趨勢(shì)，說(shuō)明高濃度的氟苯尼考可能先引起脾臟的水腫，之后可能引起脾臟的萎縮，而脾臟和法氏囊等免疫器官的不正常發(fā)育會(huì)使動(dòng)物的免疫力降低，增加疾病的易感性。

因此，避免添加和使用抗生素，尤其避免不規(guī)范使用飼用抗生素，應(yīng)該使用復(fù)合微生態(tài)制劑逐步取代飼用抗生素，回歸抗生素的治療功效，對(duì)提高動(dòng)物的免疫性能、促進(jìn)動(dòng)物的健康水平意義重大。

4 結(jié)論

使用抗生素作為開(kāi)口藥能夠顯著抑制脾臟和法氏囊的正常發(fā)育，降低免疫器官指數(shù)；抗生素使用的濃度越高，對(duì)肉雛雞免疫器官的抑制作用越明顯；在幼齡動(dòng)物上使用復(fù)合微生態(tài)制劑與使用飼用抗生素相比，具有明顯的優(yōu)勢(shì)，可以促進(jìn)肉雛雞的免疫器官發(fā)育，防止免疫器官受損，增強(qiáng)肉雛雞的免疫力。

[1]張春揚(yáng)，牛鐘相，常維山，等.益生菌劑對(duì)肉用仔雞的營(yíng)養(yǎng)、免疫促進(jìn)作用[J].中國(guó)預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報(bào),2002,24(1):51-54.

[2]馮國(guó)華，梁雪霞.益生素、寡聚糖在肉雞生產(chǎn)中對(duì)抗生素替代能力的研究[J].糧食與飼料工業(yè),2000(8):30-31.